简介：摘要目的构建人乳头状瘤病毒（HPV）16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞（KC），为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞（HFK），利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染HPV16 E6/E7基因，连续培养30代以上，筛选出永生化KC，分为3组：①空白对照组：传代2次的原代HFK；②实验组：传代2次的原代HFK感染LV5-HPV16 E6/E7，感染细胞记录为A0代，感染后以传代次数记录（A1、A2……）；③阳性对照组：HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹实验分别检测空白对照组、实验组、阳性对照组HPV16 E6/E7 mRNA、蛋白及CK14蛋白的表达，CCK-8及Transwell Insert方法检测细胞的增殖及侵袭能力。裸鼠致瘤实验检测实验组A30、阳性对照组SiHa细胞的致瘤能力。结果成功分离原代HFK。LV5-HPV16 E6/E7重组质粒感染原代HFK后，空白对照组细胞无荧光表达，连续传代后出现衰老表现，实验组A30细胞体积、形态较原代HFK无明显变化，且荧光表达率为100%。与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E6 mRNA表达水平显著升高（t值分别为7.12、8.07、6.53、5.66；P值分别< 0.001、< 0.001、= 0.001、= 0.005）；与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E7 mRNA表达水平也显著升高（t值分别为3.20、4.29、3.75、4.22；P值分别为0.024、0.008、0.013、0.014）。空白对照组未见HPV16 E6/E7蛋白的表达，而A30及SiHa细胞可见HPV16 E6/E7蛋白的表达。CCK-8实验显示，实验组A10、A20、A30细胞增殖水平显著高于空白对照组（t值分别为6.49、7.55、9.43；P值分别为0.003、0.002、0.001），而A1的增殖水平与空白对照组比较，差异无统计学意义（t = 2.40，P = 0.074）。Transwell Insert侵袭实验显示，A30不能穿过基底膜，SiHa细胞可穿过基底膜被染成蓝色。裸鼠接种A30细胞2个月后无肉眼可见肿瘤，组织学亦显示无肿瘤形成，裸鼠接种SiHa细胞后可于皮下形成肿瘤。结论通过采用慢病毒技术转染HPV16 E6/E7基因成功建立人永生化角质形成细胞，可作为HPV相关研究中的理想细胞模型。

简介：摘要目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA和高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)检测在液基薄层细胞学检测(TCT)异常的绝经女性宫颈病变筛查中的临床研究。方法本研究为回顾性研究，选取2019年1月至2021年4月北部战区总医院妇产科收治的502例TCT检查结果异常的患者，年龄(56.05±8.46)岁，年龄范围为45~74岁。所有患者进行HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV检测及病理检查。结果502例患者的病理结果中，正常及炎症102例，低度鳞状上皮内病变(LSIL)64例，高度鳞状上皮内病变(HSIL)320例，宫颈癌16例。HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV在不同病理类型的阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.001)，两者在正常及炎症、LSIL中，差异有统计学意义(P<0.001)，在HSIL中，差异无统计学意义(P>0.05)。在病理诊断为LSIL及以下中，HPV E6/E7 mRNA的阳性率(53.1%+39.2%)低于HR-HPV(95.3%+66.7%)，差异有统计学意义(P<0.001)，在HSIL及以上病理结果中，HPV E6/E7 mRNA的阳性率(100%+98.1%)高于HR-HPV(100%+95.6%)，差异无统计学意义(P>0.05)。病理诊断在LSIL及以下与HSIL及以上比较，HPV E6/E7 mRNA的阳性表达率前者低于后者，HR-HPV检测的阳性率前者低于后者，差异均有统计学意义(P<0.001)。HPV E6/E7 mRNA在病理诊断为HSIL及以上病变的特异度[55.4%(92/166)]、阳性预测值[80.9%(330/408)]、阴性预测值[97.9%(92/94)]均高于HR-HPV[22.3%(37/166)、71.4%(322/408)、72.5%(37/51)]，差异有统计学意义(P<0.05)，灵敏度[98.2%(330/336)]低于HR-HPV[98.8%(332/336)]，差异无统计学意义(P>0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA与宫颈病变病理诊断高低有相关性，联合TCT检测在绝经后女性宫颈病变筛查中有较高诊断价值。

简介：摘要目的探讨高危型人乳头状瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA原位杂交技术在宫颈上皮内瘤变（CIN）分级诊断中的应用价值。方法收集四川大学华西第二医院2019年7月至2020年6月组织病理诊断为CIN与宫颈鳞状细胞癌的病例共261例，其中CIN1级60例、CIN2级41例、CIN3级51例、鳞癌72例和形态学正常的宫颈对照组织37例（HPV阴性10例、阳性27例）。将所有病理组织制成组织芯片，分别进行HE染色、HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测及p16免疫组织化学染色，在光镜下完成染色判读，并统计分析其阳性率及阳性模式。结果HPV mRNA原位杂交在CIN1级中主要表现为鳞状上皮基底至中层细胞核与质的点状染色（≤BME）及伴表层细胞内弥散整个核的片状染色（supD），即≤BME+supD模式；在CIN2级中主要表现为基底直至中层之上但未达上皮全层的细胞核与质的点状染色模式（>BME）和部分伴supD染色的模式，即>BME+SupD模式；CIN3级主要表现为>BME模式，且点状染色分布于上皮全层。在CIN1级、2级和3级中，上述3种染色模式差异有统计学意义（P<0.05）。结论HPV mRNA原位杂交技术有助于CIN的准确诊断与分级，且有着比p16免疫组织化学染色更佳的特异性。

简介：摘要：紧急无线电示位标是船舶全球海上遇险和安全系统中的基本配备之一，一旦遇到危险时，可以通过自动或人工的方式发射信号来显示船舶信息以及船位，以便搜救单位迅速响应，及时准备对遇险船舶实施救助，确保海上人身、财产安全，故此本文主要从其工作原理以及技术要求和平时检查保养注意事项等方面进行了重点分析。

简介：摘要：紧急无线电示位标是船舶全球海上遇险和安全系统中的基本配备之一，一旦遇到危险时，可以通过自动或人工的方式发射信号来显示船舶信息以及船位，以便搜救单位迅速响应，及时准备对遇险船舶实施救助，确保海上人身、财产安全，故此本文主要从其工作原理以及技术要求和平时检查保养注意事项等方面进行了重点分析。

简介：摘要：目的：在研究中基于多重实时荧光定量PCR的方法以及相关的技术，来建立一个能够同时对14中高危型人乳头瘤病毒进行检测与分析，来有效地建立一个对癌基因E6/E7mRNA的检测方法。方法：在此次研究中选取我院223例临床样本进行检测与分析，来探究14种高危型人乳头瘤病毒中，不同病毒的E6/E7基因序列，来探究这些基因序列中存在的区域设计特异性，并且结合相对应的反应体系来构建一个高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA的检测方法与系统。在实验中需要结合这些临床样本来利用温核算扩增技术进行高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测，最终来探究其检测结果与宫颈组织病理学检测结果之间是否存在着一致性。结果：在实验中所建立的检测方法，能够在试验检测中将检测限提升更高的程度，并且对于一些常见低危型HPV中也并没有出现交叉检出的情况，使用多重实时荧光定量PCR方法所检测出的结果与Aptima HPV检测结果是具有较好的一致性，并且多重实时荧光定量PCR法中的敏感性为84.0%，特异性更是高达94.4%阴性预测值比阳性预测值高出更多，高达97.9%，而阳性预测值仅为65.6%。结论：使用多重实时荧光定量PCR法进行检测有着特异性好、稳定性好以及灵敏性高等等优势，能够在为高危型人乳头瘤病毒的患者提供一个更好的诊断方案以及技术平台。

简介：无

简介：摘 要：在炼油化工生产装置中，换热器应用广泛、数量巨大，在生产运行中作用十分重要。实际工作中，二套ARGG E1021D/6、7换热器维护和检修质量的高低，对生产装置平稳运行的影响也非常大。基于此，本文在分析二套ARGG E1021D/6、7换热器维护、检修技术的基础上，做出进一步的论述。

简介：  摘要:世界各国科技蓬勃发展的今天我国对于人才培养的期盼逐项增加，新一轮课程改革也在这样的殷殷期盼中发展，学生的主体地位越来越重要，因此提高生物课堂培养学生能力的水平势在必行。"7E"教学模式是在"5E"教学模式的基础上进一步发展而来,"7E"教学模式共包含七个教学环节,教学环节之间环环相扣且注重突出学生的主体地位。若能适当的在教学中运用"7E"教学模式,那无疑会对现阶段的中学生物课堂教学效果起到促进作用,本文就从以下五个方面提出"7E"教学模式在中学生物学教学中的作用。

简介：摘要目的探讨靶向B细胞淋巴瘤的分子探针131I-ch4E5的制备方法及其对荷人B细胞淋巴瘤裸鼠的抑瘤作用。方法采用Iodogen法用131I标记抗CD80的人-鼠嵌合抗体ch4E5，采用放射性薄层色谱扫描法测定标记率和放射化学纯度。（1）体外实验：在含细胞数为1×108、1×109、1×1010、5×1010、1×1011个/L的人B细胞淋巴瘤Raji细胞的离心管中分别加入131I-ch4E5溶液，同时设置非特异结合对照管，测量每管沉淀的放射性计数，计算Raji细胞与131I-ch4E5的特异性结合率。（2）体内实验：3只荷瘤裸鼠尾静脉注射7.4 MBq的131I-ch4E5，72 h后处死，分别取肿瘤、血等14种脏器或组织，分别计算肿瘤与正常组织的放射性比值（T/NT）；将15只荷瘤裸鼠按随机数字表法分为3组，分别经尾静脉注射131I-ch4E5（131I-ch4E5组）、未标记的ch4E5(ch4E5组）及生理盐水（对照组），观察3组荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况，给药后第15天计算肿瘤生长抑制率；之后处死荷瘤裸鼠取肿瘤组织，采用苏木精-伊红染色法做组织病理学检查。2组间的比较采用两独立样本t检验。结果131I-ch4E5的标记率为（84.2±2.4）%、放射化学纯度为（97.1±1.1）%。（1）体外实验：131I-ch4E5与Raji细胞的结合率随细胞数量的增加而升高，最大结合率为（38.2± 2.3）%。（2）体内实验：131I-ch4E5在荷人B细胞淋巴瘤裸鼠体内的分布具有靶向性，肿瘤与肌肉的T/NT最大为7.30；与ch4E5组、对照组比较，131I-ch4E5组肿瘤生长减慢，差异均有统计学意义（t=2.889、6.516，均P<0.05）；给药后第15天，131I-ch4E5组肿瘤抑制率为71.7%、ch4E5组为43.4%。组织病理学检查结果同样显示131I-ch4E5的治疗效果更明显。结论自制分子探针131I-ch4E5的标记率及放射化学纯度高，且对荷人B细胞淋巴瘤裸鼠肿瘤生长有明显的抑制作用，为进一步研究131I-ch4E5在放射免疫治疗中的应用提供了实验依据。

简介：摘要焦孔素E蛋白与肿瘤关系密切。焦孔素E通过基因甲基化、基因突变或其他方式参与肿瘤的发生发展。焦孔素E介导的焦亡参与多种肿瘤的药物治疗过程，为肿瘤的药物治疗提供了全新的理论基础。深入研究焦孔素E将为肿瘤的认识、诊治提供一种全新的视角。

简介：摘要：教育作为为国家培育人才的重要途径之一，如何更好的培育国家需要的人才是现阶段教育改革的重要方向。一般“填鸭式”的传统教学模式无法满足正在发展的教育事业。近年来，“7E”教学模式逐渐走进人们视野。“7E”教学模式由7个教学环节组成，教学环节之间逻辑紧密，环环相扣，运用灵活。在中学生物学教学中根据“7E”教学模式的各个环节设计合理的教学活动可以提高学生学习兴趣，培养学生的核心素养，让学生得到全面发展。本文对如何应用“7E”教学模式的7个教学步骤在教学过程中设计教学活动进行分析，希望能更好的发挥“7E”教学模式在教学中的作用，创建氛围更和谐、师生更愉悦、效率更高、学生发展更充分的教学活动。

简介：摘要：在高职院校理论课程教学中，不同专业课程内容在教学引导流程、教学引导侧重点上，需要进行精准划分。5E教学模式强调按照5个基准步骤推进落实整体教学过程，促使教学组织流程更加规范。同时，5E教学法背景下的教学流程也有更强的逻辑性，能够确保专业课程教学质量水平获得显著提升。本文以《电机及拖动基础》职业技术教育课程为例探讨5E教学模式在高职院校这一专业理论课教学中的应用。通过本文实践分析可知，课程教学中可通过在真实情境中提出问题吸引学生注意力、通过在实践教学中进行指导，培养学生探究能力、通过以学生为主体的辅助解释，促使学生自主获得新知识、通过进一步引导拓展，帮助学生掌握迁移学习方法、通过最终鼓励性评价，引导学生实现有效反思。以系统化教学引导流程，促进5E教学模式，在高职理论课堂教学中取得良好应用效果。

简介：摘要：2P5E教学模式，该模式是一种以学生为本的教学模式，结合了探究教学和问题导向的方式，力求提高课堂效率。本文首先介绍了2P5E教学模式，然后在此基础上将该模式与中学物理课堂相结合，并提出了一些可行的实施策略。本文将该模式的几个主要环节进行说明，从几个方面探索了2P5E模式的如何运用在中学物理课堂的方式。在每个策略之后，都列举了可行的例子，并对中学物理教学提出了一些实施建议。

简介：摘要：分析“５Ｅ”教学模式的理论知识，结合初中物理实验的特点，提出调整“５Ｅ”教学模式环节的顺序，并以测量平均速度教学设计为例，阐述了调整后的“５教学模式在初中物理实验教学中探索与实践。

简介：摘要分析1例怀疑由免疫球蛋白G（IgG）抗-E抗体引起的新生儿溶血病。患儿ABO血型为O型，Rh血型分型为CcDEe，其母亲ABO血型为A型，Rh血型分型为CCDee，排除ABO、RhD溶血。对患儿外周血进行新生儿溶血三项实验，发现存在与患儿不相容的抗体，对患儿血浆、患儿红细胞放散液及其母亲血浆不规则抗体筛查及抗体特异性鉴定，结果均为IgG-E。该患儿溶血病由母体的IgG-E抗体引起，且因产前未进行不规则抗体筛查而未被发现。提倡孕妇产前进行不规则抗体筛查，有助于预防或早期诊断新生儿溶血，早期干预，减少围产儿并发症的发生。

简介：摘要∶通过分析以海阳核电代表的AP1000三代核电技术1E级仪表响应时间的需求，研究了国内目前存在的实施标准及国内的测试方法，结合国外变送器响应时间标准及海阳核电站实施1E级仪表响应时间的测试结果，对压力和差压变送器、RTD以及堆芯补水箱磁浮筒液位计的响应时间测试的方法进行了分别讨论。根据噪声法、斜坡法以及LCSR响应时间测试法原理分析，论证了响应时间原位测量技术的合理性，从而有效地检查传感器的真实性能,提前识别潜在的性能降级,避免因传感器性能降级导致的安全系统误动和拒动,从而保证核电厂关键参数的测量准确可靠,系统安全、经济运行。

简介：摘 要

简介：摘要：煤矿的安全生产管理也一直以来是国家和社会关注的重要问题，如何做好煤矿开采安全管理尤其是综采工作面的安全生产管理，是长期以来煤矿管理人员密切关注的重要课题。本文针对天欣煤矿1E1302采面安全管理存在的主要问题，分析加强安全管理的具体措施。

简介：  摘要：高校书法教学的开展，对于提升大学生综合素质具有积极作用。如何培养学生书法教学能力一直是高校专业教师不断探索的课题。“5E”教学模式是一种能够激发学生学习兴趣的有效途径，其主要包含参与(Engage)、探究(Explore)、解释(Explain) 、迁移(Elaborate)、评价(Evaluate) 五个阶段。该模式注重培养学生探索、合作、参与和实践能力，是较为有效的教学模式之一。基于此，本文探讨了“5E”教学模式在高校书法教学能力培养中的应用策略。