简介：摘要目的探讨LncRNA-TUG1在脂多糖（LPS）诱导的小肠黏膜上皮细胞损伤中的作用和机制。方法使用LPS处理HIEC-6人类小肠黏膜上皮细胞24 h构建脓毒症损伤模型。全转录组RNA测序分析LPS处理后HIEC-6细胞中的mRNA、microRNA及lncRNA表达变化。实时荧光定量（qRT-PCR）及western blot检测LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p（miR-132-3p）、SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达在LPS处理后HIEC-6细胞中的表达变化。体外转染技术改变LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p及SIRT1的表达水平。qRT-PCR及western blot分析LncRNA-TUG1对miR-132-3p及SIRT1的表达调控。CCK-8及流式细胞术分析LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1对HIEC-6细胞增殖和凋亡的影响。双荧光素酶报告分析验证LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1之间的靶向关系。统计学分析采用SPSS 17.0进行，两组间的差异比较采用独立样本t检验。结果RNA测序结果显示LPS处理后的HIEC-6细胞中出现LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低（t=3.26，P<0.05以及t=2.55，P<0.05），但是miR-132-3p表达升高（t=4.12，P<0.05）。在体外细胞实验中，LPS处理后HIEC-6细胞后，LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低（t=5.69，P<0.05以及t=5.712，P<0.05），而miR-132-3p表达升高（t=3.88，P<0.05）。LncRNA-TUG1过表达能够增加LPS处理后细胞的增殖率（t=6.55，P<0.05）同时降低其凋亡率（t=3.94，P<0.05）。上调LncRNA-TUG1可以降低miR-132-3p的表达（t=4.66，P<0.05），同时增加SIRT1 mRNA（t=3.91，P<0.05）及蛋白的水平。转染miR-132-3p mimic可以抑制SIRT1 mRNA（t=4.08，P<0.05）及蛋白的水平。在LPS处理的细胞中，与仅转染pcDNA3.1-LncRNA-TUG的细胞相比，共转染miR-132-3pmimic和siRNA-SIRT1的细胞增殖率较低（t=4.55，P<0.05以及t=5.67，P<0.05），凋亡率较高t=3.90，P<0.05以及t=4.22，P<0.05）。结论lncRNA-TUG1可能作为ceRNA调控miR-132-3p /SIRT1从而减轻LPS造成的HIEC-6细胞损伤。干预lncRNA-TUG1/microRNA-132-3p/SIRT1调控通路可能成为防治脓毒症引起小肠损伤的潜在策略。

简介：摘要目的探讨miR-224在脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的作用及机制。方法分离清洁级BALB/c小鼠(购自浙江大学实验动物中心)原代PMVEC并体外培养，使用1.0 mg/L LPS处理PMVEC以诱导细胞损伤。通过转染miR-224抑制序列或p21的小干扰RNA(siRNA)序列分别下调PMVEC的微小RNA-224(miR-224)及p21表达水平。采用细胞计数试剂盒法及流式细胞仪检测PMVEC的细胞活力变化及凋亡率变化。实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测PMVEC的miR-224及p21表达水平。使用双荧光素酶报告实验分析miR-224及p21的靶向关系。两组间的均数比较采用t检验，多组间的均数两两比较在采用单因素方差分析基础上使用最小显著差异法(LSD)检验。结果与未经任何处理的PMVEC比较，LPS处理后细胞相对细胞活力降低至(42.333±7.586)%，凋亡率提高至(32.141±2.449)%，miR-224表达增加至1.791±0.167，p21 mRNA水平降低至0.527±0.058，以上差异有统计学意义(t＝8.532、7.261、7.113及8.467，P值均<0.01)。与单纯LPS处理的细胞比较，miR-224下调的细胞在LPS处理后的相对细胞活力增加且凋亡率显著降低，差异有统计学意义(F＝62.618、32.643，P<0.01)。抑制p21表达会消除miR-224下调带来的这种保护作用。结论miR-224可能通过靶向抑制p21参与调控LPS诱导的PMVEC损伤。抑制miR-224可能有助于脓毒症后急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的防治。