手足口重症病例特征及其病原型鉴定

手足口重症病例特征及其病原型鉴定

朱琳

无锡市锡山区中医院检验科214100

【摘要】目的：对2016年1月至2017年7月我院80例手足口重症患儿进行回顾性分析，旨在总结其病理特征，并通过其病原型鉴定，掌握其分型特点，为手足口重症患儿治疗提供数据基础。方法：收集2016年1月至2017年7月我院80例手足口重症患儿进行研究，采集所有患儿咽拭子标本并提取病毒RNA，利用实时荧光RT-PCR初筛肠道病毒核酸，鉴别病原型EV71与CoxA16，对非CoxA16与非EV71基因型EV进行RT-nPCR检测，且在加入VP4区测序引物后进行病原型鉴别。结果：80例手足口重症患儿进行咽拭子标本PCR检测，EV核酸阳性者占78.75%，阴性者占21.25%，对17例非CoxA16与非EV71基因型EV进行RT-nPCR检测，均扩增目标片段，且在加入VP4期测序引物后，15例患儿非CoxA16与非EV71基因型EV均进行有效的病原型鉴别，其病原型分别为CoxA10型与CoxA5型各3例，CoxA2型、CoxA4型、CoxA6型、CoxB5型、Echoll型各2例，鼻病毒1例。结论：结合PCR与RT-PCR检测结果，可见手足口重症患儿感染的肠道病毒主要以EV71为主要感染型。

【关键词】手足口；重症病例；特征；；病原型

手足口病是婴幼儿童期常见的因不同肠道病毒感染引起的传染性疾病，多数患儿呈现发热、手部、足部以及口腔等部位轻微皮疹、疱疹等症状，少数严重者会发生脑炎、脑膜炎、心肌炎、肺水肿等严重并发症，且病情进展迅速极易造成患儿死亡[1]。早期如何简单、快速的进行病原学诊断并高效的采取临床治疗措施是保证手足口重症患儿生命安全的关键。本文作者对2016年1月至2017年7月于我院确诊并接受治疗的80例手足口重症患儿进行回顾性分析总结，旨在总结其病理特征，并通过其病原型鉴定，掌握其分型特点，为手足口重症患儿治疗提供数据基础。

1资料与方法

1.1一般资料

收集2016年1月至2017年7月于我院确诊并接受治疗的80例手足口重症患儿进行研究，入选患儿年龄处于6个月至6岁范围内，男38例，女42例，所有患儿均为散居，且临床诊断符合手足口重症患儿相关确诊标准，多因未及时接受合理的诊治使其病情加重而转诊于我院。

1.2方法

采集所有患儿咽拭子标本于4℃环境保存，并及时送检实验室，于标本采集的12小时内进行手足口病肠道病毒病原核酸检测。（1）利用涡旋振荡器将病毒标本进行限时30s震荡处理，并离心分离取上清液，利用RNA专用提取试剂盒提取标本中的病毒RNA。（2）利用实时荧光RT-PCR初筛肠道病毒核酸，鉴别病原型EV71与CoxA16，检测仪器为ABI快速7500型实时荧光PCR仪，检测结果评判标准：EV（-）、CoxA16（-）、EV71（-），则为非EV；EV（＋）、CoxA16（-）、EV71（-），则为非CoxA16、非EV型；EV（＋）、CoxA16（-）、EV71（＋），则为EV型；EV（＋）、CoxA16（＋）、EV71（-），则为CoxA16型。（3）利用肠道病毒VP4区OL68-1、MD91、EVP4分型引物对非CoxA16、非EV型进行RT-nPCR鉴别，并将其PCR产物置于2%琼脂糖凝胶进行电泳鉴定，目标扩增片段大小657bp。并利用3730测序仪对目标产物进行序列测定，比对确定病原型。

1.3数据处理

采用SPSS系统软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差形式表达，计数资料以n（%）形式表达，组间比较使用χ?检验。p＜0.05即表示差异有统计学意义。

2结果

2.1实时荧光RT-PCR初筛结果

阴性有17例，占21.25%，EV核酸阳性有63例，占78.75%，其中CoxA16（＋）患者有4例，占5%，EV71（＋）患者有30例，占37.5%，非EV71与非CoxA16型患者17例，占21.25%。

2.2RT-nPCR检测与电泳鉴别

17例非EV71与非CoxA16型病毒经RT-nPCR检测与电泳鉴别，均扩增目标片段，即657bp。

2.3病毒测序与病原型鉴别

以OL68-1、MD91、EVP4作为测序引物，利用测序仪对RT-nPCR产物进行测序，测序成功者共有15例，比对GenBank核苷酸序列BLAST，确定其病原型为：CoxA10型与CoxA5型各3例，CoxA2型、CoxA4型、CoxA6型、CoxB5型、Echoll型各2例，鼻病毒1例。

3讨论

临床手足口病共分4期，分别为皮疹、疱疹性咽峡炎期、脑炎期、心血管功能衰竭期、恢复期[2]。当患儿有神经系统体征或临床表现时即表示病情发展至第二期，此期患儿救治不及时，极易发展至第三期，发生难以逆转性心功能衰竭，危及患儿生命安全。所以，针对手足口病诊治的关键即及时、快速、正确的甄别重症患儿并积极进行科学的临床治疗。对手足口病患儿病原型进行快速准确的鉴别可以有针对性的为临床合理高效的治疗提供参考，同时增加临床医护工作者对手足口病病原型了解程度，为手足口防治工作提供科学的病原学基础。

临床利用PCR检测法快速进行肠道病毒基因型EV71与CoxA16鉴定，且EV71与CoxA16是手足口病患儿感染的主要肠道病原[3]，此次研究显示80例手足口重症患儿进行咽拭子标本PCR检测，EV核酸阳性者占78.75%，阴性者占21.25%，分析患儿阴性原因可能采集患儿咽拭子标本时患儿病情未发展至重症期造成的。

此外，RT-PCR半巢式检测法可以利用VP4区系列分型引物（OL68-1、MD91、EVP4）对非CoxA16与非EV71基因型EV进行病原型鉴别，在能够确保PCR扩增效率的同时，较常规PCR检测法灵敏度更高[4]。此次研究显示，对17例非CoxA16与非EV71基因型EV进行RT-nPCR检测，均扩增目标片段，且在加入VP4期测序引物后，15例患儿非CoxA16与非EV71基因型EV均进行有效的病原型鉴别，其病原型分别为CoxA10型与CoxA5型各3例，CoxA2型、CoxA4型、CoxA6型、CoxB5型、Echoll型各2例，鼻病毒1例。

本研究结合PCR与RT-PCR检测结果，可见手足口重症患儿感染的肠道病毒主要以EV71为主要感染型，且更容易造成患儿中枢神经系统损伤。

参考文献：

[1]刘发娣，周红平，余华等.南昌地区儿童手足口病病原型别及其流行特征分析[J].临床检验杂志，2016，34（9）：714-716.

[2]王翔军，徐国强.临沂市手足口病肠道病毒核酸检测及流行病学特征分析[J].中华医院感染学杂志，2013，23（14）：3443-3445.

[3]李颐，居丽雯，蒋露芳等.2007-2010年上海市静安区儿童手足口病情况分析和病原学研究[J].中华疾病控制杂志，2012，16（8）：690-693.

[4]吉彦莉，王永全.手足口病重症病例特征分析及其病原型别分子鉴定[J].现代预防医学，2012，39（11）：2817-2819.