酶底物法与过滤培养法检测非饮用水中嗜肺军团菌的效果

酶底物法与过滤培养法检测非饮用水中嗜肺军团菌的效果

李玉

哈尔滨市疾病预防控制中心 150030

【摘要】目的 探讨分析在非饮用水中嗜肺军团菌检测中应用酶底物法与过滤培养法的效果。方法 此次研究时间为2020年3月到2021年9月，选取我市47家公共场所50件确定存在嗜肺军团菌的非饮用水样进行研究，对全部样本分别应用酶底物法与过滤培养法进行检测，并将检测结果与确定结果进行对比，确认两种检测方法的符合率。结果 比较两种检测方法对嗜肺军团菌的检测准确率，对比不存在差异（P＞0.05）。结论 根据本次研究的结果可以确认，在非饮用水中嗜肺军团菌检测中应用酶底物法与过滤培养法能够取得大致相同的结果，但是酶底物法的操作更为简单，可以提高检测效率，有必要大力推广。

【关键词】非饮用水；嗜肺军团菌；酶底物法；过滤培养法；检测效果

[Abstract] Objective To explore and analyze the effect of enzyme substrate method and filter culture method in the detection of Legionella pneumophila in non drinking water. Methods from March 2020 to September 2021, 50 non drinking water samples from 47 public places in our city were selected for research. All samples were detected by enzyme substrate method and filter culture method respectively, and the detection results were compared with the determined results to confirm the coincidence rate of the two detection methods. Results there was no difference between the two detection methods in the detection accuracy of Legionella pneumophila (P > 0.05). Conclusion according to the results of this study, it can be confirmed that the application of enzyme substrate method and filter culture method in the detection of Legionella pneumophila in non drinking water can achieve roughly the same results, but the operation of enzyme substrate method is simpler and can improve the detection efficiency, so it is necessary to popularize it.

[Key words] non drinking water; Legionella pneumophila; Enzyme substrate method; Filtration culture; Detection effect

随着城市化进程的加快，大部分人们都生活在密闭的空间之中生活，这就很容易受到室内致病微生物的侵袭，从而引发其出现相关疾病【1】。其中，嗜肺军团菌尤为常见，该病菌可以引发患者出现致命性肺炎，危及到感染者的生命。所以，世界各国都对该病菌制定了相应的监测方案，从而保证人民的生命安全【2】。这就需要采取有效的检测方式，及时检出嗜肺军团菌，并通过正确的方法进行处理，避免军团菌病暴发流行。因此，本文旨在探讨分析在非饮用水中嗜肺军团菌检测中应用酶底物法与过滤培养法的效果。

1 资料和方法

1.1一般资料

次研究时间为2020年3月到2021年9月，选取我市47家公共场所50件确定嗜肺军团菌阳性非饮用水样进行研究，样本主要为冷却水（32件）、淋浴水（12件）以及集中空调冷凝水（6件）。

1.2方法

酶底物法的检测流程为：首先，需要按照Legiolert说明书将1毫升 Legiolert预处理液加入到无菌微管中，并取出1毫升检测样品混入其中，充分混合后，在室温下放置1分钟。其次，将其倒入100毫升溶解的Legiolert试剂中，再次混合转移到 Legiolert 定量盘并进行密封。然后，置入37摄氏度左右（误差不超过0.5摄氏度）的培养箱中进行1周的培养。最后，1周后对定量盘进行观察，如果样本呈浑浊状或者是棕色状则为阳性，反之则为阴性。

过滤培养法的检测流程为：首先，对非饮用水样本通过六联不锈钢微生物过滤系统进行过滤处理。在完成过滤后，将样本通过灭菌水（15毫升）进行充分洗脱。其次，对样本进行热处理以及酸处理后，各取0.1毫升放置到35摄氏度到37摄氏度、2.5%二氧化碳的环境中，进行10天培养。如果在24小时内长出，则可以确定为非嗜肺军团菌,如果24小时后长出，则疑似非嗜肺军团菌，并进行规范化的鉴定。

1.3观察指标

对全部样本分别应用酶底物法与过滤培养法进行检测，将检测结果与确定结果进行对比，相符则为准确，不符则为错误。

1.4 统计学分析

录入spss22.0统软件中处理。

2 结果

比较两种检测方法对嗜肺军团菌的检测准确率，对比不存在差异（P＞0.05）。详情如表1所示。

表 1比较两种检测方法对嗜肺军团菌的检测准确率[n/(%)]

3 讨论

嗜肺军团菌属于革兰阴性菌，其余杆菌有着较为的相似性，存在着无荚膜、无孢子以及不抗酸的特点，其在侵入人体后，将会导致感染者出现急性发热性呼吸道疾病，主要以肺炎为主，近些年来在国内较为常见【3】。这种细菌主要是在温水中存活以及繁殖，通常存在于人造水系统中，主要包括冷却塔、装饰性喷泉、建筑用水以及淋浴水等。为了避免军团菌病的大面积爆发，我国制定了严格的军团菌监测方案，强化了对军团菌病的控制【4】。尤其是针对各种公共场所，属于人员密集的区域，需要采取准确的检测方法，确认非饮用水的安全性。

目前，常用的检测方法为过滤培养法以及酶底物法。前者属于比较常用的细菌检测方法，应用较为广泛，在检测准确性方面也有着较好的保证。然而，在使用该方法的过程中，对无菌条件的要求较为严格，还需要先过滤除菌后再进行培养，检测流程较为繁琐，操作难度相对较高，耗费的时间也比较长【5】。在判读的过程中，也存在着一定的难度。后者则同属于检测水中微生物的方法，尤其是在检测大肠杆菌方面有着极其确切的效果。将其应用于嗜肺军团菌的检测中，也能够取得令人满意的效果。同时，其检测方法相对较为简单，培养所需要经过的环节较少，能够有效提高检测的效率，并在短时间内获取检测结果【6】。并且，能够为嗜肺军团菌营造适宜的环境，在检测时能够保证嗜肺军团菌具有良好的稳定性以及特异性，并可以对检测结果进行方便的判读。将其应用于非饮用水以及饮用水的检测工作之中，有着极为确切的发展前景。本次研究结果显示：比较两种检测方法对嗜肺军团菌的检测准确率，对比不存在差异（P＞0.05）。

综上所述，在非饮用水中嗜肺军团菌检测中应用酶底物法与过滤培养法能够取得大致相同的结果，但是酶底物法的操作更为简单，可以提高检测效率，有必要大力推广。

参考文献 
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黑龙江省卫生健康委课题，课题编号：2018572