冷沉淀凝血因子收集虹吸法与夹板法的比较

冷沉淀凝血因子收集虹吸法与夹板法的比较

李润群范彩辉

湖南省岳阳市中心血站成分室湖南岳阳414000

摘要：目的评价夹板法和虹吸法制备冷沉淀凝血因子质量。选择合适的冷沉淀凝血因子制备方法。方法：利用全自动凝血分析仪CA-620检测冷沉淀凝血因子中VⅢ因子和纤维蛋白原的含量。结果：夹板法和虹吸法收集VⅢ因子含量（IU/400ml全血），平均为86.2IU±4.1IU/400ml全血和103.8IU±7.0IU/400ml全血，两者合格率均为100%，但虹吸法比夹板法制备收集的VⅢ因子含量更高。夹板法和虹吸法收集VⅢ因子含量（IU/400ml全血）的差异有统计学意义（P<0.05）；夹板法和虹吸法收集纤维蛋白原的含量（mg/400ml全血）平均为181mg±5.0mg/400ml全血和186.5mg±5.3mg/400ml全血，两者合格率均为100%，但虹吸法比夹板法制备收集的纤维蛋白原含量更高。夹板法和虹吸法收集纤维蛋白原含量（mg/400ml全血）的差异有统计学意义（P<0.05）。

结论：冷沉淀凝血因子的收集方法虹吸法要优于夹板法，值得推广。

关键词：冷沉淀凝血因子虹吸法夹板法质量对比

正文引言《全血及成分血质量要求》GB18469-2012冷沉淀凝血因子为临床中一种常用的血液成分，通常以特定方法将处在保存期内的新鲜冰冻血浆进行融化，融化温度控制在1~6℃，大部分血浆由此分离，剩余的冷不溶解物质在1小时内进行速冻，并呈现固态。就目前情况来讲，我国各地血站收集冷沉淀凝血因子的方法包括虹吸法和夹板法两种。为了分析虹吸法和夹板法两种收集方法的优劣，本次研究分别应用上述方法各收集100袋制品规格的冷沉淀凝血因子，并进行质量检测，详细报告如下文所示。

1、材料与方法

1．1新鲜冰冻血浆来源本血站血液采集时间均控制在13min之内，采血量为400ml。采集后14小时内分离出的新鲜冰冻血浆，并马上放入血浆速冻机速冻，机器速冻温度在-50℃以下。而后将其移至-18℃以下冷柜中保存。制备冷沉淀凝血因子所需的新鲜冰冻血液冷冻时间在24小时以上。

1.2仪器、试剂和耗材

1.2.1仪器大型冷冻离心机Thermo6000i赛默飞世尔科技有限公司生产；热合机SE250韩国森通公司生产；数字控制水浴式血浆融化箱CT-4T.6C深圳市达科为医疗科技有限公司生产；自制双排20钩的不锈钢虹吸挂架；FJ-Ⅱ型血液分浆夹苏州市医用仪器厂生产；全自动凝血分析仪CA-620希森美康公司生产；六盘配平仪V型山东威高集团生产；平板式血浆速冻机BSSD-III-01武汉贝索医疗器械有限公司生产；低温操作台RL-T.RL-G上海若骊生物科技有限公司生产。

1.2.2试剂VⅢ因子和纤维蛋白原含量测定均使用希森美康公司生产的VⅢ因子含量测定试剂、纤维蛋白原的含量测定试剂，均有效期内使用。

1.2.3耗材一次性白细胞除滤五联采血袋(抗凝剂为CPDA-1)山东威高集团生产，在有效期内使用。

1.3方法

1.3.1在将数字控制水浴式血浆融化箱中放入新鲜冰冻血浆袋，并在箱外悬放另一空袋，其位置比血浆袋低，使两袋之间形成一定的高度落差。

1.3.2用离心法制备冷沉淀凝血因子。

1.3.2.1当新鲜冰冻血浆基本融化时，取出血浆。

1.3.2.2将新鲜冰冻血浆平衡对称放入预先降温的离心机内,3000转/分、4℃、10分钟、加速9、减速6离心。

1.3.2.3将符合1.1的新鲜冰冻血浆分成两个对比组第一组置于虹吸挂钩。工作人员平均用时1分钟左右挂满第一层挂钩10袋新鲜冰冻血浆。第二组置于分浆夹上，工作人员平均用时7分钟左右将10袋新鲜冰冻血浆上到分浆夹上。在空袋内存放大部分上层血浆制成冰冻血浆。剩余的20～30ml血浆与沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。

1.3.2.4将冷沉淀凝血因子水平摇动10次以上，充分混匀后排样留取样品做检测。将冷沉淀凝血因子袋和冰冻血浆袋热合断离。

1.3.2.5在分离后一小时内，将其快速置于-50℃低温速冻机内冻结。

1.3.3每组留取的样品，严格按全自动凝血分析仪和试剂操作说明书进行检测。

1.3.4质量标准按照《全血及成分血质量要求》GB18469-2012规定，由400ml全血收集的冷沉淀凝血因子（IU）：纤维蛋白原含量不低于每袋150mg，VⅢ因子含量不低于每袋80IU，符合质量标准则为合格。

1.4统计学方法

采用SPSS16.0系统软件进行分析；采用配对t检验进行统计分析。以双侧P<0.05认为有统计学意义。

2、结果

2.1用虹吸法、夹板法两种收集方法制备冷沉淀凝血因子纤维蛋白原含量和VⅢ因子含量检测结果如表1所示。两种方法制备冷沉淀凝血因子CV（%）值如表2所示。

注：P<0.05

2.2虹吸法和夹板法收集冷沉淀凝血因子其两种指标合格率比较夹板法和虹吸法制备冷沉淀的VⅢ因子含量（IU/400ml全血），平均为86.2IU±4.1IU/400ml全血和103.8IU±7.0IU/400ml全血，两者合格率均为100%,且虹吸法比夹板法制备收集的VⅢ因子含量更高。夹板法和虹吸法制备冷沉淀凝血因子纤维蛋白原的含量（mg/400ml全血）平均为181mg±5.0mg/400ml全血和186.5mg±5.3mg/400ml全血，两者合格率均为100%，但虹吸法比夹板法制备收集的VⅢ因子含量更高

3、讨论，不下结果。

冷沉淀凝血因子临床可以用于治疗凝血因子和纤维蛋白原缺乏导致的出血性疾病、甲型血友病或因为创伤、手术原因导致的机体凝血机制障碍，补充机体凝血因子Ⅷ、vWF、纤维蛋白原、因子XIII等。所以冷沉淀凝血因子的质量优劣非常重要。这也对临床相关制备和收集方法提出了更高的要求。离心后可以使用虹吸法、夹板法、全自动血液成分分离机收集的冷沉淀凝血因子。根据《两种方法制备冷沉淀凝血因子质量比较》[4]使用全自动血液成分分离机收集冷沉淀凝血因子效果最好，但使用全自动血液成分分离机制备需要一次性投入费用过高，难以在全国各个血站普及。而虹吸法收集的VⅢ因子、纤维蛋白原含量比夹板法要高、制备收集时间相对要短。再者，夹板法使用到的夹板、虹吸法使用到的虹吸挂架都要在工作结束前后用500mg/L的“84”消毒液进行擦拭，再用清水擦拭。日常消毒、清洁工作易造成夹板的腐锈，后者反而更简便无消耗。综上所述，虽然两种方法收集的冷沉淀凝血因子质量均可达到GB18469-2012《全血及成分血质量要求》，但虹吸法收集的VⅢ因子、纤维蛋白原含量要高于夹板法、工作效率要高于夹板法，建议血站日常收集冷沉淀凝血因子采用虹吸法。值得推广使用。

参考文献：

1、《全血及成分血质量要求》GB18469-20125.1.812

2、《血站技术操作规程》20153.10.211

3、李静旗，张丽，宫本兰，等。冷链对新鲜冰冻血浆FⅧ活性的影响[J]。临床输血与检验，2003，5（3）：192-193.

4、李梦秋，李玉兰。两种方法制备冷沉淀凝血因子质量比较。1671-2587（2014）02-0214-02

5、余鼎，杨宇，牟蕾，赵磊，李伟。两种方法制备冷沉淀的比较研究。201511-1372-03

6、毕承恩，杨婷，马佩琴，罗晓梅，欧阳克梅，程勤，郭琼。冷沉淀凝血因子制备技术的应用研究。2017.001.27.04