简介:目的研究补肾中药血清对离体SD大鼠成骨细胞中Smad1/5活性的变化。方法采用多次胶原酶消化法获取新生SD大鼠颅盖骨中的成骨细胞进行体外培养,并应用Gomori改良钙钴法对其进行碱性磷酸酶表达的鉴定;随机将实验用大鼠分为正常组、补肾中药组(补肾组)、骨疏康颗粒对照组(骨疏康组)、补中益气颗粒对照组(补脾组);对实验大鼠给药干预8d后,通过血清药理学的方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48h;应用免疫组化SABC方法检测成骨细胞中Smad1/5的活性表达。结果补肾中药血清作用于体外培养的成骨细胞48h后对于成骨细胞的增殖具有明显的促进作用,其效果优于正常组(P〈0.01);成骨细胞中Smad1/5的活性表达,与正常组相比有所降低。结论成骨细胞中存在Smad1/5的表达,表明Smad1/5可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能,对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用。②具有益肾填精壮骨的补肾中药可以影响Smad1/5在成骨细胞中的表达,对于促进和维持成骨细胞的特性及功能具有重要作用,这可能是防治骨质疏松症的机理之一。
简介:摘要目的基于PI3K-AKT信号通路探讨免疫球蛋白样受体2(immunoglobulin-like receptor 2,ILR2)是否通过抑制基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学行为。方法收集2017年9月至2019年3月贵州医科大学附属医院病理科存入的确诊为NSCLC患者的癌组织和癌旁正常肺组织石蜡切片,共48例。采用免疫组织化学染色SP法检测癌组织和癌旁组织中ILR2和MMP-2表达情况。购置NSCLC细胞株,检测各细胞株中ILR2和MMP-2表达水平。转染siRNA敲低ILR2,分析敲低ILR2对H1299细胞增殖、侵袭、转移、凋亡及相关蛋白表达的影响。结果癌组织ILR2和MMP-2阳性表达率显著高于癌旁组织(54.17%比25.00%,58.33%比27.08%,χ2值分别为8.54和9.58,P值均<0.05);H1299细胞株中ILR2和MMP-2表达水平显著高于其他种类NSCLC细胞株,因此将H1299细胞株用于后续研究;沉默组H1299细胞存活率显著低于空白对照组和空载体组[(70.24±13.15)%比(116.24±18.34)%,(70.24±13.15)%比(103.76±20.72)%,t值分别为12.26和11.62,P值均<0.05];沉默组H1299细胞侵袭细胞数目显著少于空白对照组和空载体组[(82.25±9.15)个比(224.18±30.16)个,(82.25±9.15)个比(218.26±28.37)个,t值分别为31.16和34.13,P值均<0.05];沉默组H1299细胞愈合程度显著低于空白对照组和空载体组[(47.26±8.26)%比(60.25±7.25)%,(47.26±8.26)%比(65.24±8.76)%,t值分别为10.25和11.16,P值均<0.05];沉默组H1299细胞凋亡率显著高于空白对照组和空载体组[(29.54±3.17)%比(4.28±1.06)%,(29.54±3.17)%比(3.72±1.01)%,t值分别为7.25和8.16,P值均<0.05];与空白对照组和空载体组比较,沉默组H1299细胞ILR2、MMP-2、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)和苏氨酸蛋白激酶(threonine protein kinase,AKT)蛋白表达水平升高,p53蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(t空白对照组=4.03、3.15、3.82、7.26、5.82,t空载体组=2.25、3.26、4.83、6.25、6.08;P值均<0.05)。结论NSCLC癌组织中ILR2阳性表达率高,敲低ILR2可通过下调MMP-2蛋白表达水平,调控PI3K-AKT信号通路,抑制癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,ILR2有可能成为治疗NSCLC的新靶点。
简介:目的:从光棘球海胆(Strongylocentrotusnudus)中分离纯化具有生物活性的海胆壳蛋白。方法:海胆壳先经丙酮脱脂,然后生理盐水提取、超滤、离心得海胆壳蛋白粗品。粗品经超滤、DEAE—SepharoseFastFlow及SephacrylS-400柱层析纯化得海胆壳蛋白SUP-1A。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱鉴定其纯度达90%以上。通过MTT法测定了SUP-1A的体外抗肿瘤活性。结果:从海胆壳中分离纯化得到单一蛋白组分的SUP-1A,MTT法表明SUP-1A对多种肿瘤细胞的增殖都有较强的抑制作用。结论:从海胆壳中分离纯化到一种蛋白组分SUP-1A,其具有较强的体外抗肿瘤活性。
简介:摘要生物材料角蛋白(HHK)可诱导损伤组织细胞的再生,引起细胞生长分化状态的变化,是具有组织相容性的优良天然生物材料。本研究通过化学法提取HHK,超声波处理HHK水溶液,制得小分子量肽蛋白,MALDI-TOF-MS检测HHK分子量范围,体外MTT检测研究HHK小分子肽蛋白对细胞增殖的影响,流式细胞术检测HKK对细胞周期的影响。结果证明,分子量小于1500Da的HHK蛋白肽段对细胞增殖影响具有浓度依赖特性,对细胞增殖影响最大的HHK肽段浓度为10mg/mL,细胞周期受HHK添加浓度影响。说明HHK分子中蛋白序列具有特异的诱导调控细胞增殖分化的生物活性。
简介:摘 要:目的 研究由大豆分离蛋白粉、大豆肽粉、乳清蛋白粉为原料制得的复合蛋白粉增强免疫力活性作用。方法 根据法规开展增强免疫力功能实验,灌胃给予小鼠0.67 g/kg bw、1.33 g/kg bw、4.00 g/kg bw剂量的复合蛋白粉,共计30天,进行细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能指标及NK细胞活性测定。结果 各剂量组小鼠吞噬鸡红细胞的吞噬指数、吞噬率、NK细胞活性均显著高于阴性对照组(P<0.05)。各剂量组对小鼠体重、脏体比值、迟发型变态反应、淋巴细胞转化能力、半数溶血值(HC50)、溶血空斑数、碳廓清指数无影响(P>0.05)。结论 复合蛋白粉具有良好的增强免疫力活性作用。
简介:目的观察皮肤癣菌的体外蛋白水解酶活性;比较分离自不同感染部位的红色毛癣菌的体外蛋白水解酶活性。方法实验菌株包括来自不同感染部位的红色毛癣菌22株、须癣毛癣菌3株、犬小孢子菌5株,进行体外培养,并利用9-羟基乙酚噻唑标识的酪蛋白和酶标仪检测真菌细胞外蛋白水解酶的活性。结果须癣毛癣菌的体外蛋白水解酶活性高于红色毛癣菌和犬小孢子菌(P〈0.05),而红色毛癣菌和犬小孢子菌之间无差异(P〉0.05)。红色毛癣菌的细胞外蛋白水解酶活性在分离自浅部感染部位的菌株之间无差异(P〉0.05),但高于引起毛癣菌肉芽肿的菌株(P〈0.05)。结论不同的皮肤癣菌体外蛋白水解酶活性可能不同;分离自不同感染部位的同一菌种的体外蛋白水解酶活性也有可能不同。