SPIFE4000全自动电泳系统使用体会

SPIFE4000全自动电泳系统使用体会

李章勇1许广伟2国秀芝3

李章勇1许广伟2国秀芝3

（1郴州市第一人民医院检验科湖南郴州423000)

(2威海卫人民医院山东威海264200;3中国科学院北京协和医院检验科100730）

【中图分类号】R197.39【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）2-0123-02

【关键词】免疫固定电泳SPIFE4000系统故障

目前美国Helena公司推出了便捷的SPIFE4000全自动电泳系统可进行蛋白电泳、免疫固定电泳、同功酶电泳、脂蛋白电泳等检测，现用该系统进行免疫固定电泳，体会如下：

1标本留取

免疫固定电泳的标本可以是血标本、尿液或脑脊液[1]（目前本仪器暂测血、尿标本）。标本量须>2ml。血标本要求清晨空腹抽取静脉血，及时分离血清，忌用溶血标本及血浆标本；尿标本必须是清洁无污染，最好使用晨尿。

2标本保存

标本可在2～6℃保存72h[2]，在此条件下，对免疫球蛋白影响不大。若短期内不进行实验，可在-20℃条件下保存1个月。避免反复冻融，使免疫球蛋白结构发生改变。

3仪器的影响因素

3.1仪器的设定与保养SPIFE4000系统分析免疫固定电泳(IFE)的过程是全自动的过程。仪器自动完成一系列操作，包括：加样到加样槽和琼脂糖凝胶片、电泳、免疫固定、冲洗、染色、脱色和干燥凝胶、使用可见光光密度计扫描凝胶、显示与打印结果等[3]。系统内置了包含血清、尿蛋白电泳和免疫固定电泳的预设置编程参数。如果需要的话，终端用户可以更改这些电泳的参数设定，任意创建新的电泳程序，电泳条带的长度和宽度也可以调节。在通常情况下，我们采用厂家推荐的程序设置。每天工作后按说明书对仪器进行日，周，月保养，清理机内废物，清洗抗体板和样品稀释板（抗体板应每24h清洗一次，然后用吐温溶液泡十分钟，晾干）。

3.2试剂盒的使用使用美国Helena公司配套的血清免疫固定电泳试剂盒。试剂盒提供的凝胶片、点样刀锋、厚薄吸水纸、梳式吸水纸均为一次性的，可避免交叉污染。密封包装的琼脂糖凝胶胶片可在室温下保存，水平放置，在实验前方可打开包装，确保胶片水份不丢失。抗体试剂必须在2～6℃冰箱保存，若抗体失效则不能使用。

3.3仪器的准备工作实验前必须按照操作规程做好准备工作，添加点样刀锋，厚薄吸水纸，（点样刀锋的正反面很关键，不能放反，否则仪器会报警）安装干净的抗体板，放置抗体试剂，关好各个舱门。检查稀释液，染液，洗液是否充足，废液桶是否清空。然后运行管道清洗。

3.4实验前标本的处理高浓度免疫球蛋白与抗体浓度不匹配，可造成抗原过量，过量的抗原能够溶解凝胶中形成的抗原抗体复合物，形成中空的条带。而且电泳区带着色太深，不便于结果的分析。所以实验前应调节免疫球蛋白的浓度，这是IFE最重要的前提。一般情况，结合血清蛋白电泳结果及历史结果，对标本稀释倍数进行判断，正常标本按蛋白固定（SP）泳道1:3稀释，IgG、IgM、IgA、κ、λ泳道各1：5稀释。当免疫球蛋白的浓度超出正常范围时，将该泳道标本稀释倍数进行调整。该仪器具有自动稀释功能，从原倍到1：14之间多种可供选择的稀释倍数。注意调整了稀释倍数的一组标本不能和常规标本放在一个传送转盘同时进行检测，应该换盘进行。标本放置传送转盘时，注意标本管的高度，及血清液面要高于转盘面0.5ml。否则仪器会吸不到样，或损坏吸样针。

3.5实验过程开始实验时，将预吸干的凝胶片放入凝胶保湿器中。其中胶片的吸水过程非常关键，吸水时要受力均匀，不能重复吸水，吸水的好坏直接影响结果的好坏。一切准备好后，按照程序开始，仪器自动完成整个电泳过程。若实验过程中有报警提示，及时处理。若因仪器中途故障而停止，需重复实验时，可人为选择进行未完成的步骤。

4仪器常见故障及处理

4.1出现Controland/orNDDCoutofrang报警，提示：质控或NDDC超出范围。报警原因：是电源波动问题。处理：检查电源，与HelenaLaboratories公司联系。

4.2出现Nosampledispensingintosampletray报警，提示：没有样品分配到样品槽中。报警原因：是去离子水瓶空、针堵塞、转盘中无样品、去离子水管中有气泡、管或泵故障。处理：重新填注去离子水、清洗针、装载转盘、灌注仪器、替换泵头。

4.3出现Stainerleverdetectorfailures报警，提示：染色液液面检测故障。报警原因：电气故障、染色槽没有染色液。处理：确定染色液桶正确与仪器连接正常并且染色液桶中有染色液。

4.4出现Electrophoresisgelhasrepeateddist她ortioninsamearea报警，提示：电泳凝胶多次在同一区域出现变形。报警原因：接触薄板使用时间过长。处理：替换接触薄板。

4.5出现Gelappearsunacceptable报警，提示电泳后凝胶结果不好。报警原因：编程有问题或试剂瓶有问题。处理：对照用户记录的编程参数检查检测项目编程，如果参数更改，重新输入参数；若编程没问题，检查试剂瓶是否空了并重复检测。

5结果分析

单克隆免疫球蛋白带(M带)是呈狭窄浓染且致密界限分明的沉淀带，与血清蛋白电泳(SPE)的M带出于同一个水平位置，呈“镜像式”的呼应[4]。它可以是完整的免疫球蛋白分子如IgG、IgA、IgM、IgD，也可以是重链和轻链片段。

6小结

随着技术的进步，越来越多的单克隆免疫球蛋白（M蛋白）病被检测出来，人们也逐渐重视对M蛋白的检测，标本量快速增加。目前大多数实验室都使用手工和半自动电泳仪进行IFE实验，即费时又费力，必然会逐渐被全自动电泳仪取代。美国HelenaSPIFE4000全自动免疫电泳系统使操作程序变得简单，凝胶片结果清晰易懂，准确可靠；可批量进行检测，节省检测时间和人力成本，方便临床诊断;仪器易于保养,故障率少；可以开展多种电泳项目等优点。完全适应和满足大医院和专科医院的需要，值得推广。

参考文献

[1]朱国庆，姚宏静.免疫固定电泳的应用体会[J].实用医技杂志，2007，(12）:14-35.

[2]杨莉萍，李东东，龚水明，陈少莲.不同保存温度和时间对血清免疫球蛋白含量的影响[J].临床和实验医学杂志，2011，(2）：163-164.

[3]耿红莲，王爱华，赵文静，孔宪涛，仲人前.免疫固定电泳在多发性骨髓瘤患者实验室诊断中的应用[J].现代检验医学杂志，2009，(24）1：76-78.

[4]杨志才，高玉洁，张春明等.多发性骨髓瘤血清蛋白电泳与免疫学分[J].国际检验医学杂志，2005，26(7)：34—35.38.