简介:摘要目的探索巨细胞病毒UL144对SD幼鼠肝细胞损害的影响及其内在分子机制。方法取健康SD幼鼠24只,分成3组,分别为空白组,空载组和UL144组(实验组),空白组不做处理,空载组尾静脉注射空载腺病毒,实验组SD幼鼠尾静脉注射携带有UL144蛋白的慢病毒。RT-PCR法检测各组中UL144 RNA,ELISA法检测caspase-8、caspase-12和Toll样受体(TLR4)表达情况,HE染色检测肝脏细胞的变化,TUNEL法检测SD幼鼠肝细胞的凋亡情况。结果三组幼鼠肝脏内的UL144 RNA、caspase-8和TLR4蛋白的表达量差异有统计学意义(F=156.166、97.287和67.624,P均<0.05),其中实验组的UL144 RNA、caspase-8和TLR4蛋白表达量分别为1.823±0.080、0.305±0.004和0.880±0.068,高于空载组及空白组(P均<0.05)。实验组、空载组和空白组的caspase-12的表达水平分别为0.127±0.005、0.116±0.003和0.104±0.005,差异无统计学意义(F=2.156,P>0.05);肝细胞凋亡指数分别为7.68±0.37、2.26±0.24和2.38±0.16,差异有统计学意义(F=158.427,P<0.05),实验组高于空白组和空载组(P均<0.05)。结论巨细胞病毒UL144可能通过激活TLR4并介导效应分子caspase-8诱导了幼鼠肝脏细胞的凋亡,内质网应激通路caspase-12没有参与。
简介:摘要目的探讨外周血UL16结合蛋白2(ULBP2)表达水平在结直肠癌早期诊断和评估预后中的价值。方法选取2016年5月至2019年5月湖北医药学院附属东风医院结直肠癌患者80例(结直肠癌组)和健康体检者60例(健康对照组)。采用酶联免疫吸附试验法检测两组血清ULBP2表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清ULBP2对结直肠癌的诊断效能;Cox回归模型分析影响结直肠癌患者生存的危险因素;Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较采用log-rank检验法。结果结直肠癌组血清ULBP2水平明显高于健康对照组[(85.52 ± 12.18)ng/L比(66.20 ± 8.28)ng/L],结直肠癌组Ⅰ~Ⅱ期患者血清ULBP2水平[(76.44 ± 7.56)ng/L]也明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清ULBP2诊断结直肠癌的最佳临界值为79.53 ng/L,曲线下面积(AUC)为0.869,敏感度为73.75%,特异度为91.67%;血清ULBP2诊断Ⅰ~Ⅱ期结直肠癌的最佳界值为71.86 ng/L,AUC为0.827,敏感度为78.57%,特异度为78.33%。按中位血清ULBP2水平将患者分为高表达(血清ULBP2水平>85.52 ng/L)38例,ULBP2低表达42例。血清ULBP2表达水平与淋巴结转移和组织分化有关(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,淋巴结转移、远处转移、组织分化和血清ULBP2是影响结直肠癌患者不良预后的危险因素(P<0.01或<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,仅血清ULBP2是影响结直肠癌患者不良预后的独立危险因素(HR = 0.194,95% CI 0.077~0.490,P = 0.001)。血清ULBP2高表达患者中位生存期明显短于血清ULBP2低表达患者(28个月比50个月),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清ULBP2可以作为结直肠癌患者早期诊断和预后评估的指标。
简介:摘要目的观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响,探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法常规体外培养KG1a细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率;应用实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响;流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因,观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果不同浓度(1、2、3、4、5 μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖,呈浓度依赖性,其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC50值)为2.7 μmol/L。荧光定量RT-PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高,ATO在浓度分别为1、2、3、4、5 μmol/L时,与未加药组比较,ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未加药组相比,当ATO浓度分别为1、2、3、4、5 μmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h,ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时,ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果发现,当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低,而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。结论ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达,ATM/ATR-CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。