分光光度法测定紫菀中总三萜类成分的含量

【摘要】 　　目的测定紫菀药材中有效成分总三萜的含量，从而控制药材质量。方法以紫菀酮为对照品,以5％香草醛-冰乙酸溶液、高氯酸为显色系统,采用紫外分光光度法在550 nm波长处测定样品吸光度。结果紫菀酮在11.1～133.2 μg范围内,线性关系良好,其回归方程为: Y =7.2×10-3X+0.021,r= 0.999 9。结论该方法操作简便,结果稳定,重现性好。

【关键词】 紫菀 三萜类化合物 紫菀酮 紫外－可见分光光度法

　　Abstract：ObjectiveTo establish a new method for the determination of total triterpenes from Radix Asteris．MethodsWith shionone as the standard, total triterpenes was measured by spectrophotometry with 5% vanillin-glacial acetic acid solution and perchloric acid as color- developing agent and detected at 550 nm wavelength .ResultsThe calibration curve was linear(r=0.999 9)in the range of 11.1～133.2 μg，and the curve was Y =7.2×10-3X+0.021.ConclusionThe spectrophotometry is suitable for the determination of total triterpenes from Radix Asteris. This method is simple, easy, stable and reproducible．

　　Key words：Radix Asteris； Total Triterpenes ； Shionone； Ultraviolet spectrophotometric method

　　紫菀为常用中药,在我国资源丰富。紫菀为菊科多年生草本植物紫菀Aster tataticus L.f. 的根及根茎。其性味辛、甘、苦、温，归肺经。紫菀甘润苦泄，辛温而不燥，有抗菌、消炎、止咳、祛痰等功效，主治支气管咳喘、肺结核和咯血等。现代药理表明，紫菀中止咳祛痰的有效部位主要为紫菀酮等三萜类化合物［1］，但目前还未见紫菀三萜类化合物含量研究的报道。目前总三萜类化合物的含量测定一般采用5%香草醛-冰乙酸溶液、高氯酸显色系统，本实验采用这一显色系统对紫菀三萜类化合物进行了含量测定的研究。

　　1 材料

　　紫外可见分光光度计［尤尼柯（上海)仪器有限公司］；电热恒温水浴锅(京津金坛市正基仪器有限公司)；BS210S 电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；安徽产紫菀，购自广州中医药大学大药房，经广州中医药大学中药学院鉴定；紫菀酮对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号111581－200403)，其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品溶液的制备

　　取在五氧化二磷中干燥至恒重的紫菀酮对照品约11 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀，即得(每毫升中含紫菀酮0.111 mg)。

　　2.2 测定波长的选择

　　分别取供试品溶液0.3 ml和对照品溶液0.8 ml，按“2.3”项下方法操作，在分光光度计上400～800 nm处扫描，结果对照品溶液与供试品溶液在550 nm处均有最大吸收，故确定550 nm作为测定波长。

　　2.3 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml,分别置具塞试管中，水浴挥去溶剂，冷却，准确加入0.2 ml 5 %香草醛- 冰醋酸溶液和0.8 ml高氯酸，混匀，密塞。置65℃恒温水浴中加热20 min，后放于冰水浴中，并加入冰醋酸5ml,摇匀后置于室温。按分光光度法(《中国药典》2005 年版Ⅰ部附录VA)［2］，以试剂为空白，在550 nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,紫菀酮微克数为横坐标作标准曲线，回归方程为： Y =7.2×10-3X+0.021,r=0.999 9。线性范围为11.1～133.2μg。

　　2.4 总三萜类化合物的提取方法

　　2.4.1 提取溶剂的确定

　　称取本品粉末2 g，3份，精密称定。分别放入不同的索氏提取器中，分别加入一定量的石油醚、氯仿、醋酸乙酯，提取4 h，放冷，转移到100 ml量瓶中，用相应试剂稀释到刻度，摇匀。取一定量进行紫外光谱分析。结果醋酸乙酯＞氯仿＞石油醚，故确定醋酸乙酯为提取溶剂。　2.4.2 提取时间的确定

　　称取本品粉末2 g，5份，精密称定。分别放入不同的索氏提取器中，加入一定量的醋酸乙酯，分别提取2，4，6，8 h和10 h，按“2.4.1”项下自“放冷”起依法操作。结果见图1。确定提取时间为8 h。

　　2.4.3 供试品溶液的制备

　　称取本品粉末2 g，精密称定。放入索氏提取器中，加入一定量的醋酸乙酯，提取8 h，放冷，转移到100 ml量瓶中，用醋酸乙酯稀释到刻度，摇匀，即得。

　　2.5 稳定性实验

　　取对照品溶液和供试品溶液,按含量测定项下分别在0～60 min内进行测定，显示在10～60 min内稳定，RSD为2.13%和2.5%；表明该方法测定需在显色后10～60 min内完成。

　　2.6 准确度实验

　　精密称取已知量的紫菀6份，每份1 g，精密称定。精密加紫菀酮适量，照供试品溶液的制备方法处理并测定，计算得平均回收率为99.45%，RSD为2.2%。

　　2.7 重复性实验

　　取本品粉末6份，各约2 g，精密称定，按所定条件平行制备供试品溶液，于550 nm处测定吸光度，计算得供试品的平均质量分数为0.999%，其RSD为2.62%。

　　2.8 样品的含量测定

　　照“2.4.3”项制备6批供试品溶液,精密量取供试品溶液0.4 ml，置20 ml具塞试管中，按“2.3”项下自“于水浴上蒸干”起依法操作，在550 nm 波长处测定吸光度，将测定结果代入“2.3”项下标准曲线方程，结果见表1。表1 紫菀样品中总三萜类含量测定结果（略）

　　3 讨论

　　通过实验研究了不同提取溶剂和不同提取时间对提取紫菀中三萜类化合物的影响，结果显示，最佳提取三萜类化合物的条件是醋酸乙酯索氏回流提取8 h。

　　紫菀中总三萜类化合物是其主要有效成分之一，对此测定未见文献报道。三萜类化合物含量测定多用冰醋酸－香草醛、高氯酸比色法，但其影响因素较多，用醋酸乙酯提取的方法可以排除苷类和糖对测定结果的影响。本实验简便、重现性好，适用于紫菀药材质量控制。

【参考文献】
　　［1］卢艳花，戴 岳，王峥涛，等.紫菀祛痰镇咳作用及其有效部位和有效成分［J］.中草药，1999，30（5）：360.

　　［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：239.