细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值研究

细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值研究

卫华

（汉阴县人民医院病理科陕西安康725103）

【摘要】目的：研究细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值。方法：选取在2015年2月至2017年8月入住我院并将医生确诊为患有胃癌的110例病人作为观察组，早期胃癌患者86例，进展期胃癌24例。经检查胃部无疾病正常对照组110人。将220例参与研究的志愿者的病理组织标本经免疫组织切片化学染色方法特异性标记Bcl-2蛋白，并将检验显微镜下结果作对比。同时将224例参与研究的志愿者的病理组织标本切片做tunel染色检测胃组织细胞凋亡情况。结果：经比较，观察组胃癌病人的Bcl-2蛋白显著高于正常对照组，且呈现疾病越严重，阳性率越高的趋势，P＜0.05。与此同时发现观察组胃癌病人的细胞凋亡显著多于正常对照组，且呈现疾病越严重，阳性率越高的趋势，P＜0.05。结论：在胃癌病人细胞凋亡增多及Bcl-2蛋白表达显著上升，证明细胞凋亡及Bcl-2蛋白可能在胃癌发生中起到一定作用，为临床诊治提供参考。

【关键词】细胞凋亡；Bcl-2蛋白；胃癌

【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）13-0162-02

ApoptosisandtheRoleandValueofBcl-2ProteininGastricCarcinogenesisWeiHua.

DepartmentofPathology,People'sHospitalofHanyinCounty725103

【Abstract】ObjectiveTostudytheroleofapoptosisandBcl-2proteiningastriccarcinogenesis.MetodsAtotalof110patientsadmittedtoourhospitalfromFebruary2015toAugust2017wereselectedastheobservationgroup,and86patientswithearlygastriccancerand24withadvancedgastriccancer.110normalpersonsinthecontrolgroupwithnodiseaseinthestomachwereexamined.Thepathologicaltissuesamplesof220volunteersparticipatinginthestudywerespecificallylabeledwithBcl-2proteinbyimmunohistochemicalstaining,andtheresultswerecomparedunderthemicroscope.Atthesametime,thepathologicaltissuesamplesof224volunteersparticipatinginthestudyweresectionedbytunelstainingtodetecttheapoptosisofgastrictissue.ResultsAftercomparison,theBcl-2proteinintheobservationgroupwassignificantlyhigherthanthatinthenormalcontrolgroup,andthemoreseverethediseasewas,thehigherthepositiveratewas,P<0.05.Atthesametime,itwasfoundthattheapoptosisofthegastriccancerpatientsintheobservationgroupwassignificantlymorethanthatinthenormalcontrolgroup,andthemoreseverethediseasewas,thehigherthepositiveratewas,P<0.05.ConclusionTheincreaseofcellapoptosisandtheincreaseofBcl-2proteinexpressioningastriccancerpatientsindicatethatapoptosisandBcl-2proteinmayplayaroleinthedevelopmentofgastriccancer,providingreferenceforclinicaldiagnosisandtreatment.

【Keywords】Apoptosis;Bcl-2protein;Gastriccancernihaobeijing

胃癌是发病率最高的几种常见癌症中的一种，近几年来，随着社会人群生活方式的改变以及工作和生活带来的种种压力使得胃癌的患病率每一年都在大幅度的增长。我国医院对于胃癌的认识也在逐年提升，在对胃癌了解逐渐增多的情况下不断研究对胃癌的发生规律以期找到合适的诊治胃癌的有效方法。胃癌是可以被多种原因诱发的由多种原因导致的预后不良的恶性疾病。近期研究发现一些胃癌患者胃黏膜切片镜检中出现了细胞结构混乱等情况，故本次研究细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值，具体报道如下。

1.资料和方法

1.1临床资料

本次参与研究的是我院110例经医生确诊为胃癌入院治疗的病人和经胃镜下取胃组织病理诊断正常的110例正常对照，都是2015年2月至2017年8月入住我院的。其中男性为150例，女性为60例；对照组患者的年龄在24～67岁之间，平均为（38.0±6.0）岁。观察组患者的年龄在25～68岁之间，平均为（39.0±6.0）岁，其中早期胃癌患者86例，进展期胃癌24例；通过比较，所有胃癌患者与正常对照者的基本临床资料差异没有统计学意义（P＞0.05），有一定可比性。排除标准：（1）患者对于本次研究的方法不能够接受；（2）患者本身有其他的疾病影响本次研究需要测量的指标；（3）不符合以下标准的患者。纳入标准：（1）在我院进行胃镜检查并确诊癌症或确认正常的；（2）在阅读同意书的情况下自愿参加研究并签写同意书的。

1.2方法

1.2.1细胞凋亡检测将两组志愿者的胃镜切片用二甲苯浸洗5min×2次，后用梯度乙醇洗去二甲苯。用0.85%NaCl洗5min后PBS洗5min来使切片浸润，浸入4%多聚甲醛15min固定组织后使用PBS清洗5min两次后用每片100毫升20微升/毫升的ProteinaseK处理组织15（10～30）min来达到组织通透效果，再用PBS洗5min；加100ul平衡液，湿盒平衡5～10min，甩掉液体后再加100ulDNase1（10U/ml）酶切10min，用去离子水冲洗4次，PBS浸洗5min后加100μlTUNEL反应混合液于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃反应1小时。浸入2×SSC中15min终止反应后用PBS5min×3次，晾干后封片镜检。以高倍镜在每一例切片中随机寻找10个镜下视野计数凋亡细胞个数后取平均数，对比两组志愿者切片中的细胞凋亡情况。

1.2.2Bcl-2蛋白含量检测将所有需要检测的切片用4%多聚甲醛在室温下固定30min，加0.1%TritonX-100缓冲液温和室温下处理20min，弃去缓冲液，浸入0.01M的PBS5min后浸入0.75%H2O2中37℃反应30min，再次浸入0.01MPBS于摇床上摇5min。滴加用0.01MPBS1:10稀释后的正常血清封闭液在37°恒温箱中10min。滴加0.01MPBS按一定比例稀释的Bcl-2蛋白一抗4°冰箱中10min，第二天拿出室温放置30～45min后再次浸入0.01MPBS于摇床上摇5min，滴加0.01MPBS1:100稀释的Bcl-2蛋白二抗在37°恒温箱中培养30min，再次浸入0.01MPBS于摇床上摇5min。最后滴加0.01MPBS1:100稀释的SABC-FITC在37°恒温箱中培养30min后浸入0.01MPBS清洗3～4次，将染色切片轻轻勾起，用小镊子取出即可，全程避光操作。以荧光显微镜检测每一例切片中的荧光，出现荧光即为表达Bcl-2蛋白。

1.3统计学方法

数据用SPSS20.0统计分析，计量资料（x-±s）表示，计数资料（%）表示。两组患者临床资料没有显著性差异，P＜0.05。

2.结果

2.1细胞凋亡检测结果

经过研究，观察组胃癌病人的细胞凋亡显著多于正常对照组，且疾病越严重，阳性率越高，P＜0.05，详情见表1。

3.讨论

胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤[3]，发病部位位于胃黏膜的浅表部位黏膜。近年随着生活压力的不断增加，人们的作息习惯不规律，胃癌的发病人数也日趋增加。好发人群是中年人，男多于女。胃癌多由长期胃部疾病转化而来，表现为类似于溃疡性疾病的恶心、呕吐，后期胃部可能出现剧烈疼痛，间或出现消瘦，食欲不振，四肢无力等全身症状。患者往往疼痛非常，难以忍受，并且患者会出现饮食困难，表现为不能饮水，无法进食等[4]，病人有着沉重的疾病所带来的压力和困扰[5]。

在临床多种疾病中，癌症表现为不成熟细胞的无限繁殖和凋亡增多，如果在检测中出现细胞的凋亡增多，往往提示不良后果[6]。胃癌患者由于自身疾病特点，在胃中可能分泌一些特异性蛋白，检测特异性蛋白是以及思考特异性蛋白如何产生与产生的意义可能对疾病的治疗提供一种新的思路。胃癌中分泌的特异性蛋白Bcl-2蛋白，是一种原癌基因编码的癌蛋白。本次研究细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值，以期获到更好诊治思路[7]。

经过临床研究与对比后，发现在胃癌病人细胞凋亡增多及Bcl-2蛋白表达显著上升，证明细胞凋亡及Bcl-2蛋白可能在胃癌发生中起到一定作用，为临床诊治提供参考。

【参考文献】

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[3]BESSLERH,SALMANH,BERGMANM,etal.CaffeinealterscytokinesecretionbyPBMCinducedbycoloncancercells[J].Cancerinvestigation,2012,30(2):87-91.

[4]LIUJD,50NGLJ,YANDJ,etal.Caffeineinhibitsthegrowthofglioblastomasthroughactivatingthecaspase-3signalingpathwayinvitroJ.Europeanreviewformedicalandpharmacologicalsciences,2015，19(16):3080-8.

[5]HURSELR.WESTERTERP-PLANTENGAMScaffeine-richteasforcontrolofbodyweightTheAmericanjournalofclinicalnutritionCatechininhumans2013.98

[6]AKASHMS,type2diabetes-h3.REHMANK,CHENmellitus[J].NutritionS.Effectsofcoffeeon，2014，30(7/8):755

[7]WUS,HANJ,SONGF,etal.CaffeineIntake,CoffeeConsumption,andRiskofCutaneousMalignantMelanoma[J].Epidemiology(Cambridge,Mass)，2015，26(6):898-908.