血液和骨髓标本的检验方法

血液和骨髓标本的检验方法

姜波(黑龙江省塔河县开库康乡卫生院黑龙江塔河

【中图分类号】R446.11【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2009)17-0232-02

为提高血培养阳性率，推荐同时送检需氧和厌氧血培养。

1传统需氧培养方法

1.1临床细菌室收到培养标本后，立即置35℃孵箱作需氧或厌氧培养。婴幼儿因采血困难而血量不足，只能作一瓶培养时，可在前3～4天作厌氧培养，然后再转作需氧培养。每天观察培养瓶生长情况，包括肉汤内混浊度、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变化等，并在细菌鉴定单上作详细记录。根据变化可作出初步推测，如肉汤呈均匀混浊生长，生长速度快，发酵葡萄糖产酸产气，考虑可能为肠道革兰阴性杆菌感染；如肉汤均匀混浊生长并带有绿色荧光，可能为铜绿假单胞菌；如肉汤呈沉淀生长，可能为链球菌；肉汤混浊有时现胶胨状凝固现象，可推测是葡萄球菌；肉汤表面出现菌膜，培养液清晰，可疑为专性需氧细菌如枯草杆菌或类白喉棒状杆菌。

1.2血液及骨髓培养应建立三级报告制度。当疑有细菌生长时，无论是需氧菌或厌氧菌培养，都应以无菌操作挑取培养液作涂片，革兰染色镜检。厌氧瓶取材作涂片时严防空气进入。镜检一旦见有细菌生长，并可排除污染细菌时，应立即转种培养瓶内培养物于血琼脂平板和巧克力平析，厌氧菌培养并转种厌氧菌血平板。分别做需氧和厌氧培养和药敏试验。并将镜检结果报告临床医生。作为第一级报告。

1.3在血液培养12小时中，如无细菌生长，应盲转一次，1997年OrtizJ等人报道，血液培养在12小时内出现阳性率很高，自动血培养分析仪BaCT/Alert可达56.5％，而传统血培养方法可达13％。以后应分别在24小时及最终报告前一天再盲转一次，如三次盲转均无细菌生长可报告经××天培养无细菌生长。

1.4最终报告时间应视不同培养目的的而异。一般菌血症诊断时间，最终报告时间以5～7天为宜。当亚急性心内膜炎血液培养74天无细菌生长，应继续培养至4周方可报告阴性结果。布鲁菌培养可在第三周作最终报告。厌氧细菌应在二周作最终阴性报告。当作钩端螺旋体培养时，应培养一个月，仍无细菌生长，方可报告阴性。

2自动血液分析系统培养方法

2.1概述BacT/Alert血培养系统是一全自动封闭微生物监测系统，能自动培育、振荡、连续监测来自菌血症或真菌血症可疑患者的厌氧及需氧血标本。其原理是在BacT/Alert培养瓶内有Novel颜色感应器，瓶底有半渗透性薄膜将培养液和颜色感应器分隔开，只有CO2可通过薄膜，它连续受固相反射光充电比色计监测，如样本中有细菌或真菌生长就会利用培养基内的碳水化合物或氨基酸，其代谢产物使CO2含量发生变化（增高），CO2渗透至感应器经水饱和后，产生H＋并改变感应器的酸碱值使颜色发生变化，由深绿色变为黄色，在连续监测的光电比色计中显示出高的生长指数。当指数超过阳性阈值时，系统在电脑控制下分虽以指示灯亮，荧光屏显示红色，打印机打出，警铃告示和原系统中的检测灯亮等多种方式告示有阳性标本测出。

2.2需氧菌一般操作步骤

2.2.1临床细菌室接到来自病房已接种标本的需氧培养标本后，应根据采样时间，在室温旋转20～30分钟。

2.2.2用70％酒精消毒塞帽，并用无菌通气针插入塞帽，使空气进入培养瓶，改变原瓶内真空状态，以利于需氧菌生长。

2.2.3从相应菜单将病人资料输入，并用扫描毛扫描培养瓶条型码。

2.2.4当培养瓶进入系统后，就开始连续孵育（35～70℃），并边疆振荡，每一瓶每10分钟检测一次（一天144次）。每一培养瓶放置架位底部都有一组LED激光器及反射光感应器，随瓶底Novel颜色感应器的颜色改变所反射光度亦不同，反射光传送至电脑后，电脑连续记忆并划成曲线图。

2.2.5培养瓶进入系统第一次读数后，不论何时均可从屏幕查询其生长状况。一旦培养瓶生长指数超过阳性阈值，生长曲线呈现上升高峰，屏幕呈红色并告示有阳性瓶产生。

2.2.6从卸瓶菜单卸下阳性瓶，并用无菌注射器吸出培养液转种至血琼脂和巧克力琼脂平皿，置系统外孵箱35℃培养，并同时作涂片和初步药物敏感试验，将涂片结果电话报告临床医生，作为第一级报告。8小时后报告初步药敏结果为第二次报告。

2.2.7转种平皿经18～24小时孵育后，作进一步鉴定和正式药敏试验，并与初步报告符合后，作出最终报告。

2.2.8若培养瓶在预置培养时间内未呈现阳性结果，也应将瓶内培养液转种血琼脂平皿。于35℃孵箱培养18～24小时，无细菌生长方可报告经××无培养无细菌生长。

2.3厌氧菌的操作步骤

2.3.1厌氧培养瓶内含85％的N2、10％CO2、5％H2的厌氧气体，因此当实验室收到来自临床的血培养瓶时一定不能用通气针放气。

2.3.2将病人人口统计学资料输入，并用条码扫描笔扫描瓶条码。

2.3.3系统自动监测（同需氧菌培养）。

2.3.4当系统报警提示呈现阳性结果时应按操作程序卸下阳性培养瓶，并用无菌注射器抽取培养液，快速接种于厌氧血琼脂平皿，并立即置厌氧罐于35℃培养48～72小时。同时用培养液涂片，革兰染色，并将结果通知临床医生。

2.3.5经48～72小时培养后,打开厌氧罐,作耐氧试验,将同一菌落分别置需氧培养18～24小时及置厌氧罐培养48～72小时。

2.3.6选择耐氧试验阳性菌株（在需氧环境不生长，厌氧环境生长菌株），作厌氧菌鉴定并报告临床医生。

2.3.7若系统最终报告为阴性的培养瓶时，也应将培养液转种厌氧血琼脂证实无菌生长后方可报告阴性结果。推荐厌氧菌血液培养最终报告时间为二周。

2.4系统的质量控制为了保证系统的瓶孔处于最佳检测状态，瓶孔的质理控制是每日工作的一部分。每一培养仪都有一个BacT/Alert反射型标准盒，以供QC和校正用，每盒有二个反射标准棒，QC过程中，一般以B标准棒为主，必要时系统会提示作二个反射标准棒检测。每个标准棒的二端分别刻有不同的刻环数，其代表不同的标准反射值。标准反射棒放入瓶孔后，培养仪自动对其读数，必要时会提出警告要求重新校正。如果瓶孔未通过QC，又未重新校正，瓶孔会自动被封闭。