灵芝饮料浓缩液的抗疲劳、耐缺氧和增强免疫力的作用研究

灵芝饮料浓缩液的抗疲劳、耐缺氧和增强免疫力的作用研究

徐丽华

徐丽华（广东省第二人民医院药学部广东广州510315）

【摘要】目的研究灵芝饮料浓缩液的抗疲劳、耐缺氧及改善免疫力的作用。方法采用小鼠游泳实验、常压缺氧实验和碳粒廓清实验研究测定饮料浓缩液对游泳时间，耐缺氧时间和碳粒廓清指数的影响。结果与对照组比较，灵芝饮料浓缩液对受试小鼠的游泳时间（P﹤0.05），耐缺氧条件下的生存时间（P﹤0.05）和提高炭粒廓清能力（P﹤0.05）。结论具有灵芝饮料浓缩液明显的抗疲劳、耐缺氧作用，促进免疫的作用。

【关键词】灵芝饮料浓缩液抗疲劳耐缺氧增强免疫力

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）23-0072-02

灵芝是一种真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效[1]。在我国传统医学中，灵芝被列为上药，具有治疗多种疾病之功效。本研究是将灵芝提取物开发成一种饮料，研究其抗疲劳、耐缺氧和改善免疫力的功能。

1材料与方法

1.1实验动物和饲养环境

SPF级NIH小鼠228只，雄性，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SGXK（粤）2011-0008，粤监证字：2011A028。饲养于广州中医药大学大学城动物中心SPF级动物实验室，5只/箱，群养，温度：20～25℃，湿度40～70％，采用12h：12h昼夜间断照明，自由进食和饮水，饲料和饮用水均由本中心提供，环境设施使用许可证：SHJK（粤）2011-0037。

1.2药物

灵芝饮料：由香港鸿兴药业发展有限公司提供,产品标准号:P/ZHB-01-2011,产品专利号:2011300376322.规格:每瓶含原药材9g。以成人日常用量为3瓶为标准,受试药物按日常用量的10倍,20倍,40倍分别做为低、中、高三个剂量，每只给药按0.2ml/10kg计算，分别取饮料灵芝浓缩液22.5ml,45ml,90ml分别加蒸馏水配成100ml溶液。维物健灵（阳性药），维特健灵大药厂产品，成人（60kg）用量：2粒/日，3次/日，0.3g药粉/粒

1.3主要试剂和仪器

印度墨汁：北京西中化工厂生产，批号：110330。游泳箱（50cm×50cm×40cm）；UV2800紫外分光光度计：上海尤尼卡仪器有限公司；kS-3000A电子天平：上海友声衡器有限公司；

2实验方法

2.1灵芝饮料浓缩液对低温和常温状态下小鼠游泳时间的影响[2-3]

取NIH系小鼠144只，清洁级，雌雄各半，随机分为空白组、维特健灵对照组、草姬胶囊对照组、灵芝饮料浓缩液低剂量组、中剂量组和高剂量组，24只/组。灌胃给药，1次/天，连续30天。末次给药1h，在动物尾部负5%体重的物体。然后将每组一半的动物放入水深20cm，水温为10±0.5℃的水桶中游泳，另一半动物放入水深20cm，水温为25±0.5℃的水桶中游泳。当小鼠头部沉入水中10秒不能浮出水面即为体力耗竭，即刻停止计时，记录小鼠的游泳时间。

2.2灵芝饮料浓缩液对缺氧状态下小鼠生存时间的影响[2，3]

取NIH系小鼠72只，清洁级，雌雄各半，随机分为空白组、维特健灵对照组、草姬胶囊对照组、饮料灵芝饮料浓缩液低剂量组、中剂量组和高剂量组，12只/组。每天灌胃1次，连续10天，末次给药后30min后，将小鼠放进50ml的玻璃注射器中，用橡皮泥将注射器密封，同时将注射器推到刻度为80ml处，观察并记录小鼠的死亡时间。小鼠停止呼吸后，立即取出，从小鼠心脏取微量血液，采用血球仪测定血红蛋白的含量。

2.3灵芝饮料对小鼠单核巨噬细胞吞噬能力的影响[2.3]

NIH小鼠84只，体重18-22g，雄性。随机分为阴性对照组、模型对照组、维特健灵对照组、草姬胶囊对照组、饮料灵芝浓缩液低剂量组、中剂量组、高剂量组，12只/组。各组动物共给药10天，造模前各组动物先预防性给药3天，从第4天起除空白组外各组按70mg/10ml/kg腹腔注射环磷酰胺，空白组注射生理盐水，连续三天。末次给药1h后，按0.1ml/10g体重尾静脉注射中华墨汁，于注射后30s和6min用毛细玻管分别从眶静脉丛取血，然后立即用微量移液管取血25ul溶于2ml0.1%碳酸钠溶液中，微量移液管在该液中吸入、吸出数次以充分洗出移液管管壁附着的血液，然后用分光光度计在波长675nm下比色，测定OD值，最后将小鼠处死，称取肝、脾重量，按下式计算吞噬指数（廓清指数）K或吞噬系数（校正廓清指数）α。

α=K1/3×体重/(肝重+脾重)

注：OD1、OD2为不同时间所取血样的光密度，t1-t2为取两血样的时间差。

3统计学方法

所有数据采用SPSS13.0软件进行统计分析。将原始数据以均数加减标准差表示（x-±s），单因素方差分析。

4结果

4.1灵芝饮料浓缩液对低温状态下小鼠游泳时间的影响（见表1）

表1灵芝饮料浓缩液对小鼠游泳时间的影响（x-±s）

注：与对照组比较，“*”P﹤0.05和“**”P﹤0.01

实验结果表明，灵芝饮料浓缩液各剂量组小鼠低温游泳时间与阴性对照组比较显著性延长，具有统计学差异（P<0.05）；灵芝饮料浓缩液中、低剂量组小鼠的常温游泳时间与空白对照比较显著性延长，具有统计学差异（P<0.05）。

4.2灵芝饮料浓缩液对缺氧状态下小鼠生存时间的影响（见表2）

表2饮料灵芝浓缩液对小鼠缺氧条件下生存时间的影响（x-±s）

“*”“**”与对照组比较，P﹤0.05，P﹤0.01

实验结果表明，与对照组比较，灵芝饮料浓缩液中、高浓度和维特健组在延长小鼠缺氧条件下的生存时间具有显著性差异（P<0.05）。饮料浓灵芝缩液低剂量组以及草姬组则无显著性差异（P>0.05）。

4.3饮料灵芝浓缩液对免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响（见表3）

表3饮料灵芝浓缩液对免疫功能低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响

“△”与对照组比较，P﹤0.05；“*”“**”与模型比较，P﹤0.05，P﹤0.01

实验结果表明，模型组小鼠的吞噬指数K与阴性对照组比较显著性降低，具有统计学差异（P<0.05），但吞噬系数a无统计学差异（P﹥0.05），说明免疫功能低下小鼠模型造模成功；灵芝低、高剂量组和阳性组小鼠的吞噬指数K与模型组比较显著性升高，具有统计学差异（P<0.05）。与模型组比较，灵芝高剂量组和阳性组小鼠的吞噬系数a与模型组比较显著性升高，具有统计学差异（P<0.05）。

5讨论

灵芝的药效近年来被大量研究与探讨，并证实其具有较大的生产价值[4]。灵芝一直以来均是我国广泛使用的药材，被认为是药食同源之保健素材，具有多种疗效与保健功能。将灵芝开发成新式餐饮产品，不仅大大加强药用与保健植物的开发与利用，而且方便大众，容易获得，使用方面。本项目根据《保健食品功能学评价程序与方法》对新式餐饮产品灵芝饮料浓缩液进行抗疲劳、耐缺氧和改善免疫力的功能学研究。

糖原是运动能量的重要来源，糖原的储存量可直接影响肌体的运动能力[5]。提高糖原储备量有助于提高耐力和运动能力，有利于抗疲劳的产生。灵芝含有大量的多糖，加上饮料添加的糖分，明显增加能量物质的储备，为肌体提供更多的能量来实现抗疲劳，还能显著提高糖原恢复率，为运动后迅速恢复提供了物质保障。

灵芝含有丰富的氨基酸、微量元素等，可为机体合成血红蛋白提供充足的原料。提高机体对缺氧的耐受能力，增加红细胞内糖酵解旁路的中间代谢产物2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）含量，使氧合血红蛋白解离曲线右移，有利于外周血管中氧合血红蛋白释放更多的氧，供组织细胞氧代谢消耗，增强机体的抗病能力。

巨噬细胞是免疫系统最重要的细胞之一，在免疫应答与免疫调节过程中起着重要的作用。灵芝可以促进巨噬细胞吞噬功能和加速网状内皮细胞对碳粒的清除。本研究以单核-巨噬细胞吞噬碳粒功能检测反应机体的细胞免疫功能，结果表明灵芝饮料浓缩液具有良好的促进巨噬细胞吞噬功能的作用。

参考文献

[1]牛君仿，方正，王红庚，等.灵芝有效化学成分的研究进展，河北农业大学学报，2002,25：51-54.

[2]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范.2003年版.

[3]陈奇主编.中药药理研究方法学，人民卫生出版社，第2版.

[4]Duh，P.D.AndYen.G.C(1997).Antioxidativeactivityofthreeherbalwaterextarcts.FoodChemistry，Vol60，No.4，PP:639-645.

[5]BANKP，BARTCLYW，BITRTI，M.Thebiochemistryofthetissues[M].2anded，London:JohnWiley&Sons，1976:214.