简介:摘要: 泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径,而去泛素化酶在这种动态的蛋白质双向修饰调控系统内发挥重要作用。泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specifific protease 7,USP7)作为去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)中成员最多的USPs(ubiquitin-specific proteases)家族内的一种,可以调控多种在细胞内发挥重要作用的蛋白质的稳定性,进而在DNA的损伤与修复、表观调遗传的调控、免疫反应和病毒感染等众多病理生理过程中发挥重要作用。本文将对USP7近年来在结构及功能方面的研究进展做一综述。
简介:摘要: 泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径,而去泛素化酶在这种动态的蛋白质双向修饰调控系统内发挥重要作用。泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specifific protease 7,USP7)作为去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)中成员最多的USPs(ubiquitin-specific proteases)家族内的一种,可以调控多种在细胞内发挥重要作用的蛋白质的稳定性,进而在DNA的损伤与修复、表观调遗传的调控、免疫反应和病毒感染等众多病理生理过程中发挥重要作用。本文将对USP7近年来在结构及功能方面的研究进展做一综述。
简介:摘要目的探讨去泛素化酶22(USP22)在乳腺癌组织中的表达及对其恶性细胞生物学行为的影响。方法选取郑州大学第三附属医院2018年9月到2020年1月手术切除的76例乳腺癌和癌旁组织作为研究对象,采用蛋白质组学和蛋白质印迹法(Western blot)分析乳腺组织和癌旁组织的差异表达蛋白及其表达水平。采用慢病毒在乳腺癌细胞MCF-7构建USP22敲降(USP22 KD组)和对照细胞系(对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力;采用划痕实验分析两组细胞迁移能力;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)细胞凋亡检测试剂盒分析两组细胞凋亡水平;采用克隆形成实验分析两组细胞克隆形成能力;采用荧光定量PCR分析两组细胞肿瘤干细胞基因;采用Western blot分析分析两组细胞BMI1蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果癌旁组织USP22蛋白平均表达水平(1.08±0.21)明显高于乳腺癌组织(2.62±0.47),差异有统计学意义(t=26.190,P<0.05)。USP22 KD组细胞吸光度(A)值(1.39±0.17)明显低于对照组(2.10±0.06),差异有统计学意义(t=8.798,P<0.05)。划痕实验结果显示,USP22 KD组细胞迁移数量[(73.40±9.96)个]明显低于对照组[(113.61±11.41)个],差异有统计学意义(t=7.382,P<0.05)。对照组细胞凋亡比例[(3.27±0.56)%]明显低于USP22 KD组[(19.49±2.88)%],差异有统计学意义(t=12.351,P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(75.41±6.77)%]明显高于USP22 KD组[(36.20±4.21)%],差异有统计学意义(t=11.000,P<0.05)。对照组细胞SOX2、OCT4和Nanog mRNA表达水平(1.04±0.10、1.06±0.07、1.06±0.078)明显高于USP22 KD组(0.44±0.08、0.54±0.05、0.52±0.09),差异有统计学意义(t=9.318、12.100、10.030,P<0.05)。癌旁组织BIM1蛋白平均表达水平(1.02±0.18)明显高于乳腺癌组织(2.86±0.42),差异有统计学意义(t=14.790,P<0.05)。对照组细胞BIM1表达水平(2.24±0.16)明显高于USP22 KD组(1.24±0.16),差异有统计学意义(t=9.272,P<0.05)。结论USP22在乳腺癌组织中呈高表达,通过调节BMI1表达调控乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡和干细胞特性。
简介:摘要目的探讨去泛素化酶22(USP22)在食管癌组织中表达水平,分析UPS22对食管癌细胞增殖、上皮-间充质转化、侵袭和转移的影响。方法选取2021年1月到2022年1月河南省人民医院收治的67例食管癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用组织化学分析食管癌和癌旁组织USP22表达水平。采用短发卡RNA(shRNA)技术在人食管癌细胞系SUNE-1中建立USP22敲降细胞系,并建立对照细胞系,分别命名为对照组和USP22 KD组。采用噻唑蓝(MTT)法检测两组细胞的增殖能力;采用蛋白质免疫印迹法检测两组细胞上皮-间充质转化能力;采用Transwell分析两组细胞的侵袭能力;采用异体移植瘤实验分析两组细胞的增殖和转移能力。组间比较采用t检验。结果癌旁组织中USP22表达水平(1.73±0.77)明显低于食管癌组织中USP22蛋白表达水平(2.72±0.52),差异有统计学意义(t=8.694,P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度值(2.02±0.12)明显高于USP22 KD组细胞(1.57±0.16),差异有统计学意义(t=6.031,P<0.05)。对照组细胞在裸鼠体内生长15 d后肿瘤体积(1 219.43±169.61)明显大于USP22 KD组细胞(911.71±146.17),差异有统计学意义(t=3.636,P<0.05)。USP22 KD组细胞上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平(1.39±0.14)明显高于对照组细胞(0.52±0.14),差异有统计学意义(t=11.531,P<0.05);对照组细胞间质标志物波形蛋白(Vimentin)和Slug表达水平(1.22±0.11、1.16±0.13)明显高于USP22 KD组细胞(0.51±0.11、0.39±0.09),差异有统计学意义(t=12.010、13.171,P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(100.14±15.59)个]明显高于USP22 KD组细胞侵袭数量[(48.86±9.84)个],差异有统计学意义(t=7.359,P<0.05)。对照组细胞在裸鼠体内转移数量[(15.29±2.29)个]明显高于USP22 KD组细胞[(6.86±2.27)个],差异有统计学意义(t=6.921,P<0.05)。对照组细胞增强子结合蛋白4(AP4) mRNA表达水平(1.25±0.14)明显高于USP22 KD组细胞(0.40±0.13),差异有统计学意义(t=11.550,P<0.05)。结论USP22蛋白在食管癌组织中呈高表达,通过调节激活AP4转录水平,促进食管癌细胞上皮-间充质转化和转移等细胞生物学特性。
简介:摘要目的观察弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶(SENP)1和小泛素相关修饰蛋白(SUMO)1的表达水平,分析其评估预后的临床价值。方法回顾性分析内蒙古自治区人民医院2017年2月至2020年10月66例DLBCL患者(DLBCL组)的临床资料,另外选择同期60例健康体检者作为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组血清SENP1和SUMO1表达水平。分析SENP1、SUMO1表达水平与临床资料特征的关系;影响患者预后的独立危险因素采用Cox多因素分析。结果DLBCL组SENP1明显高于健康对照组(50.39 ± 6.86比7.47 ± 1.32),SUMO1明显低于健康对照组(8.84 ± 2.13比31.49 ± 5.89),差异有统计学意义(t = 47.640和29.210,P<0.01)。不同临床分期患者SENP1和SUMO1比较差异有统计学意义(P<0.01)。SENP1和SUMO1表达水平与临床分期和国际预后指数(IPI)有关(P<0.05),与年龄、性别、起病部位和临床症状无关(P>0.05)。SENP1高表达患者(30例)3年生存率明显低于SENP1低表达患者(36例),SUMO1高表达患者(38例)3年生存率明显高于SUMO1低表达患者(28例),差异有统计学意义(26.67%比75.00%和73.68%比39.29%,P<0.05)。Cox多因素分析显示,临床分期、IPI、SENP1和SUMO1是影响DLBCL患者预后的独立危险因素(HR = 1.352、1.487、2.048和3.295,95% CI 1.180~1.691、1.187~1.602、2.536~4.023和2.752~5.325,P<0.05或<0.01)。结论在DLBCL患者中,SENP1呈高表达、SUMO1呈低表达,且SENP1和SUMO1表达水平与DLBCL患者临床分期、IPI有关,均是影响患者预后的独立危险因素。
简介:摘要目的观察弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶(SENP)1和小泛素相关修饰蛋白(SUMO)1的表达水平,分析其评估预后的临床价值。方法回顾性分析内蒙古自治区人民医院2017年2月至2020年10月66例DLBCL患者(DLBCL组)的临床资料,另外选择同期60例健康体检者作为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组血清SENP1和SUMO1表达水平。分析SENP1、SUMO1表达水平与临床资料特征的关系;影响患者预后的独立危险因素采用Cox多因素分析。结果DLBCL组SENP1明显高于健康对照组(50.39 ± 6.86比7.47 ± 1.32),SUMO1明显低于健康对照组(8.84 ± 2.13比31.49 ± 5.89),差异有统计学意义(t = 47.640和29.210,P<0.01)。不同临床分期患者SENP1和SUMO1比较差异有统计学意义(P<0.01)。SENP1和SUMO1表达水平与临床分期和国际预后指数(IPI)有关(P<0.05),与年龄、性别、起病部位和临床症状无关(P>0.05)。SENP1高表达患者(30例)3年生存率明显低于SENP1低表达患者(36例),SUMO1高表达患者(38例)3年生存率明显高于SUMO1低表达患者(28例),差异有统计学意义(26.67%比75.00%和73.68%比39.29%,P<0.05)。Cox多因素分析显示,临床分期、IPI、SENP1和SUMO1是影响DLBCL患者预后的独立危险因素(HR = 1.352、1.487、2.048和3.295,95% CI 1.180~1.691、1.187~1.602、2.536~4.023和2.752~5.325,P<0.05或<0.01)。结论在DLBCL患者中,SENP1呈高表达、SUMO1呈低表达,且SENP1和SUMO1表达水平与DLBCL患者临床分期、IPI有关,均是影响患者预后的独立危险因素。
简介:目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a(TNFa)引起的NF-kB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。
简介:摘要:目的:探究泛素结合酶-9对胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用Ubc9基因的质粒对胃癌SGC7901细胞株进行瞬时转染,将实验对象分为:正常胃癌细胞A组(Normal组),脂质体B组(Lipo-2000组),空载质粒C组(NC-shRNA组),及目的质粒D组(Ubc9-shRNA组)。采用qRT-PCR检测各组mRNA水平,Western-blot检测各组Ubc9、α-SMA、Bcl-2蛋白表达结果,流式细胞仪检测各组细胞周期与凋亡结果。结果:1.与各组比较,Ubc9-shRNA组转染后细胞凋亡增加(P < 0.05);2.Ubc9-shRNA组能显著的抑制胃癌SGC7901中Ubc9基因的表达(P < 0.05);3.Ubc9-shRNA组明显抑制SGC7901细胞中Ubc9、α-SMA、Bcl-2蛋白表达(P < 0.05)。结论:Ubc9能抑制SGC7901细胞的增殖,诱导胃癌细胞凋亡。
简介:摘要:目的:探究泛素结合酶-9对胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用Ubc9基因的质粒对胃癌SGC7901细胞株进行瞬时转染,将实验对象分为:正常胃癌细胞A组(Normal组),脂质体B组(Lipo-2000组),空载质粒C组(NC-shRNA组),及目的质粒D组(Ubc9-shRNA组)。采用qRT-PCR检测各组mRNA水平,Western-blot检测各组Ubc9、α-SMA、Bcl-2蛋白表达结果,流式细胞仪检测各组细胞周期与凋亡结果。结果:1.与各组比较,Ubc9-shRNA组转染后细胞凋亡增加(P < 0.05);2.Ubc9-shRNA组能显著的抑制胃癌SGC7901中Ubc9基因的表达(P < 0.05);3.Ubc9-shRNA组明显抑制SGC7901细胞中Ubc9、α-SMA、Bcl-2蛋白表达(P < 0.05)。结论:Ubc9能抑制SGC7901细胞的增殖,诱导胃癌细胞凋亡。
简介:目的:观察针刺对泛素-蛋白酶体途径(UPP)的调控作用,探讨针刺干预海洛因脑损伤的作用.方法:将30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和针刺组.模型组和针刺组大鼠采用连续8d递增量肌肉注射海洛因,染毒后停止肌肉注射海洛因5d,自然戒断.按染毒(成瘾)-脱毒的方法,反复3个阶段,建立海洛因复吸大鼠模型.对照组按照建立海洛因复吸大鼠模型的周期,在染毒期给予大鼠肌肉注射生理盐水,在脱毒期不给予任何治疗;模型组在染毒期给予大鼠连续递增量肌肉注射海洛因,在脱毒期不给予任何治疗;针刺组在染毒期处理与模型组相同,在脱毒期给予针刺百会和大椎治疗,每次留针30min,每天1次,连续5d.于实验第39d取3组大鼠的海马、中脑腹侧被盖区(VTA)脑组织.运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测脑神经细胞的凋亡情况.运用免疫组化法、定量实时PCR(RT-qPCR)法检测泛素(Ub)、泛素蛋白连接酶(E3)、26SmRNA和蛋白的表达.结果:与模型组相比,针刺组大鼠海马、VTA中TUNEL染色阳性细胞数显著减少(P<0.01),Ub、E3、26SmRNA和蛋白表达表达明显减少(P<0.01).结论:减少神经细胞凋亡,调节大鼠海马、VTA区的Ub、E3、26SmRNA和蛋白的表达,可能是针刺干预海洛因脑损伤的作用机制之一.
简介:摘要目的探究泛素结合酶10(UbcH10)对三阴性乳腺癌自噬的调节作用及其作用机制。方法在人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,利用小干扰RNA(siRNA)进行瞬时转染低表达UBCH10基因,转染阴性对照siRNA的细胞作为阴性对照组,未经处理的细胞作为空白对照组。通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后UbcH10的表达。MDA-MB-231细胞的增殖情况及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的表达情况分别用细胞增殖试验(CCK-8)法及Western blot法检测。组间差异采用单因素方差分析和t检验。结果RT-qPCR和Western blot实验结果显示,转染后siUbcH10-1组和siUbcH10-2组UbcH10的mRNA和蛋白的表达水平低于阴性对照组,差异有统计学意义(0.182±0.138比0.917±0.031、0.127±0.136比0.917±0.031,t=9.191、9.876,P<0.001)、(0.430±0.245比0.430±0.245、0.434±0.093比0.434±0.093,t=3.685、3.651,P<0.05),证明低表达细胞株构建成功。CCK-8结果显示,siUbcH10-1组和siUbcH10-2组细胞12、24、48 h的吸光度值均低于阴性对照组(0.160±0.004比0.211±0.004、0.155±0.003比0.211±0.004、0.246±0.006比0.286±0.012、0.202±0.004比0.286±0.012、0.308±0.007比0.432±0.004、0.308±0.013比0.432±0.004,t=14.965、16.423、4.649、9.629、13.737、13.756,P<0.01),差异有统计学意义。Western blot实验结果显示siUbcH10-1组和siUbcH10-2组微管相关蛋白1轻链3BⅡ(LC3BⅡ)/微管相关蛋白1轻链3BⅠ(LC3BⅠ)的比值及AMPK的磷酸化水平高于阴性对照组(4.294±0.812比2.552±0.002、4.554±0.216比2.552±0.002,t=4.033、4.633,P<0.05)、(1.533±0.177比0.564±0.185、1.519±0.263比0.564±0.185,t=4.859、4.792,P<0.05),差异有统计学意义,mTOR的磷酸化水平低于阴性对照组(0.482±0.028比1.153±0.069、0.504±0.072比1.153±0.069,t=8.708、8.433,P<0.05),差异有统计学意义。结论低表达UbcH10可通过抑制AMPK/mTOR信号通路来诱导三阴性乳腺癌细胞发生自噬。