ELISA法和化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析

ELISA法和化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析

张琼舟

湖北省孝感市大悟县人民医院检验科，湖北 孝感432800，

摘要：目的：评价ELISA法和化学发光免疫法（CLIA）检测血清HBsAg结果。方法：应用ELISA法和CLIA检测1205例血清中的HBsAg。结果：ELISA法检测出83例阳性标本，阳性率为6.88%，CLIA法检测出75例阳性标本，阳性率为6.22%，以CLIA法为参考，ELISA法18例假阳性标本，假阳性率为1.49%；例11假阴性标本，假阴性率为0.91%，相对敏感性为88.15%，相对特异性为98.14%，两者总符合率为96.86%，。结论：应用CLIA法检测血清HBsAg有假阳性率和假阴性率，比CLIA法敏感性和特异性差，并且随HBsAg浓度变化比较大，CLIA法准确、快速、敏感性、特异性比较高。

关键词：ELISA法；CLIA法；血清HBsAg

乙型肝炎病毒是一种感染率很高的病毒，现在国内对其的诊断主要是检测患者血清中乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）, 比较常用的检测方法是酶联免疫吸附试验（ELISA），但是应用ELISA检测后发现，其由于自身存在的某些特征, 导致检测结果常会出现假阳性和假阴性[1]。所以本次选取了1205例血清标本，应用ELISA和CLIA法进行检测, 比较其检测结果。

1资料与方法

1.1材料

选择本院2019年3月至2021年7月体检中心的血液标本；仪器选择美国伯腾600型酶标仪、加样枪、电热恒温培养箱、迈瑞CL6000型，ELISA试剂北京万泰生物药业有限公司。

1.2方法

ELISA试剂盒操作说明书

ECLIA根据迈瑞CL6000型仪器标准操作规程操作。

1.3观察指标

（1）ELISA法待测标本吸光度（A值）<1.6*NC为阴性标本（阴性对照），>2.1*NC为阳性标本，介于两者中间为弱阳性标本，阴性对照组A值应<0.1，若未达到该标准应该二次检测，低于0.05以0.05计算；

（2）CLIA法<1为阴性标本，>1为阳性标本。

1.4统计学分析

数据利用软件SPSS25.0处理，计量、计数资料用x±s、（n，%）表示，差异性对应t、2检验；依据：P＜0.05有差异，存在统计学意义。

2结果

2.1 ELISA法和CLIA法检测HBsAg结果对比

1205例标本中，ELISA法检测出83例阳性标本，阳性率为6.88%，CLIA法检测出75例阳性标本，阳性率为6.22%，以CLIA法为参考，ELISA法18例假阳性标本，假阳性率为1.49%；例11假阴性标本，假阴性率为0.91%，相对敏感性为88.15%，相对特异性为98.14%，两者总符合率为96.86%，见表1：

表1 ELISA法和CLIA法检测HBsAg结果对比（n，%）

2.2 ELISA法和CLIA法结果对比

ELISA法检测A值>0.20的例阳性标本用CLIA法二次检测，51例阳性，0例阴性，ELISA的假阳性率为13.72%，相对敏感性为100%，相对特异性为50%，两者符合率为87.39%，见表2：

表2 ELISA法和CLIA法结果对比（n，%）

3讨论

乙型肝炎病毒感染已经成为了全世界的重大公共健康问题，根据相关调查显示，国内人群HBsAg携带率使8.01%，所以检测和筛查乙型肝炎病毒具有很重要的作用。乙型肝炎病毒感染的金标准是HBsAg阳性，大部分医院和疾病控制中心常会采用酶免疫法中的ELISA法检测，该检测方式的敏感性达到了0.7ng/mL，并且其价格比较低[2]。CLIA法是结合发光系统和免疫反应检测抗原或抗体的一种方式，是在酶免疫、继放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫后的一种新标记免疫技术，具有操作方便、应用范围广、试剂存储时间长、检测快速、敏感性高、线性范围宽的优点[3]。

参考CLIA法发现，ELISA法的敏感性、特异性比较差，而且浓度不一的HBsAg，应用ELISA法检测的假阳性率和假阴性率存在很大差异，总结原因如下：采用的ELISA法现在应用的捕获和检测抗体是单一单抗，和Rothe、Abbot等应用的双单抗捕获和多抗检测比较，其敏感性比较低，针对窗口期及低浓度HBsAg没有达到检测试剂敏感性的标本常会出现假阴性。HBsAg的含量太高，会发生钩状效应；HBsAg变异株会出现假阴性；温育、显色时间太短；试剂盒平衡时间比较短会导致试剂不够混匀，标本孵育时间会减少；边缘效应；(8)因为ELISA检测的特征，经常会受加试剂不均一性、加样错误、孔和孔的交叉污染、检验人员操作能力、洗板、板底被污染等各种因素的影响出现假阳性。所以，针对ELISA法HBsAgA值比较低的阳性标本，意思或感染模式比较少见的标本应该通过敏感性更高的方法二次检测，避免出现假阴性和假阳性。

根据以上所讲，应用CLIA法检测血清HBsAg有假阳性率和假阴性率，比CLIA法敏感性和特异性差，并且随HBsAg浓度变化比较大，CLIA法准确、快速、敏感性、特异性比较高。

参考文献

[1]周天天,白甲怡,王锐泽,等.化学发光免疫试验和酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗体比较[J].中国疫苗和免疫,2021,27(6):4.

[2]邓家琦,张丽云,谭鹏,等.基于玻璃毛细管的直接竞争ELISA法快速检测血清HBsAg的研究[J].现代医药卫生,2020,36(23):4.

[3]王旭.分析电化学发光免疫法与酶联免疫吸附试验法检测人类免疫缺陷病毒的临床效果[J].中国实用医药,2021,16(4):3.