简介:TA克隆构建含MOC1基因cDNA片段的重组质粒,作为TaqMan定量检测水稻分蘖基因MOC1mRNA的标准品,建立了检测方法。采用RT—PCR。的方法,从水稻分蘖芽总RNA中逆转录扩增总cDNA,PCR扩增MOC1基因中设计的目的片段,将纯化的目的片段与pMD19-TSimple载体连接,转化宿主菌JM-109,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验。建立了MOC1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达10^2拷贝,线性范围为10^2-10^7拷贝,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r=0.999),扩增效率高(E=92.8%)。成功建立了MOCI基因实时荧光PCR定量标准品,且TaqMan荧光定量RT—PCR的方法可对水稻分蘖基因MOC1mRNA的表达进行准确定量。
简介:摘要招标采购是企业节约成本开支、提高资金使用率且有限防范部分道德风险的重要措施。随着我国招标相关法律的逐赵杰
简介:摘要在教师教学质量评估过程中,如何有效屏蔽或忽略学生的个人因素干扰,更加真实的体现出教师个人教学质量的实际水平,是一个迫切需要解决的问题。最小二乘支持向量机的多分类方法的学习以及小样本识别等方面有着独特的优势。提出了基于LSSVM的多分类模型,可被应用于教学质量评估系统中,经验证可获得较好的测试结果。