自身免疫性肝病与隐匿性HBV感染的相关性研究

自身免疫性肝病与隐匿性HBV感染的相关性研究

史罗明周根法吴剑明张锁才

（常州市第三人民医院肝病科江苏常州213000）

【摘要】目的：评估自身免疫性肝病不同亚型，即自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)和原发性硬化胆管炎(PSc)患者中隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染情况，并探讨隐匿性HBV感染与ALDS之间有无相关性。方法：检测386例HBsAg阴性自身免疫性肝病患者初诊血清标本（自身抗体、HBVM、HBV-DNA）等。结果：发现有HBVM阳性患者168例，占43.52%，其中HBV-DNA阳性19例，占11.3%。168例隐匿性HBV感染患者中AIH、PBC和PSC患者分别为50.59%（85/168）、47.02%（79/168）和2.35%（4/168）。结论：自身免疫性肝病患者中隐匿性HBV感染率较高，ALDS与隐匿性HBV感染密切相关。

【关键词】肝炎，自身免疫性；隐匿性HBV，乙型；DNA；感染

Abstract：objectiveToevaluatethedifferentmutetypesofautoimmuneliverdiseases，namely，autoimmunehepatitis(AIH)andprimarybiliarycirrhosis(PBC)，primarysclerosingcholangitis(PSc)inpatientswithocculthepatitisbvirus(HBV)infection，andoccultHBVinfectionandthereisnocorrelationbetweentheALDS.Methods386casesofHBsAg-negativeserumspecimensinpatientswithnewlydiagnosedautoimmuneliverdisease(theirownantibodies，HBVM，HBV-DNA).SultsFound168patientswithHBVM-positive，43.52%，HBV-DNAofwhich19werepositive，11.3%.168casesofoccultHBVinfectioninpatientswithAIH，PBCandPSCpatientswere50.59%(85/168)，47.02%(79/168)and2.35%(4/168).ConclusionofautoimmuneliverdiseasesinpatientswithoccultHBVinfectionratewashigher，ALDSiscloselylinkedtooccultHBVinfection.

Keywords：Hepatitis，autoimmune;occultHBV,HhepatitisB;DNAinfection

众多研究显示，在部分乙型肝炎表面抗原(hepatitisBsurfaceantigen，HBSAg)已经成功清除的急性自限性或慢性乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染患者血清和肝组织中仍可检测到低水平乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitisBvirusdeoxyribonucleicacid，HBv-DNA)［1］，这种血清HBsAg阴性，而血清和／或肝组织HBv-DNA持续阳性的现象称为隐匿性HBV感染［2］。隐匿性HBV感染具有传染性和致病性，在肝脏疾病病因学诊断、献血安全和防止器官移植受者HBV感染等方面均具有重要意义［3］。自身免疫性肝病(autoimmuneliverdiseases，ALDS)主要包括自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis，AIH)、原发性胆汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis，PBC)和原发性硬化胆管炎(primarysclerosingcholangitis，PSC)等，其发病机制尚未阐明。为了探索自身免疫性肝病与隐匿性HBV感染之间是否存在相关性，本组对我院近年收治的HBsAg阴性的自身免疫性肝病患者进行了探索研究，现总结如下：

1.资料与方法

1.1一般资料本组386例HBsAg阴性的自身免疫性肝病患者均来自本院2006年10月至2016年10月的住院患者。发现有HBVM阳性患者168例，占43.52%，其中HBV-DNA阳性19例，占11.3%，年龄20-76岁，平均年龄51.6岁，男性12例，女性156例。168例隐匿性HBV感染患者中AIH、PBC和PSC患者分别为50.59%（85/168）、47.02%（79/168）和2.35%（4/168）。AIH诊断参考2002年国际自身免疫性肝炎小组制订的AlH诊断标准和不典型AIH的诊断积分系统［4］；PBC诊断参考美国肝病协会2000年制订的PBC诊断标准[5]；PSC诊断根据生化和／或胆汁淤积的临床症状、肝脏组织学特征和间接免疫荧光方法、蛋白印迹方法和酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELlSA)方法检测抗线粒体抗体持续阴性和／或核磁共振胆道造影或内窥镜逆行胰胆管造影术显示特征性病变。

1.2.1检测患者外周血自身抗体及其滴度：采用德国欧蒙实验诊断公司肝脏马赛克，间接免疫荧光法检测患者外周血自身抗体：抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗肝细胞膜抗体(LMA)、抗肝细胞溶质抗原l型抗体(Lc—1)、抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)，抗线粒体抗体(AMA)一M2亚型。待检血清自l：l00起稀释，与组织细胞孵育30分钟；加入异硫氰酸荧光素(FTTC)标记的抗体结合30分钟；洗片、封片后荧光显微镜观察结果。组织或细胞内出现特异性绿色荧光、血清稀释度>l：100为阳性。

1.2.2ELISA法检测全部血清的病毒学肝炎指标：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、HAVIgM、HCVIgG、HEVIgM、CMV?IgM、EB-IgM等。

1.2.3厦门安普利生物工程有限公司9800荧光定量一聚合酶链反应(fluorescentquantitation_polymerasechainreaction，FQPCR)扩增仪；HBV核酸扩增FQPCR试剂盒，由厦门安普利生物工程有限公司提供。FQPCR检测方法1)标本采集、处理：抽取被检者静脉血2mL，室温放置20min自然凝固，离心半径为8cm，3000～4000r／min离心10min，吸取血清，移至另一离心管中。核酸扩增和温度循环条件设置严格按照厂商试剂说明书进行。2)HBV—DNA定量检测：参考文献[6]，采用FQPCR法，定量结果大于1．00×103copy／mI。为判断阳性的标准。连续4次FQPCR测定提示HBv-DNA阳性者被认为HBvDNA测定阳性。

1.2.4．各项生化指标及乙型肝炎血清学标记物检测采用0lympusAU5400生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(alanineaminotransferase，ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartateamin-otransferase，AST)、r谷氨酰转肽酶(rglutamyltranspeptid-ase，rGT)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、r球蛋白、总胆红素、凝血酶原时间、免疫球蛋白和血小板数量；血清IgM、IgG和IgA等免疫球蛋白检测采用速率散射免疫比浊法在IMG800特种蛋白分析仪上检测；HBV感染的各项血清学标记物经ELISA方法检测。

1．3统计学分析应用SPsS11．5统计软件，计量资料以i±s表示，采用t检验，计数资料以例数或百分率进行描述，应用四格表x2检验，P<O．05为差异有统计学意义。

2.结果

1．ALDS患者中隐匿性HBV感染率统计FQ-PcR的检测结果显示,HBsAg阴性ALDS患者中HBv-DNA阳性率(11．3％)，显著大于健康对照组(O．18％)，差异有统计学意义(P值均小于0．0001)。其中AIH组、PBC组和PSC组患者HBv-DNA阳性率分别为14．12％(12／85)、8．86％(7／79)和0％(0／4)，与健康对照组比较，差异均有统计学意义(P值均小于0．ooo1)。

2.ALDS患者中隐匿性HBV感染HBVM分布情况ALDS患者中隐匿性HBV感染的HBVM分布情况见表1。

3讨论

近年来，随着分子生物学技术不断进步，使得部分HBsAg阴转的急性或慢性乙肝患者，其血清中仍可检测出低水平HBV—DNA或在肝组织中检测出HBsAg或HBcAg，以上这些患者被称为HBV隐匿感染。隐匿性HBV感染的发生机制可能与以下因素有关：(1)HBV极低水平复制，而使其不易检出；(2)HBV基因变异，尤其是S基因突变可影响HBV蛋白的表达，导致HBsAg阴性；(3)HBsAg分泌障碍；(4)HBV整合到宿主染色体中，导致病毒基因重排，影响HBsAg的表达；(5)外周血单核细胞(PB—Mc)感染HBV；(6)在机体免疫功能低下或免疫耐受的情况下可能产生隐匿性HBV感染；(7)HBV的免疫复合物形成，导致HBVM不能检出；(8)病毒或其它因素对HBsAg合成的影响，如HCV、HDV重叠感染时患者原有的HBV标志物可阴转；(9)检测方法的灵敏度和特异度［7］。ALDS是由自身免疫反应引起的一组不明原因的慢性肝脏疾病。相比我国，欧美地区对此病的研究不仅起步早，而且研究成果也十分显著，因此以往认为东方人的发病率较低，但近年来随着检验技术的提高和对该病患者认识的深入，国内逐渐开始重视此类疾病的研究。我国相关临床文献报道近年来其发病率不断上升。ALDS患者早期症状不明显，病因不明确，在诊断上存在难度。本研究发现HBsAg阴性的自身免疫性肝病患者中有HBVM阳性患者168例，占43.52%。提示ALDS与隐匿性HBV感染密切相关。ALDS及隐匿性HBV感染可能与机体免疫功能异常有关。因此对于不明原因肝病患者不仅需要自身抗体的检测，HBVM相关指标的检测有利于ALDS诊断和治疗。必要时进行肝活检病理和免疫组织化学检查极为重要。

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