简介：摘要目的探讨白屈菜碱对乳腺癌MCF-7细胞凋亡调控的作用及机制。方法分别以白屈菜碱和二甲基亚砜处理MCF-7细胞作为实验组和对照组。以细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞活性；通过蛋白质印迹法(Western blot)检测p65、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)表达；通过流式细胞术检测细胞凋亡。应用GraphPad Prism 9统计分析，组间比较采用Student’s t检验分析。结果CCK-8显示实验组A450(0.414±0.023)小于对照组A450(1.042±0.190)，差异有统计学意义(t＝5.683，P<0.01)；流式细胞术结果显示，实验组细胞凋亡率[(20.14±3.25)%]高于对照组[(4.12±0.53)%]，差异有统计学意义(t＝8.426，P<0.01)；Western blot结果显示，总蛋白实验组p65表达量(1.526±0.251)与对照组(1.624±0.208)，差异无统计学意义(t＝0.521，P>0.05)，bcl-2表达量(0.486±0.063)低于对照组(0.785±0.098)，差异有统计学意义(t＝4.445，P<0.05)，bax表达量(1.235±0.251)高于对照组(0.426±0.015)，差异有统计学意义(t＝5.572，P<0.01)；对核蛋白和胞质蛋白进行分别检测，结果提示实验组细胞核内p65表达量(0.565±0.075)低于对照组(0.956±0.065)，差异有统计学意义(t＝6.823，P<0.01)，而实验组胞质中p65表达量(0.725±0.125)高于于对照组(0.327±0.089)，差异有统计学意义(t＝0.492，P<0.05)。结论白屈菜碱通过抑制p65核转位抑制核因子-κB信号促进MCF-7细胞凋亡。

简介：摘要目的探索长春瑞滨（vinorelbine，NVB）联合阿霉素（adriamycin，PLD）后对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抗癌效果及相关机制研究。方法CCK-8实验检测NVB和PLD单独及联用对乳腺癌细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平的变化；Western blot实验检测蛋白表达。结果CCK-8结果显示与空白对照组相比，长春瑞滨处理组、阿霉素处理组及联合处理组的抑制率分别为27.6%、31.2%及65.4%，联合处理组与NVB组和PLD组相比差异有统计学意义（P=0.005 vs 0.001）。流式细胞术结果显示，各组凋亡细胞比例分别为3.54%、16.95%、15.01%及32.24%，联合处理组与NVB组和PLD组相比差异具有统计学意义（P=0.006 vs 0.005）。各组活性氧水平为1、1.03、1.06及1.57，联合处理组与NVB组和PLD组相比差异具有统计学意义（P=0.008 vs 0.007）；Western blot结果表明NVB与PLD联用后p-ERK和p-STAT3的表达量降低，抑制ERK/STAT3信号通路。结论NVB与PLD联用能高效低毒的促进乳腺癌细胞的凋亡、抑制乳腺癌细胞增殖协同发挥抗癌作用，其作用机制可能是通过上调细胞中ROS水平，进而抑制ERK/STAT3通路的激活有关。

简介：摘要目的探究铁钯纳米颗粒修饰的碳纳米管(FePd@CNTs)对人乳腺癌MCF-7细胞的放射增敏作用。方法用化学还原法制备FePd@CNTs，并通过透射电子显微镜、能谱仪进行表征。CCK-8法检测FePd@CNTs对人正常乳腺上皮MCF-10A细胞的相容性。CCK-8法、流式细胞术和克隆形成实验评估FePd@CNTs对人乳腺癌MCF-7细胞的放射增敏作用。结果FePd纳米颗粒成功地通过化学还原方法被修饰在CNTs的表面。FePd@CNTs对MCF-10A细胞显示低细胞毒性(IC50＝738.3 μg/m)，同时可有效增强X射线对MCF-7细胞的杀伤(增敏比为1.22)。结论FePd@CNTs具有对乳腺癌的治疗作用与放射增敏的潜力。

简介：摘要目的探讨第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂小分子(Smac)类似物LCL161联合天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK诱导细胞发生坏死性凋亡对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响。方法体外培养MCF-7、MDA-MB-231细胞株。噻唑蓝(MTT)法检测2种细胞株空白对照组、Z-VAD-FMK组(10 mmol/L)、LCL161(1 μmol/L)组及LCL161+Z-VAD-FMK组存活率，并应用透视电子显微镜观察各组细胞凋亡亚微结构。Nec-1预处理后，MTT法检测2种细胞株空白对照组、Nec-1组(20 mmol/L)，LCL161(1 μmol/L)组及LCL161+Nec-1组细胞存活率。Annexin V-FITC/PI双染法检测空白对照组、LCL161组、Z-VAD组、Nec-1组、LCL161+Z-VAD组、LCL161+Nec-1组、LCL161+Z-VAD+Nec-1组细胞凋亡率。裸鼠成瘤实验观察空白对照组、LCL161组、LCL161+Z-VAD-FMK组裸鼠活体内MCF-7细胞株移植瘤体积和质量。结果(1)MTT法检测结果显示，LCL161+Z-VAD-FMK组的MDA-MB-231和MCF-7细胞株的存活率均低于其他各组，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。透视电子显微镜观察到LCL161+Z-VAD-FMK组细胞具有凋亡和坏死共同存在的特征性形态学改变。(2)Nec-1预处理后，MTT法检测结果显示，与空白对照组及Nec-1组相比较，LCL161组和Nec-1+LCL161组的MDA-MB-231和MCF-7细胞的OD值明显降低，表明其细胞存活率较低，差异均有统计学意义(P值均<0.05)；但LCL-161组与Nec-1+LCL161组比较，MDA-MB-231和MCF-7细胞存活率差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(3)Annexin V-FITC/PI双染法结果显示，与其他各组相比，LCL161+Z-VAD-FMK组和LCL161组两种细胞株凋亡率明显增高，LCL161+Z-VAD-FMK组亦高于LCL161组，差异均有统计学意义(P值均<0.01)。(4)15只裸鼠成功建立MCF-7细胞裸鼠成瘤模型，给药后第20天时LCL161组和LCL161+Z-VAD-FMK组肿瘤体积和质量均低于空白对照组，差异均有统计学意义(P值均<0.05)，而LCL161组与LCL161+Z-VAD-FMK组的肿瘤体积和质量差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论体外实验验证LCL161+Z-VAD-FMK在乳腺癌细胞中能通过诱发坏死性凋亡抑制肿瘤增殖，但是对雌激素受体阳性乳腺癌体内作用需要进一步验证。

简介：摘要目的探讨孕烷X受体(PXR)活化对人乳腺癌细胞株MCF-7内程序性细胞死亡因子(PDCDs)的调控作用及其分子机制。方法用PXR激动剂利福平(10 μmol/L)处理MCF-7细胞24 h后作为利福平组，并以DMSO处理的MCF-7细胞作为其对照组(DMSO对照组)，同时，为了排除PXR激动剂的非特异性，采用持续激活型PXR的腺病毒感染MCF-7细胞36 h后作为VP-PXR组，并以Mock处理的MCF-7细胞作为其对照组(Mock对照组)。对以上各组样品均采用实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)检测PDCD2、PDCD4、PDCD5、PDCD6以及PXR经典靶基因CYP3A4和MDR1的mRNA表达，采用Western blot检测PDCD4的蛋白表达，并采用qRT-PCR检测PDCD4上游负调控因子微RNA(miRNA)21的表达，用Western blot检测miRNA21下游靶基因PTEN的蛋白表达。正态分布的数据用±s表示，偏态分布的数据用M(P25～P75)表示。2组间各指标的比较采用两独立样本t检验或两独立样本非参数秩和检验。结果(1)qRT-PCR结果显示：利福平组与DMSO对照组相比，PDCD4和PDCD6的mRNA表达更低(0.896±0.069比1.262±0.103，t＝-2.961，P＝0.012；0.708±0.085比0.963±0.029，t＝-2.829，P＝0.029)，而PDCD2和PDCD5的mRNA表达差异无统计学意义(0.834±0.148比1.040±0.086，t＝-1.210，P＝0.254；0.896±0.142比0.946±0.110，t＝-0.281，P＝0.786)，同时，PXR经典靶基因CYP3A4和MDR1的mRNA表达均更高(2.192±0.418比1.000±0.071，t＝2.809，P＝0.045；2.112±0.397比1.000±0.071，t＝2.758，P＝0.048)；VP-PXR组与Mock对照组相比，PDCD2和PDCD4的mRNA表达均更低(0.721±0.085比0.975±0.035，t＝-2.767，P＝0.033；0.766±0.131比1.635±0.284，t＝-2.775，P＝0.017)，PDCD6和CYP3A4的mRNA表达差异无统计学意义[2.053(0.932～2.653)比1.000(0.796～2.091)，Z＝0.314，P＝0.753；1.844±0.397比1.000±0.071，t＝2.097，P＝0.100]，而MDR1的mRNA表达则更高(3.323±0.600比1.000±0.071，t＝3.846，P＝0.017)。(2)Western blot检测结果显示：利福平组与DMSO对照组相比，PDCD4的蛋白表达更低(0.865±0.062比1.080±0.060，t＝-2.490，P＝0.026)；VP-PXR组与Mock对照组相比，PDCD4的蛋白表达也更低(0.901±0.065比1.130±0.045，t＝-2.921，P＝0.019)。(3)机制研究发现：利福平组与DMSO对照组相比，PDCD4上游负调控因子miRNA21的表达更高(1.641±0.227比1.029±0.070，t＝2.576，P＝0.032)，VP-PXR组miRNA21的表达也显著高于Mock对照组(1.920±0.251比1.188±0.113，t＝2.657，P＝0.028);而且miRNA21下游靶基因PTEN的蛋白表达在利福平组和VP-PXR组均明显低于各自的对照组(0.694±0.057比0.875±0.038，t＝-2.630，P＝0.030；0.713±0.035比0.859±0.020，t＝-3.661，P＝0.006)。结论PXR可能通过miRNA21抑制MCF-7细胞PDCD4的表达，从而影响乳腺癌细胞的耐药性。

简介：摘要目的探究LINC00662能否靶向微小RNA(miR)-186-5p/叉头框转录因子D1(FOXD1)轴调控乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测28例乳腺癌组织和癌旁组织中LINC00662、miR-186-5p和FOXD1 mRNA表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXD1蛋白表达。分别转染LINC00662小干扰RNA(si-LINC00662)、共转染si-LINC00662与miR-186-5p抑制剂、si-LINC00662与FOXD1过表达载体至MCF-7细胞，细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移和侵袭，Western blot检测p21、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和FOXD1蛋白表达。双荧光素酶报告系统验证LINC00662与miR-186-5p、miR-186-5p与FOXD1的调控关系，两组间比较采用独立样本t检验。结果乳腺癌组织组中LINC00662(1.01±0.08比2.36±0.09，t＝59.324，P<0.01)、FOXD1水平(0.97±0.07比1.93±0.09，t＝44.553，P<0.01)高于癌旁组织，miR-186-5p水平(0.96±0.05比0.34±0.04，t＝51.236，P<0.01)低于癌旁组织。si-LINC00662组克隆形成数[(114.00±7.93)个比(62.00±5.81)个，t＝15.869，P<0.01]、迁移细胞数[(164±10.03)个比(75±7.14)个，t＝21.687，P<0.01]、侵袭细胞数[(103.00±7.83)个比(44.00±4.35)个，t＝19.761，P<0.01]少于si-NC组，存活率[(100.03±8.12)%比(52.29±5.34)%，t＝14.737，P<0.01]、MMP-2(0.71±0.05比0.24±0.03，t＝24.181，P<0.01)蛋白水平低于si-NC组，P21(0.15±0.02比0.58±0.04，t＝28.845，P<0.01)、E-cadherin(0.23±0.02比0.66±0.04，t＝28.845，P<0.01)蛋白水平高于si-NC组。LINC00662靶向负调控miR-186-5p；miR-186-5p靶向负调控FOXD1。si-LINC00662+抗miR-186-5p组克隆形成数[(60.00±±5.62)个比(102.00±7.23)个，t＝13.759，P<0.01]、迁移细胞数[(74.00±7.26)个比(131.00±9.91)个，t＝13.920，P<0.01]、侵袭细胞数[(45.00±4.41)个比(88.00±5.67)个，t＝17.959，P<0.01]多于si-LINC00662+抗miR-NC组，存活率[(52.31±5.35)%比(85.06±6.46)%，t＝11.714，P<0.01]、MMP-2(0.23±0.03比0.59±0.04，t＝21.600，P<0.01)蛋白水平低于si-LINC00662+抗miR-NC组，P21(0.57±0.04比0.26±0.03，t＝17.400，P<0.01)、E-cadherin(0.64±0.04比0.35±0.03，t＝12.969，P<0.01)蛋白水平高于si-LINC00662+抗miR-NC组。结论LINC00662通过发挥miR-186-5p分子海绵上调FOXD1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloteinase 17，ADAM17)-短发卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用。方法设计4个针对ADAM17以重组慢病毒为载体的shRNA序列(ADAM17-hsa-297，ADAM17-hsa-1508，ADAM17-hsa-1658，ADAM17-hsa-1864)及1个阴性对照(LV10-NC)，应用qPCR的方法筛选抑制率最佳的ADAM17-shRNA，实验分为3个组，即转染组、无意义序列组和对照组，按常规步骤提取RNA，进行逆转录以及扩增。用qPCR方法检测混合培养后ADAM17mRNA基因的表达，用MMT法测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力并进行统计学分析。结果对照组、无意义序列组和转染组24 h的吸光度值分别是0.270±0.040、0.250±0.035和0.185±0.080，组间比较差异有统计学意义(F＝3.854，P＝0.045)，对照组与无意义序列组比较差异无统计学意义(P>0.05)，对照组与转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)，无意义序列组与转染组差异无统计学意义(P>0.05)；对照组、无意义序列组和转染组48 h的吸光度值分别是0.500±0.057、0.494±0.086和0.311±0.007，组间比较差异有统计学意义(F＝19.42，P<0.001)，转染组与对照组、无意义序列组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)，对照组与无意义序列组比较差异无统计学意义(P>0.05)；对照组、无意义序列组和转染组72 h的吸光度值分别是0.720±0.150、0.713±0.174和0.558±0.071，组间比较差异无统计学意义(F＝2.61，P＝0.106)。结论ADAM17-shRNA转染的BMSC可以抑制24 h和48 h人乳腺癌MCF-7细胞的增殖，同时72 h人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力有下降趋势。