高效液相色谱紫外法测定中药中β-细辛醚含量的探讨

高效液相色谱紫外法测定中药中 β-细辛醚含量的探讨

张佩

三门峡市食品药品检验检测中心，河南省三门峡市， 472000

摘要：科学技术水平的提高带动了高相液相色谱紫外法的发展，并广泛应用于医学、化学等领域。基于此，本文通过调查高效液相色谱紫外法与β-细辛醚概述及检测意义，重点探讨测定中药中β-细辛醚含量的高效液相色谱紫外法，以供参考。

关键词：高效液相色谱紫外法；中药；β-细辛醚

引言：在中药中，β-细辛醚具有平喘、止咳以及化痰的作用，但该成分具有极高的毒性，若是中药中β-细辛醚的含量过高，极有可能造成窒息性死亡或是引发癌症。因此，探讨高效液相色谱紫外法测定中药中β-细辛醚含量是十分必要的。

1.高效液相色谱紫外法与β-细辛醚概述及检测意义

高效液相色谱紫外法属于色谱法，是一个十分重要的分支，通过使用高压输液系统，将液体作为流动相，并将不同极性的溶剂按照实际需求进行混合，之后将其装入具有固定相的色谱柱，分离成分后使用检测器进行测定。高效液相色谱紫外法的作用原理是利用特定波长紫外光的选择性吸收进行测定，在此过程中遵循比尔定律，是目前应用最为广泛的方法之一，其特点是具有较高的灵敏度，线性范围较宽，还可以根据实际情况选择合适的波长，便于相关检测人员的操作。

β-细辛醚是天南星科植物石菖蒲的主要活性成分之一，存在于其新鲜根茎，也被称为β-细辛脑，其化学分子式为C12H16O3，主要用于平喘、化痰、止咳，有镇静、安定的作用，并具有特殊的抗性腺功能和轻微的降血压作用，其毒性分级为高毒，本品能够致癌。由此可见，一旦中药中β-细辛醚的含量超标，极易对人体造成不可挽回的伤害，为此，使用高效液相色谱紫外法对中药中的β-细辛醚含量进行检测具有极强的现实意义。通过高效液相色谱紫外法，能够对中药进行定性鉴别，其气相色谱法主要是定性分析中药挥发油以及定量分析中药的组成成分，高效液相色谱法主要是定量分析中药中的有效成分，从而明确β-细辛醚含量，为中药质量控制奠定良好的基础。

2.探讨测定中药中β-细辛醚含量的高效液相色谱紫外法

2.1准备仪器，制备溶液

在开展该测定实验时，主要需要准备的仪器有：高效液相色谱仪，分析天平，VP-ODS色谱柱，β-细辛醚对照品，超声波清洗器；需要准备的试剂有：甲醇，甲酸，二次蒸馏水。同时，并准备多个产地的石菖蒲药材，在开展实验前需要对药材进行鉴定，保证其为天南星科石菖蒲。在制备溶液之前，相关测定人员应对色谱条件进行考察，为后续工作奠定良好的基础。在考察该条件时，主要使用色谱柱考察色谱条件，柱温箱温度分别为35℃、30℃以及25℃，流动相分别为甲醇-水（0.1%甲酸）60∶40,55∶45,70∶30，波长为257nm、253nm以及250nm。在对其进行考察后，选择最佳色谱条件，在该情况下，最佳色谱条件为：波长250nm，流动相为甲醇-水（55∶45），温度为30℃，流速为每分钟一毫升。

在对溶液进行制备时，主要需要制备两种溶液，分别是对照品溶液以及供试品溶液，制备对照品溶液时，称取β-细辛醚对照品，精密称定，加甲醇适量使溶解，定容，摇匀，得浓度为0.125mg/mL的对照品溶液。在制备供试品溶液时，称取约0.1g的样品，精密称定，置于锥形瓶中，然后加入甲醇25ml，对其总重进行称量。使用超声波清洗器对其进行超声处理，时间定时为四十五分钟，之后把瓶外壁的水擦干，冷却至室温，然后再次称量总重，如果重量减少则加甲醇补足，摇匀并过滤，取续滤液，进样前微滤^[1]。

2.2测定方法

首先，考察其线性范围。适量取对照品将其制成不同质量浓度的β-细辛醚，具体参数为：0.0083,0.1250，0.0050,0.0250,0.0500,0.0130mg/mL，之后吸取20μL的混合对照品溶液并将其注入高效液相色谱仪，对其定峰面积进行测定从而获得β-细辛醚的回归方程，具体为：Y=6.06×10⁷X+23624.9，该方程意味着在0.005-0.125mg/mL的范围内，β-细辛醚的线性关系良好。其次，进行多项试验。①进行精密度试验。按照上述步骤连续进样六次，对其定峰面积进行测定，RSD数值为0.2%，意味着仪器精密度达标。②进行供试品溶液的稳定性试验。具体步骤是吸取20μm对照品溶液并进样，并将进样时间控制为0,1.0,1.5,4.0,6.0,8.0小时，之后对其定峰面积进行测定，RSD为1.5%，其稳定性达标。③开展该测定方法的重复性实验。具体步骤是称取0.1g的样品并将其平均分为六分，之后进行供试品溶液的制备、定峰面积的测定，RSD为1.7%，β-细辛醚含量平均值为百分之零点九四，意味着重复性良好。④进行加样回收率试验。在开展该试验时，主要是称取0.1g的石菖蒲粉末，分别称取六份，之后分别加入百分之一百二十、百分之一百以及百分之八十的β-细辛醚对照品，之后制备并测定样品溶液，对其加样回收率进行计算。从当前数据来看，其回收率分别为100.97%、98.43%、102.10%、97.47%、97.08%以及101.13%，经计算，其平均回收率为99.53%，RSD为2.14%。⑤测定样品中β-细辛醚含量。在掌握加样回收率且保证各个试验环节有效后，对样品中β-细辛醚的含量进行测定。如上所述，在开展该试验时应选择多个产地的石菖蒲，本次试验主要选择八个产地，之后制备供试品溶液。在对其进行制备时，主要是称取0.1g的样品药粉，需要注意的是，在称取前需要保证样品粉末经过了65目筛。之后，将称取的样品粉末置放于锥形瓶中，称取甲醇25mL并将其加入到放置样品粉末的锥形瓶中，称量总重，超声处理四十五分钟，将超声处理后减少的重量用甲醇补足，摇匀后过滤，取续滤液作为供试品溶液，进样前微滤。之后，选择合适的色谱条件，在该情况下最佳条件为：温度为30摄氏度，流速为每分钟一毫升，由于β-细辛醚的甲醇溶液在被紫外线进行扫描时其最大吸收量确定在250nm处，所以，检测波长为二百五十纳米，流动相甲醇-水为55∶45，严格按照该条件进样，进而对β-细辛醚的含量进行测定

^[2]。

2.3测定结果及探讨

在以上述条件对中药中的β-细辛醚含量进行测定后，其结果为：1.30%、2.20%、1.18%、2.26%、0.98%、0.86%、2.10%、2.36%，由此可见，β-细辛醚在中药中的含量为0.86%-2.36%之间。通过测定不同产地的中药样品后发现，不同产地的石菖蒲其β-细辛醚含量具有一定程度上的差异，这有可能与当地条件、工艺控制等方面有关，具体原因仍需要进行进一步探讨，但该结果能够为不同地区的工艺控制工作提供有效的数据支撑。通过使用高效液相色谱紫外法对中药中的β-细辛醚含量进行测定，能够较为快速完成实验的同时保证测定的准确性，而且，在对样品以及溶液进行处理时，整体流程较为简单，方法简便灵敏，回收率良好，能够顺利掌握β-细辛醚的具体含量，所以，将该方法用于中药的β-细辛醚含量检测工作是可行的。

结论：综上所述，将高效液相色谱紫外法应用于中药的β-细辛醚含量检测工作中具有极强的现实意义。因此，相关人员应积极学习该测定方法，并严格按照流程以及规范进行操作，从而保证测定结果的准确性，为人们中药的使用提供保障。

参考文献：

[1]李清,何明月,瞿发林,谭兴起,董文燊,倪玉佳,邵留英.高效液相色谱法测定不同产地假蒟中的α-细辛脑含量[J].药学实践杂志,2019,37(04):348-351.

[2]梁晓东,张茜,韦云,刘龙涛,李浩.高效液相色谱法同时测定还脑益聪方中α-细辛醚、β-细辛醚和细辛醛的含量[J].山东中医杂志,2018,37(01):67-70.