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  • 简介:目的研究人类疾病模型小鼠可遗传生物学特性,建立品系标准化维持方法.方法选用FVB/TgN、MRL/Mpj和SAMP1/Ka三个疾病模型小鼠品系作为代表性实验对象,通过测定生长曲线、RAPD同工、酶电泳、行为学试验等方法,找出三个品系相对于各自对照品系不同特征,并建立了标准化检测指标作为维持方法依据.结果MRL/Mpj生长曲线相对于对照品系有明显统计学差异;FVB/TgN、MRL/Mpj、SAMP1/Ka等三个品系RAPD图谱在阳性引物及扩增出条带方面均不一致;同工酶电泳结果表明不同品系个体之间表型不完全相同;行为学试验更从多方面直观地显示了各品系不同特征.结论人类疾病模型小鼠除了用常规检测方法外,还应建立各品系在生长曲线、RAPD、同工酶电泳、行为学试验等方面的特殊检测方法,及时检测模型小鼠品系独特性状并作为保种依据,以避免遗传漂变发生.

  • 标签: 疾病模型 标准化 人类 同工酶电泳 生长曲线 RAPD图谱
  • 简介:目的对西双版纳小耳猪群体遗传结构进行RFLP分析。方法采用ECL核酸直接标记和检测系统,以HRP标记ɑ-珠蛋白-3’HVR多基因座小卫星探针,对西双版纳小耳猪HinfⅠ或HaeⅢ酶切片段进行Southern杂交,以化学发光法进行检测,获得了清晰可辨、具有高度多态性DNA指纹图谱。结果2kb以上谱带数在6~15条之间,HinfⅠ酶切产生图带数低于HaeⅢ。JB亚系内805、807家系和JS亚系内111、121、121、151家系不同个体间相似系数分别为0.94±0.09、0.85±0.08、0.84±1.7、0.78±1.6、0.83±0.42、0.87±0.07,显著高于各家系间相似系数,JB亚系内805家系和JS亚系内151家系不同个体间相似系数较大,分别为0.94和0.87。结论西双版纳小耳猪近交程度较高,个体间差异较小,均一性较强。

  • 标签: 家系 珠蛋白 RFLP分析 多基因 HRP 化学发光法
  • 简介:目的克隆和测定剑尾鱼(Xiphophorushelleri)线粒体细胞色素b基因(cytb)全序列。方法提取剑尾鱼肝脏总DNA。设计合成特异引物进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖电泳检测,纯化后克隆到pGEM-Teasyvectorsystem中T载体上,筛选转化子,提取质粒,酶切鉴定。挑取重组质粒pGEM-T-xhcytb11进行序列测定。结果获得了剑尾鱼线粒体cytb基因全序列,共1140bp。结论用BLAST与GenBank中线粒体DNA序列进行比较,显示剑尾鱼与其他鱼类cytb基因具有较高同源性,根据剑尾鱼与其他13种鱼cytb基因序列同源性所建立是进化树,与传统分类地位基本吻合。

  • 标签: 剑尾鱼 线粒体 细胞色素B基因 序列分析
  • 简介:目的建立用于评价副溶血弧菌毒力小鼠模型,为研究副溶血弧菌致病机制奠定基础。方法将适宜浓度菌液经腹腔感染4~5周龄雌性BALB/c小鼠,观察小鼠症状及死亡数。结果高盐(2%NaCl)条件下培养强毒株RIMD2210633,经腹腔感染107CFU菌量,小鼠存活率为20%~30%,而环境无毒株S251小鼠存活率为100%。结论建立了评价副溶血弧菌毒力实验小鼠模型,并应用于不同盐分浓度培养强毒株与环境无毒株毒力比较实验。

  • 标签: 副溶血弧菌 小鼠 致死性
  • 简介:目的探讨单纯烟雾暴露所致肺气肿小鼠模型建立及病理学、气道炎症及肺功能评价,并进行支气管肺泡灌洗(bronchoalveolarlavage,BAL)技术改进。方法20只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照及烟雾暴露组,烟雾暴露90d并观察30d后行小鼠肺功能检查、应用改进方法留取BALF行细胞计数及行肺组织病理切片观察,并与正常对照组进行比较。结果烟雾暴露组小鼠气道阻力(Raw)较正常对照组增高,动态肺顺应性(Cdyn)降低;BALF中细胞总数高于正常对照组,巨噬细胞数(AM)、中性粒细胞数(N)、中性粒细胞所占比例(N%)也高于对照组,差异均有统计学意义;病理学观察示烟雾暴露组肺泡腔扩大、部分肺泡间隔断裂、肺泡腔融合、肺气肿形成,气道上皮排列紊乱、部分气道上皮增生、周围炎症细胞浸润并伴有平滑肌增生;形态学计量分析示烟雾暴露组平均内衬间隔(MLI)及肺泡破坏指数(DI)较正常对照组增加。应用改进技术行BAL成功率100%,回收率高达90%。结论单纯烟雾暴露可以成功建立小鼠肺气肿模型且稳定可靠,与人类慢性阻塞性肺病相似性好,经BAL技术改进后该模型可行性高。

  • 标签: 慢性阻塞性肺疾病 肺气肿 香烟烟雾 动物模型 支气管肺泡灌洗
  • 简介:目的建立红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,为活体荧光影像系统建立重要实验动物模型.方法把DsRed-Express和EGFP基因插入chickenβ-actin强启动子下游构建转基因载体,建立红色荧光和绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠.PCR鉴定红色荧光和绿色荧光转基因小鼠基因表型,活体荧光影像系统分析红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,荧光显微镜检测红色荧光和绿色荧光转基因小鼠全身组织器官组织形态.结果分别建立了3个系红色荧光和3个系绿色荧光转基因小鼠.活体荧光影像系统分析转基因小鼠分别呈现红色荧光和绿色荧光.经荧光显微镜观察,DsRed-Express转基因小鼠红色荧光蛋白在多个组织器官中表达,尤其在胰腺、肝脏、肾脏和脾脏等器官表达量较高.EGFP转基因小鼠绿色荧光蛋白在全身各个组织器官中表达,尤其在胰腺、心脏、小肠、外周血细胞和脑组织等器官组织中表达量较高.结论DsRed-Express和EGFP基因在转基因小鼠中系统性高表达,成功建立了红色荧光和绿色荧光转基因小鼠.DsRed-Express和EGFP转基因小鼠将成为活体荧光影像系统重要实验动物模型.

  • 标签: 红色荧光蛋白 绿色荧光蛋白 转基因 模型 动物
  • 简介:目的高脂诱导建立五指山小型猪动脉粥样硬化(AS)模型,观察脂蛋白相关磷脂酶A_2(Lp-PLA_2)在AS模型血浆和斑块中表达变化。方法将10只五指山小型猪随机分为正常对照(Ctr)组4只饲喂普通饲料、AS模型(ASmodel)组6只饲喂高脂饲料,连续造模24周。造模24周时,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、甘油三酯(TG)、C-反应蛋白(CRP)、Lp-PLA_2活性和成分变化,并取主动脉进行油红O染色以及取腹主动脉血管行HE染色和IL-6免疫组化染色,观察血管脂质沉积和斑块病理以及IL-6蛋白表达变化。采用RT-PCR和WesternBlot法观察腹主动脉组织中Lp-PLA_2mRNA和蛋白表达情况。结果与正常对照组比,AS模型组体重、体质量指数(BMI)、TC、LDL-C、HDL-C、CRP、Lp-PLA_2活性和成分均显著升高(P〈0.05,P〈0.01),同时主动脉脂质沉积明显(P〈0.01)和AS斑块形成,腹主动脉组织中Lp-PLA_2mRNA和蛋白表达以及IL-6蛋白表达均显著升高(P〈0.05)。结论长期高脂饮食24周能诱发五指山小型猪AS,且Lp-PLA_2在参与血管炎症和AS斑块形成中发挥了关键作用。

  • 标签: 五指山小型猪 动脉粥样硬化 脂蛋白相关磷脂酶A2 炎症
  • 简介:目的阐明β-葡糖醛酸酶(β-)在正常恒河猴组织中分布。方法对实验恒河猴主要组织冰冻切片采用后偶合技术进行了染色和显微观察。结果肾上腺皮质柬状带和网状带细胞,肝脏、睾丸、卵巢、胃肠道实质细胞、枯否细胞、软骨细胞、卵巢间质腺细胞等富含β-G而深染蓝色。肾上腺皮质球状带细胞、血细胞、脑、肌肉、胆囊和胰腺实质细胞等酶含量少而染色较弱。软骨基质,小脑皮质分子层和颗粒层等部位酶呈阴性。结论动物种系和品种不同,器官组织内β-G含量也不相同。

  • 标签: 恒河猴 肾上腺皮质 细胞 葡糖醛酸 骨基质 冰冻切片
  • 简介:本研究以羔羊卵巢母细胞为材料,把体外受精技术应用到绒山羊育种工作中,观察了羔羊体外受精卵体外发育及移植产羔效果,以便探讨通过体外受精技术缩短绒山羊育种周期技术途径。对406枚羔羊体外受精卵用M199+hcG、M199+LH和M199+hcG+EGF三种培养基进行体外发育培养。结果是,2-4细胞期胚发育率平均分别为40.0%、43.6%和49.6%;桑椹胚和囊胚发育率平均分别为17.5%、15.8%和18.8%。将49枚Fl代羔羊2-8细胞期胚移植给31只受体母羊,结果有11只妊娠(35.5%)并产羔12只(F2代);将24枚F2代羔羊2~4细胞期胚移植给15只受体母羊,结果有2只妊娠(13.3%)并产F3代羔羊2只。

  • 标签: 羔羊 育种周期 绒山羊 体外受精卵 细胞期 母羊
  • 简介:目的研究软骨多糖对S180荷瘤小鼠作用,并探讨其抑瘤作用机制.方法采用小鼠肉瘤S180细胞建立动物腹水瘤模型,通过腹腔注射软骨多糖进行治疗,治疗期间抽取腹水瘤细胞进行细胞生物学分析.通过HE染色,流式细胞术、TUNEL法检测细胞形态学方面、细胞周期及凋亡率变化情况;通过免疫荧光方法检测Fas、增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况.结果软骨多糖可以明显提高S180荷瘤小鼠生存率,细胞形态学观察可见细胞出现细胞质浓缩、核固缩及凋亡小体等现象.软骨多糖作用后S180细胞,其细胞周期被阻遏于G2/M期,Fas蛋白表达水平于给药24h后升高,增殖细胞核抗原PCNA表达下降.结论软骨多糖可能通过影响肿瘤细胞周期和Fas、PCNA蛋白表达来诱导S180细胞凋亡,并显著抑制肿瘤细胞生长,延长S180荷瘤小鼠生存时间,研究证实动物软骨多糖具有潜在药用价值.

  • 标签: 软骨多糖 小鼠 肉瘤180 细胞凋亡
  • 简介:目的建立大鼠肝移植术后腹腔感染模型。方法构建DA大鼠到LEW大鼠肝移植模型,采用腹腔内细菌注射方法建立感染模型,通过对大鼠肝功、血气、血细胞计数等各项指标的检测对模型进行综合评价。结果肝移植术后5d注射细菌,大鼠死亡率高,不利后续研究;术后3d注射细菌,并选定5×10^5cfu/mL为最终注射浓度,感染后大鼠7d存活率累计可达到37.5%左右,随之感染加重,大鼠状态逐渐变差,直肠温度不断升高,WBC计数也随之增加,pH下降,大鼠出现代谢性酸中毒,肝功能损害进行性加重,肝实质损害重于胆道损伤,大约在感染5d左右相继死亡,多器官病理分析表明,大鼠死亡原因为肝损害,不并发肺脏、肾脏损害。结论采用腹腔内大肠埃希菌注射建立肝移植术后腹腔细菌感染模型是比较成功,可用于相关领域研究。

  • 标签: 肝移植 细菌感染 腹腔 免疫抑制 大鼠
  • 简介:目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE-Ins-human)ES阳性细胞克隆筛选饲养层.方法通过脂质体转染方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因质粒pHyg导入3T3细胞中,利用潮霉素药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定.结果经500μg/ml潮霉素压力筛选后,获得了抗性细胞克隆.抗性3T3细胞形态和生长速度与正常3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应核苷酸片段.结论成功地培育了潮霉素抗性3T3细胞,为进行目的基因(pTRE-Ins-human)转染ES细胞阳性细胞克隆筛选奠定了基础.

  • 标签: 潮霉素 抗性 细胞 饲养层 基因
  • 简介:为提供黑色素类动物实验相关参考资料,对黑色素相关疾病发生机制和药物防治研究中常用模式生物和实验动物进行了综述。通过介绍斑马鱼、Smythline鸡、C57BL小鼠、无毛小鼠、棕黄色豚鼠等多种实验动物研究用途,为黑色素相关实验研究提供参考。

  • 标签: 黑色素 实验动物 斑马鱼 Smythline鸡 C57BL小鼠
  • 简介:目的采用反刍兽源附红细胞体感染小鼠,研究附红细胞体感染途径及在小鼠体内消长规律,试图建立附红细胞体感染动物模型.方法经小鼠腹腔、皮下接种含有附红细胞体奶牛、山羊血液,脏器悬液和接触感染.结果四种接种方法均获成功,附红细胞体在小鼠体内呈现一定规律性.感染后第8天附红细胞体在小鼠血液可以查见.感染后第15~18天附红细胞体感染率达到高峰.感染后第20d附红细胞体逐渐消失.在整个实验过程中未见感染小鼠明显临床症状.结论可以用小鼠建立附红细胞体感染动物模型.附红细胞体感染方式有以下几种:腹腔、皮下接种、接触感染.

  • 标签: 反刍动物 附红细胞体病 小鼠 感染 动物模型
  • 简介:目的为了获得组织结构完整、功能正常子宫内膜样本以进行胚胎着床体外研究。方法作者比较了剪碎法、刮取法和挤压法取得子宫内膜效果。结果挤压法得到小鼠子宫内膜呈圆形条状;子宫内膜组织结构完整,具有内膜上皮并包含腺体、血管基质;意外发现子宫系膜侧子宫内膜缺损。结论挤压法是获取子宫内膜进行相关研究理想方法。

  • 标签: 子宫内膜组织 小鼠 缺损 取法 正常 体外研究
  • 简介:Presenilin1(PS1)突变是早发家族性老年痴呆发生重要因素之一。目前对于PS1结构和功能研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性蛋白酶,很可能参与众多细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体发育等等。但对于PS1精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1cDNA全长引物,以C57BL/6小鼠9天胚RNA为模板,利用RT-PCR方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融...

  • 标签: PS1基因 绿色荧光蛋白 融合蛋白 小鼠
  • 简介:目的探讨快速建立系膜增殖性肾炎大鼠模型方法。方法30只SD大鼠随机分3组。正常对照组;葡萄球菌内毒素(SEB)静脉注射,牛血清白蛋白(BSA)隔日口服及免疫佐剂皮下注射组;在第二组基础上加作肝左叶切除组,14周后分别作尿蛋白,IGA免疫荧光及病理组织检查。结果肝左叶切除组蛋白尿出现时间早于非肝切除组,但两组在14周后蛋白尿定量无明显统计学差异(P>0.05)。对照组尿蛋白定性始终均为阴性,光镜检测轻至中度系膜扩张,伴系膜细胞少量增生,但两组比较无明显统计学意义(P>0.05)。肝左叶切除组IgA免疫荧光强于非肝切除组。结论葡萄球菌肠内毒辣纱静脉注射,BSA隔日口服,免疫增强剂或在上述基础上加肝左叶切除方法都能诱发SD大鼠系膜增殖性肾炎模型。肝左叶切除组蛋白尿出现时间早;但于14周后尿蛋白量无显著差异。

  • 标签: 系膜增殖性肾炎 大鼠模型 比较 IGA肾病 蛋白尿 免疫荧光
  • 简介:目的测定6~8月龄Beagle犬正常生理、生化等数据,为药理、毒理试验提供对照参考.方法血液学、血液生化学、血清激素水平、血压、呼吸、心电图、骨髓象、脏器系数等指标均按现临床检测方法进行.结果48头6~8月龄Beagle犬(雌雄各半)正常生理、生化参数,血清激素水平,骨髓象及主要脏器系数均取得平均值及标准差范围.结论6~8月龄正常Beaele犬生理、生化等参数个体差异较小,本研究结果可作为新药Beagle犬长毒试验中各项测试正常值参考.

  • 标签: 生理学 血液生物化学 骨髓 临床检测