猪肉中克伦特罗的检测

猪肉中克伦特罗的检测

张静

大兴安岭地区食品药品检验检测所165000

摘要：使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统对经提取的猪肉样品提取液进行固相萃取—洗脱液浓缩—溶剂置换过程，简单高效，重现性好；经高效液相色谱检测克伦特罗，准确快速，标准曲线线性系数为：R2=0.9998，回收率高达89.53%，RSD：1.04%。

关键词：克伦特罗固相萃取定量浓缩高效液相色谱

盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，因此称为瘦肉精。它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。某些国内养猪户不顾农业部的规定，为了使猪肉不长肥膘，在饲料中掺入瘦肉精。

本实验使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大的简化实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确，样品测定平行性好，回收率高。

1仪器与试剂

1.1仪器

LabTechPrepElite-VS全自动固相萃取-定量浓缩仪

LabTechLC600二元梯度高效液相色谱系统

1.2试剂

乙酸乙酯

10%碳酸钠溶液

0.1mol/L的盐酸溶液

2.5mol/L氢氧化钠溶液

甲醇（色谱级）

4%氨水甲醇

去离子水

2实验方法

2.1提取方法：

将50g猪肉，平均分成10份，准确进行称重。取其中5份加入15mL乙酸乙酯、3mL10%碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10,000rpm下均质2min，6,000rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。用15mL乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。向乙酸乙酯提取液中加入5mL0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋混合1min，然后在6,000rpm下离心1min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH5.2。取另外5份，破碎后加入1.0μg/mL克伦特罗标准液1mL，按上述方法进行提取操作，作为加标样品。

2.2样品净化

SPE小柱：ProElutPXC90mg/6mL

a活化：依次加入4.5mL甲醇、4.5mL水和4.5mL30mmol/L盐酸，对SPE柱进行活化；

b上样：将提取液加入小柱中，流出液弃去；

c淋洗：依次用4.5mL水和4.5mL甲醇淋洗，氮气吹干10min；

d洗脱：7.5mL4%氨水甲醇洗脱；

e在线浓缩50oC下在线浓缩，进行流动相（甲醇+水=35:65）置换，自动定容到1mL。

2.3样品检测

2.3.1液相色谱条件

色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm

流动相：甲醇：水=35:65

流速：1mL/min

进样量：20μL

紫外检测器：244nm

2.3.2标准品及样品测定

克伦特罗标准溶液的配置：准确称取克伦特罗标准品用甲醇配成浓度为25μg/mL的标准储备液，用流动相甲醇+水（35:65）稀释浓度为0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL标准液。

将浓缩后的试样采用0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，滤液待进行液相色谱测定。

吸取50μL标准溶液及试样液注入液相色谱仪，进行定性、定量分析。

3结果和讨论

3.1克伦特罗标准品的液相色谱图

3.2克伦特罗标准品标准曲线

克伦特罗标准品浓度：0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL，线性方程为：Y=361552X-4061.8，线性系数为：R2=0.9998。

3.4未加标样品检测结果

未加标样品检测结果见图5所示，经计算，未加标样品未检出克伦特罗成分。

4结语

本实验采用LabTech全自动固相萃取-定量浓缩系统进行猪肉样品前处理，自动化程度高，可以解决传统固相萃取步骤操作繁琐，溶剂挥发，过柱流速难以控制等问题。同时，收集到的洗脱液可以在线浓缩、溶剂置换、定容过程，极大的简化了繁琐的样品前处理工作，保护操作者免受各种有机溶剂毒害，同时回收率稳定，可靠，回收率高达89.53%。

采用高效液相色谱方法对样品中克伦特罗进行定性、定量检测，方便快速，标准曲线线性系数为R2=0.9998，对加标样品和未加标样品进行精确浓度检测，准确计算回收率，仪器操作简单，稳定性高，RSD为1.04%。经检测，猪肉样品中未检出克伦特罗。

参考文献

[1]中华人民共和国药典.2015年版,二部