简介:摘要目的研究抑制小鼠肺组织CD47表达对放射性肺损伤的缓解作用,并探讨相关机制。方法健康雌性C57BL/6小鼠60只,随机分为正常组、空白组(仅全肺照射)、阴性组(全肺照射+气管滴注含无义序列shRNA的腺相关病毒)及阳性组(全肺照射+气管滴注含抑制CD47表达shRNA的腺相关病毒)。胸部照射后24 h、4周、12周,取其新鲜血,用RT-PCR法测定CD47 mRNA表达水平、碱水解法测定羟脯氨酸含量,免疫组织化学法检测兔抗小鼠微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平。血清冻存ELISA法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果RT-PCR法结果显示小鼠肺组织CD47 mRNA相对表达水平阳性组较阴性组、正常组、空白组低(24 h:P值均<0.001;4周:P值分别为<0.001、0.003、0.001;12周:P值分别为0.009、0.002、0.005)。除阳性组外的三组CD47 mRNA表达差异不明显(P值均>0.05);各组内CD47 mRNA的表达并未随时间的变化而有明显差异(P值均>0.05)。照射后24 h、4周、12周空白组和阴性组较正常组小鼠血清内TGF-β1含量升高(空白组,P值分别为<0.001、0.003、0.003;阴性组,P值分别为0.001、0.021、0.034)。同时,阳性组的血清TNF-α(照射后24 h、4周、12周P值分别为0.022、<0.001、<0.001),空白组的羟脯氨酸含量(照射后4周、12周P值分别为0.002、<0.001)均较正常组明显升高。免疫组织化学示:照射后24 h较4周、12周小鼠肺组织LC3表达量高(P值均<0.001),阴性组及空白组差别不明显(P>0.05)。结论抑制CD47表达可减轻放射导致的肺炎及肺纤维化程度,其机制与自噬作用的增强有关。CD47有望成为缓解放射性肺损伤的新靶点。
简介:摘要目的从人结直肠肿瘤组织中分离培养CD47阳性肿瘤细胞并研究其免疫学特性。方法无血清培养法对原代培养细胞进行筛选培养,采用有限稀释法筛选分离具有连续克隆能力的单细胞,流式细胞仪分选出细胞表面标记CD47阳性的细胞亚群;分离正常人外周血T淋巴细胞经PHA活化,实验分为3组①空白对照组,②与CD47阳性肿瘤细胞(110)共培养组,③抗CD47单克隆抗体组(1μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml);MTT法检测培养72h后各组T细胞的增殖水平,ELISA法测定各组细胞培养液中IL-12、IFN-γ、TNF-α的表达量。结果三例原代培养的肿瘤细胞在无血清培养基中能够形成肿瘤球并获得可持续传代的克隆细胞;能够形成肿瘤球的原代培养细胞中CD47阳性细胞所占比例分别为99.8%,97.2%和99.9%;与活化的人T淋巴细胞共培养,加入(10μg/ml和20μg/ml)抗CD47单克隆抗体组比CD47阳性细胞组T细胞具有较强的增殖能力(P<0.05),20μg/ml浓度组与10μg/ml浓度组比较无统计学差异(P>0.05);ELISA检测CD47阳性细胞组培养液中IFN-γ含量较空白对照组明显降低(P<0.05),而IL-12、TNF-α的表达量与空白对照组比无明显差异(P>0.05)。结论人结直肠肿瘤CD47阳性细胞亚群能抑制活化的T淋巴细胞增殖并抑制其释放IFN-γ,为结直肠癌的靶向治疗提供实验依据。
简介:目的:验证长期中度跑步运动是否能够改善小鼠学习记忆行为的表现,且是否与小鼠海马区CD47高表达有关。方法:选取40只11周龄的雄性BALB/c小鼠,随机将其分到运动组和对照组,并做2个重复实验。第1重复实验,运动组的动物接受不同时间(2、3、4周)的长期跑步运动训练,并且在最后一次运动训练后0.24h处死。参照SRERE的方法测定柠檬酸合酶活性,利用皮质酮ELISA试剂盒来测定小鼠血清中肾上腺皮质酮的浓度,利用WESTERNBOLT测定CD47蛋白表达的变化。第2重复实验,通过避暗实验观察大鼠恐惧学习能力的行为表现。结果:经过4周长期运动训练后,运动组柠檬酸合酶活性增加,避暗实验的行为表现获得改善;在最后一次运动后0h雄性BALB/c小鼠海马回中CD47蛋白质表达增加,且CD47蛋白质表达量水平可维持超过24h。结论:长期运动可加强雄性BALB/c小鼠恐惧记忆的形成,能够改善恐惧学习记忆能力;同时能刺激海马区CD47的表达稳定上升,且具有运动时间的依赖性。
简介:目的探讨CD47在急性髓细胞白血病NOD/SCID小鼠模型中的预后意义及靶向治疗的最佳策略。方法将分选的CD34+CD38-白血病干细胞(leukemiastemcells,LSCs)移植入NOD/SCID小鼠体内,建立小鼠急性单核细胞白血病模型;抗人CD47单克隆抗体单独或联合阿糖胞苷治疗白血病小鼠7~14d,并进行疗效分析。将LSCs与小鼠巨噬细胞在含抗CD47单克隆抗体的培养液中共培养,观察CD47对巨噬细胞吞噬LSCs能力的影响。结果THP-1细胞中存在CD34+CD38-LSCs,比例约为0.12%±0.06%,将分选后的CD34+CD38-LSCs(比例高达97.0%±1.7%)移植入NOD/SCID小鼠后成功建立白血病模型。体内实验表明,阿糖胞苷(7d)联合抗CD47单克隆抗体(14d)治疗后,白血病小鼠外周血和骨髓中CD33+CD45+白血病细胞下降最明显(P〈0.01),生存时间明显长于其它各组。体外共培养2h后,抗CD47单克隆抗体组吞噬指数(76.9%±12.2%)明显高于抗CD45单克隆抗体组(7.60%±2.4%,P〈0.01)。结论CD47高表达是急性髓细胞白血病的预后不良因素。阿糖胞苷联合抗CD47单克隆抗体可有效杀灭普通白血病细胞和白血病干细胞,对彻底治愈急性髓细胞白血病具有重要临床意义。
简介:摘要目的探讨新生儿感染时外周血CD64及CD3、CD4、CD8的表达,为新生儿细菌感染的早期诊断和细菌感染时细胞免疫功能的评价提供循证支持。方法应用流式细胞仪定量检测120例感染和非感染新生儿外周血CD64分子及CD3、CD4、CD8的表达变化,并将败血症组患儿的CD64与C反应蛋白(CRP)、白细胞计数及血培养进行比较。结果败血症组CD64为(6.7±2.8),高于局部感染组(4.1±1.4)与非感染组(2.9±0.5),差异有统计学意义(P<0.01);局部感染组CD64高于非感染组,差异有统计学意义(P<0.01)。在诊断新生儿败血症中,CD64灵敏度为86.4%,特异度为87.9%,阳性预测值83.8%,阴性预测值92.0%,均高于CRP,CD64的检测阳性率为87%,高于血培养;败血症组的CD3为(46.3±12.3)%、CD4为(31.0±10.0)%低于局部感染组CD3(62.6±10.3)%、CD4(45.4±10.8)%和非感染组CD3(61.6±11.3)%、CD4(45.4±13.4)%,差异有统计学意义(P<0.05),局部感染组的CD3、CD4与非感染组之间比较,差异无统计学意义差异有统计学意义(P>0.05),各组间CD8差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD64可作为新生儿细菌感染的早期诊断指标,严重细菌感染患儿存在细胞免疫功能紊乱,T淋巴细胞亚群检测对新生儿细胞免疫功能的评价有重要意义。
简介:苏联著名枪械大师卡拉什尼科夫设计的AK-47突击步枪是20世纪人类武装力量的象征之一,被誉为'步枪中的王者'。AK-47因性能可靠、使用方便、价格低廉而风靡世界,它是世界上最优秀的突击步枪之一。步枪之王AK-47突击步枪属于自动步枪,1947年首次面世。与第二次世界大战期间的士兵们使用的步枪相比,其枪身短小、射程较短,很适合近距离的突击作战。它的口径是7.62毫米,可连续发射30发子弹。AK系列步枪是人类历史上制造得最多、被仿造得最多、使用范围最广的枪支。按照美国轻武器