简介:摘要目的探讨内源性一氧化氮(NO)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)超氧化物歧化酶1(SOD1)活性及内皮细胞凋亡的调节作用。方法以HUVECs为研究对象,采用内皮型一氧化氮合酶(eNOS)短发夹RNA (shRNA)慢病毒转染对内皮细胞eNOS进行敲低,HUVECs分为4组:空载体组(scramble)、转染eNOS shRNA组(eNOS shRNA)、转染eNOS shRNA+硝普钠(SNP)组(eNOS shRNA+SNP)及转染eNOS shRNA+SNP+三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)组(eNOS shRNA+SNP+TCEP)。采用Western blot法检测eNOS蛋白表达和SOD1二聚体/单体蛋白表达,采用酶联免疫吸附法检测SOD酶活性,采用NO荧光探针法检测内皮细胞NO水平,采用二氢乙锭(DHE)检测内皮细胞超氧化物阴离子水平,采用原位末端转移酶标记技术检测内皮细胞凋亡情况。结果与空载体组相比,eNOS shRNA组中内源性NO水平(2.690±0.420比15.029±2.193,P<0.01)、eNOS蛋白表达(1.000±0.778比3.141±0.199,P<0.01)、SOD1二聚体/单体比例(4.6±1.0比7.6±2.0,P<0.05)和SOD活性[(0.432±0.254) Carmen′s unit/104 cell比(1.000±0.116) Carmen′s unit/104 cell,P<0.01]均显著降低,细胞内超氧阴离子水平(11.180±1.560比6.146±1.007,P<0.01)和HUVECs凋亡水平[75.0(55.0,100.0)%比0(0,0)%,P<0.01]均显著增加。与eNOS shRNA组相比,eNOS shRNA+SNP组中内源性NO含量(16.705±0.116比2.690±0.420,P<0.01)、SOD1二聚体/单体比例(7.3±2.0比4.6±1.0,P<0.05)和SOD活性[(0.737±0.060) Carmen′s unit/104 cell比(0.432±0.254) Carmen′s unit/104 cell,P<0.05]均显著增加,细胞内超氧阴离子水平(6.897±1.648比11.180±1.560,P<0.01)和HUVECs凋亡水平[0(0,0)%比75.0(55.0,100.0)%,P<0.01]均显著下降。与eNOS shRNA+SNP组相比,eNOS shRNA+SNP+TCEP组中SOD1二聚体/单体比例(4.4±0.9比7.3±2.0,P<0.05)和SOD活性[(0.214±0.084) Carmen′s unit/104 cell比(0.737±0.060) Carmen′s unit/104 cell,P<0.01]均显著降低,超氧阴离子水平(10.917±1.552比6.897±1.640,P<0.01)和HUVECs凋亡水平[63.6(55.0,90.0)%比0(0,0)%,P<0.01]均显著增加;但NO水平(16.112±0.926比16.705±0.116,P>0.05)无明显变化。结论内源性NO通过上调SOD1二聚体/单体比例,增强SOD活性,抑制活性氧积累,从而有效对抗人脐静脉内皮细胞凋亡。
简介:摘要目的评价胞外-5′-核苷酸酶(CD73)在小鼠肝缺血再灌注损伤内源性保护机制中的作用及其与转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD家族成员3(Smad3)信号通路的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只,8~10周龄,体重20~23 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(S组)只游离肝门,不阻断;肝缺血再灌注组(IR组)阻断肝门30 min后恢复灌注制备小鼠肝缺血再灌注损伤模型;肝缺血再灌注+CD73特异性抑制剂组(APCP组)腹腔注射CD73特异性抑制剂APCP 40 mg/kg,10 min后行缺血再灌注。于再灌注6 h时采集眶静脉血样,测定血清ALT和AST浓度,随后处死小鼠取肝组织,采用Western blot法检测CD73、TGF-β1和磷酸化Smad3(p-Smad3)表达,ELISA法检测IL-1β和TNF-α含量,可见分光光度计测定MDA含量和SOD活性,光镜下观察肝组织病理学结果。结果与S组比较,IR组和APCP组血清AST和ALT浓度、肝组织IL-1β、TNF-α和MDA含量升高,SOD活性降低,CD73、TGF-β1和p-Smad3表达上调(P<0.05);与IR组比较,APCP组血清AST和ALT浓度、肝组织IL-1β、TNF-α和MDA含量升高,SOD活性降低,CD73、TGF-β1和p-Smad3表达下调(P<0.05)。APCP组肝组织病理学损伤较IR组加重。结论CD73参与了小鼠肝缺血再灌注损伤内源性保护机制的过程,可能与调控TGF-β1/Smad3信号通路有关。
简介:摘要目的探讨人内源性反转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)在人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549、H1975和SK-MES-1中的表达及其生物学功能。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库采用Log-rank检验分析HHLA2 mRNA在NSCLC组织中的表达水平对患者预后的预测价值。利用RNA干扰(RNAi)技术构建HHLA2表达稳定下调的人NSCLC细胞株,通过细胞增殖实验、划痕实验及Transwell侵袭实验观察HHLA2表达下调对人NSCLC细胞株生物学功能的影响,组间比较采用t检验。结果TCGA数据库结果显示,HHLA2 mRNA表达水平低的肺癌患者的总生存期(OS)显著高于HHLA2 mRNA表达水平高的患者(肺腺癌:Log-rank P=0.082,肺鳞癌:Log-rank P=0.021)。富集分析结果显示HHLA2可能与NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力相关。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)结果显示,3种细胞株中LV-shHHLA2组HHLA2 mRNA和蛋白表达水平均显著低于LV-NC组。细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验显示,下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的增殖能力(A549:48 h:0.475±0.014比0.600±0.030,t=3.813,P<0.05;72 h:0.658±0.044比0.911±0.039,t=4.336 P<0.05;H1975:48 h:0.414±0.026比0.550±0.026,t=3.669,P<0.05;72 h:0.645±0.049比0.926±0.026,t=5.076,P<0.01;SK-MES-1:48 h:0.387±0.043比0.606±0.037,t=3.870,P<0.05;72 h:0.675±0.044比0.971±0.045,t=4.717,P<0.01);划痕实验显示,下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的迁移能力(A549:0.489±0.046比1.000±0.033,t=8.975,P<0.001;H1975:0.242±0.060比1.000±0.028,t=11.390,P<0.001;SK-MES-1:0.403±0.071比1.000±0.092,t=5.150,P<0.001);Transwell侵袭实验显示,下调HHLA2的表达可显著降低3种细胞的侵袭能力[A549:(150.333±7.881)个比(226.000±6.429)个,t=7.440 P<0.01;H1975:(92.000±11.790)个比(203.333±7.839)个,t=7.864,P<0.01;SK-MES-1:(95.333±14.881)个比(201.000±16.643)个,t=4.733,P<0.01]。结论干扰NSCLC细胞中HHLA2的表达可降低其增殖、迁移和侵袭能力。
简介:摘要目的研究不同浓度二甲双胍对博来霉素(BLM)诱导SSc小鼠模型的影响及机制。方法C57BL/6小鼠按照随机分配原则分为正常组、模型组、高、中、低剂量二甲双胍治疗组,经博来霉素、二甲双胍干预4周末处死小鼠。局部皮肤采用组织病理染色法测量真皮和胶原厚度,免疫组织化学法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测IL-17、叉头框蛋白P3(Foxp3)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况和mRNA水平。采用流式细胞术检测脾单个核细胞中系统性效应T细胞(Teff)和调节性T细胞(Treg)相对数目。对真皮胶原厚度、α-SMA、IL-17、Foxp3、Teff和Treg水平等数据均采用单因素方差分析进行统计分析,两两比较采用LSD-t检验或Kruskal-wallis检验。结果与正常组相比,模型组小鼠出现明显的皮肤病变,Th1、Th2、Th17、Tfh细胞水平明显升高,同时伴有Treg水平明显下降。经高剂量二甲双胍治疗后,小鼠真皮厚度[(131±25)μm]、胶原厚度[(119±18)μm]、α-SMA[(3.0±0.5)个/高倍视野]明显减少(F=14.390,P<0.01;F=40.245,P<0.01;F=44.626,P<0.01),Th1[(27.00±6.68)%]、Th17[(0.56±0.20)%]、Tfh[(6.4±1.6)%]细胞水平明显降低(F=32.390,P<0.01;F=16.083,P<0.01;F=16.546,P<0.01),Treg[(11.23±1.52)%]水平明显升高(F=10.171,P<0.01)。结论二甲双胍可以有效逆转博来霉素诱导SSc小鼠模型的皮肤局部症状,并通过恢复Teff/Treg平衡达到免疫调节和抗纤维化作用。
简介:摘要锅炉的调节任务是使蒸汽的参数值(压力、温度等)符合一定的要求;维持汽包水位在允许的范围内;保证燃烧的经济性并维持一定的炉膛压力,使设备安全经济运行。锅炉机组是一个复杂的系统,有多个被调变量和相应的调节变量,其中主要的被调变量是主蒸汽压力、主蒸汽温度、汽包水位、过量空气系数和炉膛压力,相应的调节变量有燃料量、减温水量、给水流量、送风量和引风量等。这些被调量是相互关联的,改变其中一个调节变量会同时影响几个被调量。理想的锅炉自动调节系统应当是在受到某种扰动作用后能同时协调控制有关的调节机构,改变相应的调节变量,使所有被调量都保持在规定的范围内,使运行工况迅速恢复稳定。