基于风险评估的腹膜透析液（乳酸盐低钙）-中国期刊网

基于风险评估的腹膜透析液（乳酸盐低钙）

无菌检查方法适用性研究

刘秀娟范珍珍

天津金耀药业有限公司

天津

300000

摘要：本文应用失效模式与影响分析（FMEA）工具针对我公司生产的腹膜透析液（乳酸盐低钙）(2000ml)（含葡萄糖1.5%）进行无菌检查适用性风险评估再验证，以确保本产品质量得到有效控制并能够保障其无菌检查结果准确有效。证明了本公司生产的腹膜透析液（乳酸盐低钙）(2000ml)（含葡萄糖1.5%）¹的无菌检查法在现有人员、仪器设备、试剂试药等实验条件下具有适用性。

关键词：风险评估，腹膜透析液，无菌检查，方法适用性

1风险评估及控制

风险管理是以预防及控制风险因素为目的的科学方法，已经在诸多领域得到了有效应用^[1]。风险管理包含有风险的识别、评估、控制和回顾等多种环节，质量风险管理流程启动后，按照此顺序周而复始的循环构成质量风险管理的过程^［^2-4^］。

风险评估依据验证状态评估的数据和结果，采用失效模式与影响分析（FMEA）的风险评估工具，针对测试项目排列优先次序，通过计算风险优先系数能够得到定性或定量的分析，更为直观地看到风险水平的变化，将所识别和分析的风险与给定的风险标准进行对比，确定检验方法的可靠性，找出高风险的项目，进而在再确认与再验证活动中进行测试确认。在相对风险的基础上，每一种被用于排序的故障模式，对应的是一个相对风险值即“风险指数”（RPN）^[1]。针对无菌检查方法列出的风险评估矩阵见表1-1，通过分析检查过程的高风险项，采取有效措施，降低最终的风险水平见表1-2。其中S-失效的严重性；P-失效发生的可能性；D-失效的可检测性；RPN风险指数；RPN＝严重性（Ｓ）×的可能性（Ｐ）×可检测性（D）

表1-1 风险评估矩阵

No.	确认项目	目的	失效事件	可能的原因	现有控制手段	S	P	D	RPN
1	培养基无菌检查控制点	确认培养基的无菌性。	培养基有菌生长。	（1）人员未按SOP要求操作。（2）灭菌柜出现异常。	（1）人员定期培训，考核合格后方可上岗操作。（2）设备人员维修灭菌柜。	3	1	1	3
2	培养基灵敏度验证控制点	确认培养基能够促进试验菌的生长。	培养基不支持试验菌的生长。	（1）人员未按SOP要求操作。	（1）配制人员严格按照SOP操作，定期培训，考核合格后方可上岗操作。	3	1	2	6
3	无菌检查方法适用性检查控制点	确认此方法对本产品具有适用性。	无菌检查方法适用性不符合规定。	方法不适于本产品；（2）人员未按验证方案执行。	（1）重新进行方法学验证。（2）配制人员严格按照SOP操作，定期培训，考核合格后方可上岗操作。	3	1	2	6

表1-2 风险控制矩阵

No.	确认项目	失效事件	RPN	建议采取的再验证活动	S	P	D	RPN
1	培养基无菌检查控制点	培养基有菌生长。	3	（1）重新对培养基进行配制灭菌。	3	1	1	3
2	培养基灵敏度验证控制点	培养基不支持试验菌的生长。	6	重新进行培养基的配制及灭菌；重新进行菌液制备、培养基接种。	3	1	1	3
3	无菌检查方法适用性检查控制点	无菌检查方法适用性不符合规定。	6	再验证，连续三批确认；培养基适用性检查。	3	1	1	3

2仪器和材料

2.1验证用供试品

选取本公司生产的腹透液批号为2004021，2004022，2004023的三批成品。

2.2验证用设备

验证中所有设备均已完成设备确认，符合检验要求方可使用。见表2-1。

表2-1 相关设备列表

设备名称	设备编号	型号	厂家
净化工作台（无菌）	0220603110	BJ-2C	上海博迅实业有限公司医疗设备厂
生物安全柜	023050349	BSC-1100ⅡA2-X	济南鑫贝西生物技术有限公司
生化培养箱1	PY37	LRH-250A	广东韶关医疗器械股份有限公司厂
生化培养箱2	PY26	LRH-250A	广东韶关医疗器械股份有限公司厂
脉动真空真空灭菌柜	MJ4	XG1.DTH-0.8	山东新华医疗器械股份有限公司
集菌仪	0230303132	HTY-2000B	杭州泰林生物技术设备有限公司

2.3验证用耗材

全封闭一次性集菌培养器²（厂家：浙江泰林生物技术股份有限公司，批号20190816，有效期至2021.08.15。验证中所用的培养基均须经过培养基适用性检查，培养基须经过高压蒸汽121℃灭菌15分钟，并且应保证在验证使用过程中都在灭菌的效期之内，如超出之后不再使用。相关相关培养基、缓冲液、试剂见表2-2。

表2-2 相关培养基、缓冲液、试剂列表

培养基及缓冲液名称	批号	生产厂家
硫乙醇酸盐流体培养基	20191203	青岛高科技工业园海博生物技术有限公司
胰酪大豆胨液体培养基	20191130	青岛高科技工业园海博生物技术有限公司
0.1%无菌蛋白胨水溶液	20200107	青岛高科技工业园海博生物技术有限公司
pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液	190728	北京陆桥技术股份有限公司
沙氏葡萄糖琼脂培养基	1904262	北京三药科技开发公司
沙氏葡萄糖液体培养基	1809252	北京三药科技开发公司
胰酪大豆胨琼脂培养基	190715	北京三药科技开发公司
聚山梨酯80	20170110	天津市科密欧化学试剂有限公司

2.4验证用菌种

表2-3 相关菌种列表

菌种名称	菌种批号	来源
大肠埃希菌	CMCC(B)44 102	中国食品药品检定研究院
金黄色葡萄球菌	CMCC(B)26 003	中国食品药品检定研究院
枯草芽孢杆菌	CMCC(B)63 501	中国食品药品检定研究院
铜绿假单胞菌	CMCC(B)10 104	中国食品药品检定研究院
生孢梭菌	CMCC(B)64 941	中国食品药品检定研究院
白色念珠菌	CMCC(F)98 001	中国食品药品检定研究院
黑曲霉	CMCC(F)98 003	中国食品药品检定研究院

3方法适用性验证

3.1样品的前处理

每次取用10袋腹透液，用预先配制好的消毒液对产品外包装进行擦拭消毒，并在风淋传递窗内风淋并紫外照射30分钟后，传入无菌检查室。

3.2试验组

首先过滤前每张集菌器滤膜用50ml冲洗液润湿滤膜，然后准备10袋供试品（供一株试验菌用），按薄膜过滤法每袋抽取200ml过滤后，加入不大于100cfu的制备好的试验菌，过滤。将硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基加至集菌器筒内。然后再取使用相同方法操作的装有相同体积培养基的集菌器，加入相同量的试验菌，作为对照组。置于规定温度下培养不超过5天，每种试验菌使用同样的方法操作。

（注：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌应分别接入硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度为30～35℃；枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉应分别接入胰酪大豆胨液体培养基，培养温度为20～25℃。）。验证结果如表3-1所示：与对照组比较，所含供试品各容器中的试验菌均生长良好，说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。

表3-1 验证结果汇总

菌名	组别	1天	2天	3天	4天	5天
大肠埃希菌	试验组1	+	+	+	+	+
	试验组2	+	+	+	+	+
	试验组3	+	+	+	+	+
	对照组	+	+	+	+	+
金黄色葡萄球菌	试验组1	+	+	+	+	+
	试验组2	+	+	+	+	+
	试验组3	+	+	+	+	+
	对照组	+	+	+	+	+
生孢梭菌	试验组1	+	+	+	+	+
	试验组2	+	+	+	+	+
	试验组3	+	+	+	+	+
	对照组	+	+	+	+	+
枯草芽孢杆菌	试验组1	－	+	+	+	+
	试验组2	－	+	+	+	+
	试验组3	－	+	+	+	+
	对照组	－	+	+	+	+
白色念珠菌	试验组1	－	－	+	+	+
	试验组2	－	－	+	+	+
	试验组3	－	－	+	+	+
	对照组	－	－	+	+	+
黑曲霉	试验组1	－	－	+	+	+
	试验组2	－	－	+	+	+
	试验组3	－	－	+	+	+
	对照组	－	－	+	+	+
阴性对照组	硫乙醇酸盐流体培养基	－	－	－	－	－
阴性对照组	胰酪大豆胨液体培养基	－	－	－	－	－

3.3供试品无菌检查

取供试品10袋，先用50ml冲洗液过滤，以润湿滤膜。每袋抽取1000ml药液均匀吸入过滤器完全滤过，在两份滤器中分别加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，在一份滤器中加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。其中一份硫乙醇酸盐流体培养基作为阳性对照,加入不大于100cfu的金黄色葡萄球菌，培养不少于3天，硫乙醇酸盐流体培养基放在30～35℃培养，胰酪大豆胨液体培养基放在20～25℃。培养不少于14天。另取一同法操作装有同体积硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基的滤器，作为阴性对照。检查结果无菌生长，符合规定，表3-2。

表3-2 样品无菌检查结果

项目

培养基

名称

培养天数（天）

检验结论

阳性培养

天数

阳性检验

结论

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

阴性

硫乙醇酸盐流体

－

√

1

2

3

胰酪大豆胨液体

－

√

样品

硫乙醇酸盐流体

－

√

+

√

胰酪大豆胨液体

－

√

结论

☑符合规定 □不符合规定

注：“+”为培养基出现混浊；“－”为培养基澄清透明。

4结论

依据验证状态评估及风险评估及控制措施，使用FMEA可以有效地改进无菌检查方法高风险因素，提高方法适用性的质量、可靠性与安全性。通过连续三次对产品进行无菌检查方法适用性验证，可以看出与对照组相比供试品组生长良好，说明腹膜透析液（乳酸盐低钙）可以按先用50ml冲洗液过滤，以润湿滤膜。然后取供试品10袋（供一种培养基用），每袋抽取200ml，按薄膜过滤法完全过滤后，最后将硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基加至滤筒内进行供试品的无菌检查。

无菌检查方法适用性验证利用文件化的证据^[5-6]，证明在现有的人员、材料、设备、方法、环境条件以及其他有关公用设施的条件下，该方法适用于我公司生产的腹透液的检验，符合GMP要求。

参考文献

[1]张银花. FMEA法在冻干粉针剂生产过程中的风险管控[D].延边大学,2017.

[2]黄晓丽, 宋雅丽. 质量风险管理在制药中的应用[J]. 煤炭与化工, 2012(9):22-24.

[3]程五琴,张玲,武志敏.风险评估在血液透析管理中的应用研究[J].中国民间疗法,2018,26(03):81-82.

[4]药品质量风险管理[M]. 中国医药科技出版社 , 李钧, 2011

[5]黄曙光, 张志峰. 基于风险评估的无菌原料药工艺验证[J]. 机电信息, 2014(32):13-15.

[6]刘燕, 申志峰, 陈成. 基于风险评估的吹灌封无菌工艺的验证[J]. 化工与医药工程, 2018, 039(002):P.31-37.

1 正文中简称“腹透液”

2 以下简称集菌器

1

基于风险评估的腹膜透析液（乳酸盐低钙）