真菌临床检验技术

真菌临床检验技术

邓勇

武警四川省总队医院  四川省乐山市   614000

真菌临床检验在诊断和治疗真菌疾病中扮演着至关重要的角色。由于真菌感染菌种构成的变化，新的条件致病真菌的出现，以及真菌感染率的提高，我们需要更为精细和深入的检测工作，以便确定真菌种类和其对抗真菌药物的耐药性。对真菌进行精确的识别和耐药性分析，可以为临床治疗提供重要依据，从而有助于患者的快速恢复。这里就带大家一起来了解常见的真菌临床检验技术。

1.标本采集

标本采集是检验的基础，需根据病人的具体情况和疾病种类，选择合适的采集方法。如果疑似浅表真菌感染，例如体癣，可刮取病变部位的边缘痂皮。对于疑似深部真菌感染，需要采集的标本包括脓液、痰液、脑脊液、血液等。无论何种情况，标本的采集都需要在尚未使用药物治疗前完成。如果已经用药，需要停药一周后才能再次采集标本。另外，标本的采集必须足量，一般情况下，活体组织需要两份（一份用于显微检查和培养，一份送给病理科进行检查），皮屑需要两块，胸腔液为20毫升，脑脊液和血液为5毫升。在操作过程中，需要保证无菌，避免二次感染。采集完成后的标本要尽快送检，保存时间不超过两小时，特别是对于深部真菌标本。

2.直接检查法

真菌直接检验主要在显微镜下进行。首先，取一部分患者的标本，放置在玻璃载片上，加入适量的载液。在平均分布标本后，用另一块玻片覆盖。待片刻，利用火焰迅速烘烤载玻片，但不可持续加热以避免结晶。随后，轻压盖玻片，除去气泡的同时使标本尽可能压薄。清理周围的溢液后，可以用显微镜观察。初步选择低倍镜，观察是否存在孢子或菌丝。确定存在后，使用高倍镜进行细致观察，描绘出孢子和菌丝的排列、大小、位置、特征和形态等。

真菌直接检查是一种较为快速和直接的检测方法，其结果可以明确患者是否被真菌感染。如果结果为阳性，可以确诊患者的真菌感染；如果结果为阴性，仍不能排除真菌感染的可能性。通过显微镜，我们可以明确部分病原菌种，如花斑癣菌、新型隐球菌等，也能够确定某些特定的菌属，如念珠菌属。此外，我们还可以观察到真菌的形态，了解其在组织中的存在状态。这些信息都对诊断和治疗有重要的指导意义。

3.真菌培养法

真菌培养是为了鉴定和分离感染的真菌种类。首先，选取适当的脱水培养基，加入适量的蒸馏水，摇动制成混悬液。之后，缓慢加热，煮沸一分钟，准备进行高温灭菌。在灭菌前后分别分装到试管和平皿中，待其降至45-50℃时，完成分装，并附上标签。然后，将培养基放置于室温下24小时，后置于4℃的冰箱中保存。接种标本后，可以通过显微镜或者涂片观察孢子和菌丝的生长状态。

真菌培养的主要目的是从采集的标本中分离出病原菌，以明确是否存在真菌感染，并进一步确定感染的真菌种类。这样的方法能够有效地弥补直接检查所存在的不足，如检查范围受限、分辨率不高等。通过真菌培养，我们可以从显微镜下观察到真菌的形态、结构和特征等详细信息，进一步对真菌的生理和生物特性有全面的了解，这些都将对临床治疗有重要的指导作用。此外，成功培养出的菌种还能够为其他研究提供材料，如对真菌的基因学、生理学研究等。

4.分子生物学检测

分子生物学检测是一种较新的检测技术，主要包括PCR（聚合酶链反应）、实时定量PCR、序列分析、T2MR（T2磁共振）等。其中，PCR和实时定量PCR是最常用的两种方法，通过对特定的真菌DNA进行扩增和定量，可以高度敏感和特异地检测和鉴定真菌。此外，通过对扩增的DNA进行序列分析，可以确切地鉴定真菌的种类，甚至是亚种。这些方法的优点是敏感性和特异性高，而且结果快速（通常几小时内可以得到结果），因此在临床上有很大的应用价值。然而，由于这些方法需要专门的设备和技术，而且操作步骤比较复杂，因此在一些基层医院和疾病预防控制中心的应用还比较有限。

5.其他

此外，还有一些其他的检测技术，如抗原和抗体检测、MALDI-TOF MS（基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱）等，也在某些情况下被用来进行真菌的检测和鉴定。抗原检测主要通过检测血液或者体液中的特定真菌抗原（如酵母菌的鞭毛蛋白或者曲霉的岩藻多糖等）来诊断真菌感染。这种方法的优点是结果快速（通常几小时内可以得到结果），而且可以动态地监测疾病的进程。然而，由于许多真菌抗原在体内的存在时间较短，而且可能受到交叉反应的影响，因此其敏感性和特异性并不理想。抗体检测则是通过检测血液中的特定真菌抗体（如抗真菌IgG或者IgM抗体等）来诊断真菌感染。这种方法的优点是可以检测到体内的早期感染和慢性感染，而且对于某些难以培养的真菌（如某些真菌性脑膜炎病原菌等），其检出率比培养和直接检查要高。然而，抗体检测也存在一些问题，如抗体滴度的变化可能受到许多因素的影响，而且对于免疫抑制的患者，其检出率可能会降低。

真菌临床检验方法是真菌病诊断的重要手段，每一个步骤都需要精确操作，才能确保准确的检验结果，为患者的诊断和治疗提供有力依据。然而，这些方法也有局限性，比如标本的采集和保存等都需要特别注意，以免影响到检测结果。因此，真菌临床检验不仅需要技术精湛的实验人员，更需要对病原生物学有深入理解的临床医生，才能确保检验结果的准确性和应用性。