CRC中KRAS、NRAS基因突变与MSI的关系研究

CRC中 KRAS、 NRAS基因突变与 MSI的关系研究

崔博舒 1 ，陈文静 1 ，刘慧铭 1 ，翟丽丽 1 ，王杨 1

1 、黑龙江省齐齐哈尔市第一医院，病理科 161000

【摘要】目的：探究结直肠癌（colorectal cancer，CRC）中KRAS、NRAS基因突变与微卫星不稳定性（microsalellite instability，MSI）的相关性。方法：对80例CRC患者进行分析，采用不同方法对患者MSI分布情况、以及KRAS、NRAS基因突变情况进行分析。结果：KRAS基因在MSI CRC突变率为20%，较MSS突变率低，表明KRAS基因突变与MSI呈负相关，KRAS野生型更易出现MSI。NRAS基因在MSI、MSS CRC中的突变率对比无差异（P＞0.05）。远处转移、KRAS基因突变与MSI有较大相关性，是CRC患者预后危险因素，P＜0.05。结论：MSI与KRAS基因突变呈负相关，且是CRC预后的独立危险因素。

【关键词】CRC；KRAS；NRAS基因突变；MSI

结直肠癌（CRC）是发生在结肠或直肠的恶性上皮性肿瘤，是当今世界常见的消化道恶性肿瘤，在中国乃至全球，其发病率和死亡率持续高发，并呈上升趋势^[1,2]。在CRC疾病中，形成途径有MSI、CIN,通过MMR基因可对DNA链错误进行纠正。在CRC发病期间，MSI与RAS基因突变起到重要作用，两者存在较大关联^[2]。本文深入分析探究CRC中KRAS、NRAS基因突变与MSI的相关性。

1 资料与方法

1. 1. 一般资料

本研究对2018年4月-2020年4月80例CRC患者进行分析，所有患者病理资料均完善，且未进行放化疗治疗。男42例，女38例；年龄62-72岁，平均（67.15±5.21）岁；病程1-3 年，平均（2.21±0.32）年。根据国际抗癌联盟（UICC）第8版的TNM分期标准进行分级：T为原发肿瘤浸润深度，N为淋巴结转移，M为远处转移。Ⅰ期T_1-2N₀M₀、Ⅱ期T_3-4N₀M₀、Ⅲ期T_1-4N_1-2M₀、Ⅳ期T_nN_nM₁。

1. 2. 方法

      1. 检测所用试剂与仪器

所使用的试剂与仪器有：PSM2单克隆抗体（厂家：福州迈新生物技术有效公司）；核酸提取试剂、人类MSI检测试剂盒、人类KRAS、NRAS基因突变联合检测试剂盒（厂家：厦门艾德生物医药科技有限公司）；Leica Bond免疫组化仪（厂家：德国Leica公司）；ABA13500Dx基因分析仪、ABI7500仪器（厂家：美国ABI公司）。

1.2.2 KRAS、NRAS基因检测

根据核酸提取试剂说明书提取患者石蜡组织DNA，并置于ABI7500仪器中进行扩增。在不同扩增阶段需确保适宜的温度，第一、二阶段均为95℃，第三阶段为93℃，其中60℃时对FAM与HEX信号进行收集，并执行PCR，保存文件，再使用7500Software分析、判断。对KRAS基因3个外显子突变情况、NRAS基因2个外显子突变情况进行检测。

1.2.3 MSI分型检测

根据核酸提取试剂说明书对患者正常组织及肿瘤组织样本DNA进行提取，采用荧光多重PCR法对单核苷酸位点实施PCR扩增，按人类MSI检测试剂盒说明书操作，后对扩增产物采用ABI3500Dx基因分析仪检测，同时分析比较正常组织与肿瘤组织，以此对MSI状态实施分型。荧光多重PCR-毛细管电泳判读方法：由国家癌症研究所推荐标准实施判定。

1. 3. 统计学方法

采用SPSS20.0软件进行统计学处理，其中定量资料的检验是t，以（ ±s）表示，定性资料通过X²进行检验，以（％、n）表示，两组数据差异具有统计学意义P＜0.05。

2 结果

2.1 分析KRAS、NRAS基因突变、MSI与CRC的临床病理特征

KRAS基因在MSI CRC突变率为20%，较MSS突变率低，表明KRAS基因突变与MSI呈负相关，KRAS野生型更易出现MSI。NRAS基因在MSI CRC中的突变率为0%，MSS CRC突变率为11.67%，两组数据无差异（P＞0.05）。见表1。

表1 KRAS、NRAS基因突变、MSI与CRC的临床病理特征

2.2 KRAS、NRAS基因突变与MSI生存期相关性

由多因素分析发现，远处转移、KRAS基因突变与MSI有较大相关性，是CRC患者预后危险因素，P＜0.05。见表2。

表2 KRAS、NRAS基因突变与MSI生存期相关性

3 讨论

CRC疾病属于胃肠道中的恶性肿瘤，形成由MSI与CIN所致，微卫星在原核及真核生物基因组中存在，具有高度多态性的短串联重复核苷酸序列^[4]。MMR在DNA复制时，可修复错配碱基，确保遗传物质的稳定性，MMR突变极易降低DNA错配修复功能，患者存在MSI时临床病理特征较独特^[5]。在本研究中，CRC患者MSI发生率为25.00%，MSI若低于50岁，右半结肠肿瘤患者发生率较大于50岁患者高。

KRAS、NRAS基因属于同种家族，但是两种基因突变期间所产生的效应有较大差异，其中KRAS基因突变会出现肿瘤早期阶段，逐渐出现癌变^[6]。NRAS基因突变会使细胞出现凋亡，诱发恶性肿瘤生长。两种基因对比发现，NRAS突变率较KRAS低^[7]。本研究结果显示，NRAS基因突变率为0%,与其研究基本相同。NRAS基因突变与患者年龄、分化程度、肿瘤位置等不相关，主要是因NRAS基因突变率较低的缘故。本研究发现，KRAS基因突变率为20%。CRC中检测KRAS基因突变，能够预测对抗EGFR单抗的治疗反应，是预后的预测因素。

综上所述，CRC的形成主要是由MSI与KRAS通过不同的途径参与所致，可为治疗方案选择提供依据。

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