大承气汤对急性重症胰腺炎大鼠腺胞细胞凋亡的研究

大承气汤对急性重症胰腺炎大鼠腺胞细胞凋亡的研究

张明敏

贵阳中医学院

[摘要]目的：探讨大乘气汤对急性重症胰腺炎大鼠胰腺腺胞细胞凋亡的影响。方法：采用队列研究方法，将60只健康成年雌性SD大鼠（平均体重200g），将大鼠按照随机表分为模型组、大承气汤组。其中模型组30只，大承气汤组30只。急性重症胰腺炎大鼠模型采用L-精氨酸腹腔注射，造模成功后3小时后，大承气汤组采用灌胃针灌服大承气汤，模型组灌服等计量生理盐水。在灌服后采用断颈法处死大鼠，开腹采取大鼠胰腺组织，利用TUNEL检测技术，分批进行胰腺腺泡细胞凋亡检测。结果：模型组与大承气汤组大鼠胰腺腺胞细胞凋亡率存在显著差异（p<0.05）结论：大承气汤可以提高胰腺腺胞细胞凋亡率，改善胰腺组织坏死，缓解重症胰腺炎症状。

关键词：急性重症胰腺炎；大承气汤；细胞凋亡。

急性重症胰腺炎（SAP）作为临床上较为凶险的急腹症之一，以其发病迅速、进展迅猛、症状重、预后差等特点，在治疗以及研究上一直是热点。有研究报道[1]大承气汤可以通过恢复肠粘膜屏障作用，缓解急性重症胰腺炎的炎性介质的释放，减轻胰腺炎症反应。本实验通过中药大承气汤灌胃后，检测胰腺腺胞细胞凋亡率，从而炎症大承气汤对于治疗急性重症胰腺炎的可能的机制进一步探索。

1材料与方法

1.1动物与分组采用成年SD大鼠60只，均为雌性，大鼠质量为200±20g。随机分为模型组、大承气汤组。模型组30只，大承气汤组30只。将每只大鼠进行标记并称重。按时间点分为2、4、12、24、48h，各时间点各6只大鼠。腹腔注射L-精氨酸的法进行SAP大鼠模型的建立。采用1.148mmol/L(10%)L-精氨酸溶液，每次3.0mg/g，1h后重复注射一次，3h后即为造模成功[2]。模型组与大承气汤组造模方法相同。

1.2实验方法

1.2.1动物模型建立购回大鼠后适应性喂养3天，所有大鼠采用腹腔注射的方法进行SAP模型的建立，实验模型建立过程中大鼠死亡率在5%左右，后又进行增买大鼠，保证每组大鼠数量具有统计学意义。

1.2.2给药方法级试剂药物：⑴所用大承气汤组成：大黄12g，芒硝9g，枳实12g，厚朴15g。⑵大承气汤煎剂制作:先将中药用清水浸泡6h，在用煎药机煎3h，煎成200ml/剂。⑶承气汤组所有老鼠均采用灌胃的方法给药，于造模成功后3小时灌胃，采用中药浓度为43.2%大承气汤溶液灌胃((1ml/200g)[3]。⑷模型组采用等计量生理盐水灌胃。各组灌胃均12h/次，分批处死6只大鼠并采集胰腺组织。

1.2.3标本采集空白组大鼠于腹腔注射生理盐水后3小时采样，模型组大鼠及大承气汤组大鼠于造模成功后采样，采样方法断头处死后，立即开腹取出胰腺组织，将取出的胰腺组织立即保存于液氮中，以便进行细胞悬液制备检测胰腺腺泡细胞凋亡率。

1.2.4胰腺腺泡细胞凋亡检测检测胰腺组织匀浆，用TUNEL凋亡细胞试剂盒说明书进行定量检测胰腺腺泡细胞的凋亡。用盲法计数，选取每张TUNEL阳性切片阳性细胞数最多的高倍视野8个，每个高倍视野计数100个细胞和其中的凋亡细胞，凋亡指数=阳性细胞数/800X100%。

1.3统计学方法采用SPSS16.0软件进行统计学处理，所有计量资料以均数±标准差(±S)表示，同组内同一指标治疗前后变化水平比较采用自身配对t检验，检验水准以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果实验结果细胞调亡指数实验结果显模型组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡发生率较低;与模型组比较，大承气汤组治疗后胰腺腺泡细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与对应模型组胰腺腺泡细胞凋亡率显著升高(P<0.05)，见表1。

注：※各个时间段模型组与大承气汤组细胞凋亡率（P<0.05）。

3讨论

祖国医学虽然没有明确的急性胰腺炎（AP）病名，但从AP的症状和体征上来讲，当归属于“胃脘痛”范畴。急性胰腺炎多为脾胃实热症，热、结、瘀是本病的主要环节，故解毒、通里攻下、活血化瘀是其基本治则。

近年来关于急性胰腺炎细胞凋亡学说逐渐成为研究重点。由此衍生出的研究细胞凋亡的原因的研究也不断深入，包括控制胰腺细胞凋亡的基因研究，以及相应的细胞传导通路研究。本实验研究所观察的是胰腺腺胞细胞凋亡率，目前细胞凋亡通路主要有三条：线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路。其中内质网通路是区别于其他2条通路的，新近研究发现的凋亡途径。该途径的核心内容是内质网应激。内质网是细胞中一种加工蛋白质和贮存Ca2+的主要场所，对应激极为敏感，其功能紊乱时会出现折叠错误与未折叠蛋白在腔内集聚以及Ca2+平衡紊乱的状态，称为内质网应激。内质网分子伴侣GRP78又称Bip，其位于内质网，是内质网稳态的中心调节剂。内质网应激会保持内环境的稳定，因此GRP78在应激条件下对细胞有保护作用。GADD135是内质网相关促凋亡蛋白，在正常细胞中表达水平很低，而在内质网应激状态下则被大量诱导表达，激活细胞凋亡途径。而大承气汤对于急性胰腺炎的细胞凋亡的作用就可能是通过其中内质网通路，但是其具体的作用机制还需要大量的实验研究来证实。

4参考文献

[1]钦丹萍魏霞方国栋杨锋赖登攀.全程应用大承气汤加味方对重症急性胰腺炎模型大鼠肠黏膜屏障的影响[J].中西医结合杂志2015年12月第35卷第12期.

[2]刘君君陈垦龙友明谢文瑞王晖,L精氨酸诱导大鼠急性坏死性胰腺炎模型的建立[J],中国药理学通报;2009,Otc25(10):1392-1924.

[3]张在兴孙家邦李非，等,内源性一氧化氮对大鼠急性坏死性胰腺炎的胰腺保护作用[J].中华普通外科杂志，2000,15(10):29-31.

作者简介：张明敏（1991—），男，汉族，江苏海门市人，研究生在读，单位：贵阳中医学院,专业:中西医结合，研究方向：中西医结合外科学。