桑椹提取物的研究

桑椹提取物的研究

方涛

方涛（武汉市中医医院湖北武汉430014）

【摘要】桑椹为桑科植物桑的干燥果穗，既是食品又是药品。桑椹提取物质量标准的研究，对安徽及其周边地区盛产的这一药用植物品种的资源开发和综合利用都具有重要的意义。本文通过对桑椹的药理作用和临床应用的大量资料的研究，确定了桑椹提取物中的主要功效成分为花色普和芦丁。本文建立了桑椹提取物桑椹中花色昔的紫外检测和芦丁的HPLC检测方法。综合考虑原料质量和工业生产的可操作性，制定了以水分，炽灼残渣，重金属含量，花色昔和芦丁含量为指标的桑椹提取物质量标准，系统地规范了桑椹提取物质量控制的各项指标。

【关键词】桑椹提取物芦丁

【中图分类号】R284【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）31-0009-02

桑椹为桑科落叶乔木桑树(Moru、albaL.)的干燥果穗，又名桑实、乌桑椹、文武实、黑桑椹、桑枣、桑椹子等。主要分布于北半球的温带地区并扩展至亚热带至热带山区，但除澳洲和南极洲之外的各大洲均有分布，在中国大部分地区均产，主产四川南充、合川、涪陵，江苏南通、镇江，浙江嘉兴、吴兴、桐乡、余杭，山东临胸、菏泽，安徽阜阳、芜湖、蚌埠，辽宁彰武、绥中、凤城，河南商丘，许昌，山西太原等地。此外，新疆、云南、陕西、湖南、湖北等地亦产[l]。但作为药用始载于唐《新修本草》，列于木部中品，述于桑根白皮项下:“桑椹味甘寒、无毒，单食主消渴。”除此以外桑椹在许多中药著作中都有记载，如《本草纲目》有“捣汁饮，解酒中毒;酿酒服，利水气，消肿”等，另外，桑椹的作用在《本草拾遗》、《滇南本草》、《本草求真》、《随息居饮食谱》中也有记载。鲜桑椹中含有大量水分(80%-85%)，此外含总糖(12%-15%，其中转化糖为9%-19%)、粗纤维(0.91%)、粗蛋白(0.8%-1.8%，其中蛋白质为0.36%)、[游离酸(0.3%-1.86%)等[2]。对此，吴祖芳，陈智毅，杨正宪，肖更生[6]等对桑椹的营养组分进行研究。

1、实验材料，仪器和试剂

桑椹（安徽济人药业有限公司提供），芦丁对照品对照品（中国药品生物制品检定所），无水乙醇分析纯（上海化学试剂有限公司），95%乙醇分析纯（上海苏爵化学试剂有限公司），醋酸钠分析纯（上海化学试剂有限公司），磷酸分析纯（上海化学试剂有限公司），盐酸分析纯（上海化学试剂有限公司）；SHB一111真空泵（上海亚荣生化仪器厂），数显恒温水浴锅（郑州长城科工贸有限公司），电子天平（上海良平仪器仪表有限公司），电热恒温干燥箱（上海三发科学仪器有限公司）超声波清洗器（上海浦超超声波仪器设备有限公司），高速离心机（Sigllla公司）纯水器（ELGALab认/ater公司）

2、实验方法

2.1芦丁含量的测定

2.1.1对照品溶液的制备

取芦丁对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并制成每lmL含0.lmg的溶液，即得。

2.1.2供试品溶液的制备

精密称取烘干后的桑椹提取物50mg，用纯甲醇溶液超声溶解后定容至50mL，摇匀，13000转/分高速离心10min，摇匀，用微孔滤膜滤过，取滤液，即得。

2.1.3色谱条件及系统适应性

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇一0.4%磷酸水溶液(55:45，v/v)为流动相;检测波长芦丁为360nm，理论板数按芦丁峰计算均应不低于2000。测定法分别精密吸取各对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.1.4线性范围实验

精确称取2mg芦丁标准品，用50mL甲醇溶解，超声波处理，制成0.lmg/mL的标准液母液。分别精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mL对照品溶液到I0mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤后进样测定。

2.1.5精密度实验

取同一供试品溶液，重复进样5次，每次10mL，测定芦丁峰面积。

2.1.6重复性实验

取样品适量，称取5份，分别按供试品溶液的制备，按上述方法操作，进样10mL，测定芦丁峰面积。

2.1.7稳定性试验

室温放置，在0h、2h、4h、6h、8h分别进样10mL，测定芦丁峰面积。

3、结果

3.1芦丁含量测定

实验考察了不同的检测波长和流动相对桑椹提取物HPLC检测的影响，由桑椹提取物的色谱图分析可知:在检测波长为360nm，流动相为甲醇一0.4%磷酸水溶液(55:45，v/v)时，出峰时间合适，和其它的杂峰分离度好，拖尾因子较低，理论塔板数较高，芦丁对照品(图1)和桑椹提取物色谱图(图2)

3.2线性范围试验

分别精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mL对照品溶液到10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，按芦丁含量测定的色谱条件下检测，以峰面积为纵坐标，以芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线（图3）。由图（3）可知:标准曲线的相关系数R为0.9996，表明桑椹总花色普浓度在一定范围内时，溶液吸光度与桑堪中芦丁浓度线性相关。

表（3）芦丁进样浓度水平与相应峰面积

由以上数据绘制标准曲线图如下:

3.3精密度实验

稳定性实验表明:采用本方法测定芦丁在12h内,稳定性好.

4、讨论

本文以芦丁为考察指标，研究了桑椹提取工艺和检测方法，在此基础上我们拟定了桑椹提取物的质量标准。建立了芦丁的即LC检测方法。芦丁的检测方法为:以甲醇一0.4%磷酸水溶液(55:45，v/v)为流动相;检测波长芦丁为360nm，精密吸取各对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。通过方法学考察该检测方法精密度、重复性和稳定性良好。

结合国内企业产品规格和验证试验的结果，对桑椹提取物性状作了较为详细的描述，运用HPLC检测芦丁含量，并在此基础上按照《中国药典》2005版体例建立了桑椹提取物质量标准草案:其主要功效成分花色昔含量不得少于1.2%，芦丁含量不得少于1.3%，水分不得过5.0%，炽灼残渣不得过0.8%，重金属不得过百万分之二十。桑椹提取物质量标准草案的制定为有效地鉴别桑椹提取物，控制其质量提供科学依据。

参考文献

[1]操红缨.桑椹研究进展口.时珍国医国药，1999，10(8):626一628.

[2]杨晓宇，马岩松，车芙蓉.桑椹资源的开发利用[J].食品科技，1999，(4):25一26.