快速冷冻制片技术及仪器的日常维护

快速冷冻制片技术及仪器的日常维护

魏亚权,张维,李永霞,王康敏通讯作者

西安金域医学检验所有限公司  710018

【摘要】目的：探讨快速冷冻切片过程中的影响因素，有效提高快速冷冻切片的质量。方法：选取实验室2022年1月至2022年5月期间不同类型的标本50例，经过取材，切片，染色，封片等不同步骤及节点中的研究分析，探讨快速冷冻制片过程中容易出现的问题，以及可以避免的方法。结果：不同组织的冷冻制片，适用不同的方法，制片可以使组织结构完整，光镜下颜色鲜艳，符合病理医师的诊断要求。结论：不同来源的组织，因为自身组成的成分不同，应采用不同的技术方法进行快速冷冻制片，可以达到高质量制片的效果。

关键词：冷冻制片 温度 维护

冷冻切片，是利用冷冻切片机将组织快速冷冻，达到一定的硬度，再用冷冻切片机进行切片，可节省常规制片过程中的脱水、透明等步骤，更快使手术中病人得到及时、准确的病理结果，是手术过程中进行诊断的最关键的步骤，医生要根据冷冻结果，对病人手术方式进行快速决定，特别是我们的病理诊断医师，要根据切片进行准确诊断，这就需要病理技师和病理医师具备很强的专业知识和专业技术水平，因为制片质量会直接影响病理诊断的精准度，所以我们要从接收手术标本开始，就保持严谨的态度，同时也需要病理技术人员熟练掌握快速冷冻制片技巧，才能制作出优秀、完美的切片。

一．材料

实验室使用的机器是徕卡-CM1950，标本为术中取下的新鲜手术标本50例，包括乳腺、甲状腺、子宫、淋巴结，使用樱花品牌的OCT胶。

二．方法

1. 根据病变部位的病变程度，取材大小为2×1.5×0.3cm，厚度一定要保持均匀，在取材过程中尽量避免脂肪组织、钙化区组织，以免影响切片质量和诊断。

2. 组织的包埋：冷冻托要保持干燥，将少量OCT胶挤于冷冻组织托上，并把组织的病变部位正面向上，置于冷冻组织托上，尽量使OCT胶覆盖组织，但不能将OCT胶加得太多，避免延长冷冻过程中所需时间。

3. 冷冻箱温度：不同的类型组织可设置不同的温度控制，根据多年的技术经验，适宜的温度数值如下：甲状腺、脑组织、肺、肝、脾为-17℃~-19℃；淋巴结为-15℃；乳腺、子宫、胃肠、皮肤为-23℃~-26℃；脂肪组织、脂肪瘤为-40℃。

4. 冷冻切片：将放有组织的冷冻组织托放入冷冻箱后，可通过观察窗及时观察组织的冷冻变化，大部分的组织变色从周边开始向中心变化，但是除脂肪外，组织变色在组织中心未完全变色开始前，将固定冷冻托组织的长轴与切片刀保持垂直，开始粗修组织块，至组织切面全层暴露，用细修的方式修3次后，放下防卷板，一般冷冻切片厚度为4-5μm，制作出一张完整的切片。由于脂肪组织特殊的致密度，一般冷冻切片厚度应为9~10μm。特别需要注意的是，在取材医生发现组织有特别需要注意的时候，要和技术员及时沟通，如微小癌，在冷冻箱冻过之后，整个组织呈现灰白色，切片时难以发现病变部位，如果取材医生和技术员沟通不到位，技术员在切片时很容易将癌组织修掉或切完，并且刀片要保持锋利，才能切出完整、厚度均匀的组织，刀片使用变钝后，切出的组织容易破碎、皱褶、卷曲，染色后病理诊断医师无法准确诊断。

5．染色：切下的组织要迅速放入AAF固定液（乙醇、乙酸、中性甲醛）中，固定1min中，苏木精染色3min中，注意苏木精染液中，每天都有试剂氧化物，每天使用前，用滤纸将其过滤一遍，防止苏木精产生的氧化物或结晶附着在组织切片上导致结果的误判，1%的盐酸酒精分化10s，放入水浴锅中进行反蓝，水溶性伊红染色15s，分别进入75%的酒精、85%的酒精、无水酒精、二甲苯（最好有两缸）中各10s。染液一定要及时更换，如果每天染色量在20张左右，建议每100张全部更换一次试剂，为了加快返蓝的速度，增加水浴温水返蓝，温度保持在40~45℃。

6．封片：滴加中性树胶封片，胶应适量，不宜过多，否则会溢出盖玻片，影响整体的裱片外观，同时容易污染病理医师的显微镜，胶也不宜过少，如果组织未完全覆盖，会降低切片的折光率，导致无法诊断，在透明后，因有少量二甲苯残留在载玻片上，为了利于完整封片，可用吹风机快速吹干。

7. 结果：对于不同来源的组织，应该使用不同的方法，主要是要掌握时间、温度和切片过程中的方法，使用正确的方法才能切好片子，组织染色会更清晰，细胞形态会更完整。由于组织结构的不同，组织对温度的要求也不同，基本都在-15℃~-40℃之间，如果冷冻的时间不够或者温度不达标，切片时会出现皱褶、结晶、组织挤压、细胞重叠，导致延误患者的诊断时间，所以必须要调整好冷冻切片机的工作状态，才能更好为患者服务。

三．仪器维护

1．冷冻切片机应该安排专人使用和维护，每天对机器外表和被组织污染的地方，使用75%乙醇进行擦拭、消毒，保持机器周围环境的清洁，每天做完冷冻切片下班前，清理机器内部的组织碎屑，用毛刷将冷动台、刀架及玻璃盖板清洁干净

。

2．定期检查刀架、夹头、冷冻箱玻璃盖，防止发生松动，保证冷冻箱内温度保持在正常范围，才能有效切片。

3. 遇到长假或休息时，应关闭电源，打开窗户通风，防止霜融化时产生的水汽无法有效挥发，使机器中的零件腐锈，下班时关闭窗户，防止灰尘进入机器。

4．每天下班前打开紫外灯，消毒30min左右，保证切片机清洁。

5．冷冻切片机最好实行24h运转，并且温度一般设置在-20℃左右，不宜经常反复开关机，否则会缩短冰冻切片机的正常使用年限。

6．每次使用冰冻切片机后，务必要锁好手轮锁，并且要盖好冷冻机箱盖，防止冷冻机箱内温度不均衡，切片完成后，应按下控制面板上的键盘锁按钮，将屏幕锁定。

7．应定期将机器机身上的灰尘清扫干净，以免影响设备散热的工作，并使机器与四周墙壁保持一定的距离，这样有利于机器的正常散热，平时也要对机器各个活动的部位进行润滑，以便设备一直处于良好的工作状态。

总结：

冷冻切片机是病理科常见设备,主要用来帮助医生对手术过程中的新鲜组织做出快速诊断,确定病变组织的性质,分析肿瘤有无转移,以及切除残端有无病变,为是否进一步手术提供可靠的判断依据。由于不同的组织，有不同的温度要求，各种不同的组织都有其最佳的冰冻切片温度，如能很好地掌握这些规律，并根据实际情况对温度进行调整，才可制作出优良完整的切片。

参考文献

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