应用LC-MS鉴定分析蒙药孟根地格达水提物的化学成分

应用 LC-MS 鉴定分析蒙药孟根地格达水提物的化学成分

永强，辛颖 ﹡

（内蒙古民族大学蒙医药学院 内蒙古 通辽， 028000 ）

摘要：目的 通过LC-MS鉴定分析蒙药孟根地格达水提物的化学成分。方法 采用LC-MS技术对梅花草孟根地格达水提物的化学成分进行鉴定分析。Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1×100 mm, 1.8 µm)，乙腈（A）-0. 1%甲酸水溶液（B)（0~5min，5~10%A；5～10min，10%～15% A；10~20min，15~20%A；20~25min，20%~40% A；25~30min，40~60% A；30~33min，60%~95%A），柱温30 °C；流速0.3mL/min；进样量为2 μL。ESI离子源，在正负离子模式下进行检测，对样品正负离子流图匹配出的化合物作出鉴定。结果 从孟根地格达水提物中检出29个化学成分，其中包括苷类化合物20个、黄酮类化合物4个、羧酸类化合物2个、氨基酸类化合物1个、酚类化合物1个、倍半萜类化合物1个。 结论 LC-MS技术为孟根地格达建立了快速、高敏、高效的分析方法，可为其后续研究提供数据。

关键词：蒙药；孟根地格达；化学成分；LC-MS

特色蒙药孟根地格达，是卫矛科梅花草属多年生草本植物梅花草Parnassia palustris L.的干燥全草，别名苍耳七，具有破痞去滞、解毒除热、抑协日等功效，蒙医用其治疗肝血痞、间热痞、内热痞、脉痞、肠协日痞、脏腑协日症等^[1，2]。目前关于孟根地格达的现代研究报道相对较少，只在生药学研究、繁殖栽培研究、化学成分研究、药理活性研究以及含量测定研究等方面进行了初探。实验显示孟根地格达具有抗肿瘤细胞增殖的作用，从孟根地格达中分离出11个化合物，含量测定以黄酮类化合物为主^[3-10]。本文基于LC-MS技术分析孟根地格达的化学成分，旨在建立其化学成分快速准确的分析方法，为孟根地格达的药效物质基础研究提供依据。

1. 实验材料

1.1 试药

孟根地格达采集于内蒙古通辽市扎鲁特旗罕山，经内蒙古民族大学红艳副教授鉴定为卫矛科梅花草属植物梅花草Parnassia palustris L.的全草，采集时间为2021年7月，样本保存于本实验室。乙腈（质谱纯，I0928729804，Merck公司）；甲醇（质谱纯，I1139035113，Merck公司）；水（纯净水，20211018H，广州屈臣氏食品饮料有限公司）；甲酸（质谱纯，U9260048，CNW公司）；甲醇（色谱纯，乙腈（色谱纯，德国默克公司）；甲酸（色谱纯，山东西亚化学工业有限公司）。蒸馏水（广州屈臣氏）；其他试剂均为分析纯。

1.3 仪器

Waters H-Class超高效液相色谱仪（沃特世科技有限公司）；AB Sciex Triple TOF® 4600 高分辨质谱（SCIEX公司）；ME104电子天平（梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司）；KQ-300 BD超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；3K15高速离心机（SIGMA）；Thermo Vanquish超高效液相色谱仪，Q-Exactive HF高分辨质谱（美国Thermo Fisher Scientific公司）；CP225D型十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）；N-1100 型旋转蒸发仪（日本东京理化仪器公司）。

2. 实验方法

2.1 供试品溶液制备

取样品约80 g，精密称定，置煎药壶中，加水800 ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣加水640 ml，加热回流1小时，放冷，滤过，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥。称取冷冻后的样品约0.1 g，精密称定，加水20 ml，超声（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，离心（转速为每分钟12000转）5分钟，取上清液，即得。

2.2 色谱条件

Waters ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1×100 mm, 1.8 µm)，乙腈（A）-0. 1%甲酸水溶液（B)（0~5min，5~10%A；5～10min，10%～15% A；10~20min，15~20%A；20~25min，20%~40% A；25~30min，40~60% A；30~33min，60%~95%A），柱温30 °C；流速0.3mL/min；进样量为2 μL。

2.3 质谱条件

质谱检测模式：ESI-Negative/Positive ion mode，质谱参数见表1。

表1 Mass parameters (Sciex Triple TOF 4600 LC-MS)

3. 实验结果

根据样品多级质谱信息，结合天然产物高分辨质谱数据库及相关文献，数据采集软件为Analyst TF 1.7.1，数据处理软件为Peakview 1.2。鉴定时优先将质谱数据与Natural Products HR-MS/MS Spectral Library 1.0数据库进行匹配，根据各色谱峰得分信息对化合物进行初步筛选，进一步根据各色谱峰一级、二级信息等对化合物进行确认。数据库中未收载的化合物，则根据文献报道、质谱裂解规律等进行鉴定。结果发现，从孟根地格达样品中鉴定出29个化合物（见表2）。

表2 孟根地格达样品主要成分鉴定结果

4. 结论

孟根地格达化学成分的LC-MS鉴定文献报道较少，本文采用水作为提取溶剂，采用LC-MS技术快速、全面对孟根地格达的化学成分作出鉴定，最后确定结构的成分为29个，包括苷类化合物20个、黄酮类化合物4个、羧酸类化合物2个、氨基酸类化合物1个、酚类化合物1个、倍半萜类化合物1个。以上结果表明，LC-MS技术可系统、高效、准确地对孟根地格达水提物的化学成分进行快速定性分析，能较全面地反映孟根地格达成分的化学组成，为深入研究其药效物质基础和质量控制方法提供了依据。

参考文献

[1] 内蒙古自治区卫生厅. 内蒙古蒙药材标准[S]. 赤峰：内蒙古科学技术出版社，1987：173-174.

[2] 占布拉道尔吉. 无误蒙药鉴[M]. 呼和浩特：内蒙古人民出版社，1988：161-164.

[3] 道日娜. 蒙药材梅花草、紫花地丁、肋柱花的生药学比较研究[J]. 中国民族医药杂志，2014，20（7）：56-58.

[4] 贾瑞冬，贾桂霞，郝喜龙，牛林龙，周国峰. 梅花草的组织培养和快速繁殖[J]. 植物生理学通讯，2005（6）：798.

[5] 李桂花，达拉胡，红艳，辛颖. 蒙药梅花草挥发油成分研究[J]. 内蒙古民族大学学报（蒙医药学版），2017，27（2）：27-32.

[6] 辛颖，达拉胡，红艳，春玲，文花. 梅花草抗肿瘤活性部位化学成分研究[J]. 中国药学杂志，2019，54（4）：264-267.

[7] 辛颖，达拉胡，红艳. 蒙药梅花草乙醇提取物体外抗肿瘤实验研究[J]. 北方药学，2016，13（9）：128-129.

[8] 春玲，达拉胡，文花，红艳，辛颖. 蒙药梅花草不同提取部位体外抑制肿瘤细胞增殖的作用研究[J]. 世界最新医学信息文摘，2018，18（16）：21-22.

[9] 海岳东，白爽，王育民，图门乌力吉，赵盛，王睿君. 蒙药乌力地格抑制胶质瘤裸鼠移植瘤生长的研究[J]. 中国实验诊断学，2018，22（11）：1981-1985.

[10] 达拉胡，红艳，李桂花，辛颖. 蒙药梅花草中金丝桃苷、芦丁的含量测定[J]. 世界最新医学信息文摘，2020，20（53）：248-250.

基金项目：内蒙古自然科学基金项目（2021MS08016）；内蒙古民族大学研究生科研创新资助项目（NMDSS2103)

作者简介：永强（1997-），男，内蒙古民族大学2020级硕士研究生，研究方向：蒙药及复方质量标准研究

通讯作者：辛颖（1980-），女，教授，硕士研究生导师，从事蒙药药效物质基础及质量评价研究

基金项目：内蒙古自然科学基金项目（2021MS08016）；内蒙古民族大学研究生科研创新资助项目（NMDSS2103)