新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析

新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析

孙英慧

（北部战区总医院辽宁沈阳110016）

【摘要】目的：探讨新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用。方法：取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象。按照随机数字表法，分为两组，分别给予HBsAg为HBsAg组与HBsAg+CpG-DNA为HBsAg+CpG-DNA组，每组15只。CpG-DNA与抗原取混合后，对小鼠进行皮下、背部注射。于加强免疫一周进行细胞毒T细胞功能检测。结果：在强化免疫后，HBsAg组显著升高（P＜0.05）。结论：CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂。

【关键词】新型免疫佐剂；CpG-DNA；HBsAg

【中图分类号】R392【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2019）20-0024-02

PerformanceandpreliminaryapplicationanalysisofnovelimmunoadjuvantCpGDNA

SunYinghui

GeneralHospitalofNorthernWarZone,Shenyang,Liaoning110016,China

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheperformanceandpreliminaryapplicationofanovelimmunologicaladjuvantCpGDNA.MethodsSixtyBALB/cmice(SPF)wereusedassubjects.Accordingtotherandomnumbertablemethod,theywerepidedintotwogroups,namelyHBsAg+CpG-DNAgroupinHBsAggroup.AftertheCpG-DNAwasmixedwiththeantigen,themicewereinjectedsubcutaneouslyanddorsum.CytotoxicTcellfunctiontestswereperformedoneweekafterboosterimmunization.ResultsAfterboosterimmunizationatweek4andweek12,thenumberofCD8+CTLsecretedbyHBsAg+CpG-DNAgroupwassignificantlyhigherthanthatofHBsAg(P＜0.05).ConclusionCPG-DNAhasstrongimmunogenicitytoHBsAgandcaninducestrongimmunityinthebody.Itisapotentialimmunoadjuvant.

【Keywords】Novelimmunoadjuvant;CpGDNA;HBsAg

相关研究表明，DNA是一种较强的免疫反应刺激物，不仅激活免疫细胞使其进行增殖分化，亦可以对免疫应答进行调节[1]。随着研究的进一步深入，现已证实CpG-DNA既能诱导机体产生细胞免疫，又能诱导机体产生体液免疫，其免疫应答主要以Th1为主，亦有学者称其为新型免疫佐剂[2]。近年来，CpG-DNA引起了广泛关注，已有研究证明其具有甲基化CpG基序。本研究旨在探究新型免疫佐剂CpG-DNA对HBsAg的免疫作用。

1.资料与方法

1.1一般资料

取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象，其周龄为8～10，皆为雌性。按照随机数字表法，分为两组，分别为HBsAg组、HBsAg+CpG-DNA组，每组各15只。

1.2方法

HBsAg+CpG-DNA组：CpG-DNA剂量取80μg，抗原取1μg，充分混合后，对小鼠进行皮下、背部注射，每只注射量皆为80μg。HBsAg组：只给予HBsAg，方法同HBsAg+CpG-DNA组。自第一次注射后，第4周及第12周时再次加强免疫。加强免疫后一周内处死小鼠，取其脾脏，采用ELISPOT试剂盒测定细胞毒T淋巴细胞的功能。

1.3观察指标

对比各组细胞的细胞毒T淋巴细胞功能。

1.4统计学方法

数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数资料（%）进行χ2检验，计量资料（x-±s）进行t检验，P＜0.05提示有显著差异。

2.结果

在第4周与第12周进行强化免疫后，HBsAg+CpG-DNA组分泌的CD8+CTL的数量较HBsAg组显著升高（P＜0.05），见表。

3.讨论

以往研究认为，DNA的免疫原性较弱，难以引起机体较强的免疫反映[3]。人们对DNA免疫调节的重视追溯到20世纪80年代，科学家首次检测出从牛分枝杆菌中提取出具有抗肿瘤活性的DNA。而随着研究的进一步深入，有学者对编码牛分枝杆菌蛋白的cDNA中进行了不同序列ODN的合成，经检测，部分ODN具有较强的免疫原性，可诱发机体强烈的免疫反映[4]。而这类ODN来说都具有一个或多个回文序列的特性。除此之外，另有科学家对ODN结构进一步测定，结果显示具有免疫刺激作用的CpGODN通常为非甲基化，一旦经甲基化修饰，或者GC或其它序列代替了CpGODN则其免疫活性消失。基于此，有学者认为DNA具有免疫活性的前提为具有甲基化CG双核苷为核心的特定核苷酸序列。而免疫系统对外源性DNA进行免疫应答就是通过对这些特定序列进行特异性识别而实现的。无与此同时，亦有相关研究报道，CpG序列是否含有低甲基化或者非甲基化是决定CpG-DNA是否有免疫活性的主要问题。若CpG未发生甲基化或者呈低甲基化，则其免疫活性较佳；反之，若CpG缺失或呈高甲基化，则其活性明显降低。经进一步测定，现认为CpG-DNA的活性结构为CpG两侧的2个5’嘌呤和2个3’嘧啶，且当5’端为GpA、3’端为TpC或TpT时活性最强[5]。本研究取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象，于免疫强化后一周进行细胞毒T细胞功能检测结果显示，对小鼠第4周与第12周进行强化免疫后，HBsAg+CpG-DNA组分泌的CD8+CTL的数量显著升高（P＜0.05），这与相关研究结果不谋而合，表明了CPG-DNA对HBsAg具有较好的免疫佐剂作用，不仅能够与铝剂相互协同促进IgG的产生与分泌，亦能够促进Th2类免疫反应逆转为Th1类免疫反应，这一转变是通过IFN-γ的分泌完成的。

综上所述，CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂。

【参考文献】

[1]朱喆，蔡泓志，李映波.中草药提取物作为疫苗佐剂的研究进展[J].医学研究杂志，2018，v.47；No.485(05):13-16.

[2]金晓，李晓红，贾森泉，等.甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响[J].实验动物科学，2018，v.35(02):25-30.

[3]许霞，杜欢，吴亚兰，等.程氏蠲痹汤加减方降低佐剂性关节炎大鼠外周血T细胞cAMP水平和CD4+/CD8+T细胞比值[J].细胞与分子免疫学杂志，2018，34(2).

[4]朱蕾，段梦园，张晓娟，等.羧胺三唑抑制佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞产生细胞因子[J].基础医学与临床，2018，v.38(06):60-64.