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  • 简介:目的构建长链非编冯RNABRE-AS1的慢病毒表达载体。方法利用重叠延伸PCR法构建出BREAS1的全长目的片段,将全长目的片段及慢病毒载体质粒pCDHCMVMC8EF1分别双酶切后进行连接,转化到感受态大肠杆菌后,通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落,提取目的质粒。利用目的质粒制备包装慢病毒,并感染肾细胞癌细胞系OS-RC-2,分别利用荧光显微镜和荧光实时定量PCR检测细胞中BREAS1是否过表达。结果重叠延伸PCR得到正确的BREAS1全长序列,经过双酶切、连接、转化、筛选及I)NA测序,成功构建重组慢病毒载体质粒pCDH-BRE-AS1。通过荧光显微镜检测,几乎昕有经过嘌呤霉素筛选的OSRC2细胞均具有绿色荧光,显示其被重组慢病毒感染;荧光实时定量PCR显示,感染了RNABRE-AS1慢病毒的OSRC2细胞中,BREAS1的表达水平上升了38.5倍。EdU插入实验显示BREASl抑制肾癌细胞的增殖。结论本研究成功构建了BRE-AS1的慢病毒表达载体,并证明BREAS1能抑制肾癌细胞增殖。

  • 标签: BRE-AS1 慢病毒载体 肾细胞癌 长链非编码RNA
  • 简介:精子不是成熟的直到他们运输他们获得使肥沃的活动性和能力的epididymis通过顺序的修正的一颗卵。epididymis有三功能的区域,头,语料库,和尾,和epididymis的钠蛋白质在上述修正起重要作用。然而,有在头和尾之间的微分丰富的蛋白质大部分仍然是未知的。在精子成熟期间揭示头和尾的函数,从鼠标的头和尾的钠蛋白质被等压的标签为相对、绝对的quantitation(iTRAQ)分析。总的来说,128差别充实蛋白质被发现,哪个46是充实的头,82是充实的尾。生物信息的分析证明那类脂化合物新陈代谢在头是活跃的;当阴离子绑定和阳离子绑定活动和磷和organophosphate新陈代谢在尾是活跃的时。新epididymal钠蛋白质,包含1的充实头的PDZ领域(Pdzk1),也把Na+/H+交换称为规章的余因子3(NHERF3),它在胆固醇新陈代谢和肉毒碱运输起一个关键作用,在类脂化合物新陈代谢被发现。西方的弄污和immunofluorescence分析证明Pdzk1在epididymis然而并非在睾丸被表示,并且在精子尾巴的中间的片局部性。Pdzk1蛋白质水平也在normozoospermic人与那相比在asthenozoospermic病人的情况下在精子被减少,建议Pdzk1可以参予精子成熟规定并且可以与男不孕被联系。这些结果可以提供新卓见进精子成熟和男不孕的机制。

  • 标签: 蛋白质水平 PDZ 精子成熟 类脂化合物 新陈代谢
  • 简介:目的本研究探索冠心病差异表达长链非编码RNAASO3973在人脐静脉内皮细胞中对白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达调控作用。方法应用敲低和过表达ASO3973的策略,利用real-timePCR技术检测炎症因子和黏附分子的mRNA表达水平;利用WesternBlot和ELISA检测IL-6、ICAM-1的蛋白表达水平;利用免疫荧光流式细胞术检测细胞膜表面ICAM-1的表达。结果敲低ASO3973导致炎症因子(IL-6、IL-8、IL-1β)和黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)的mRNA水平显著降低(P〈0.05),细胞上清液中的IL-6分泌量显著降低(P〈0.05),细胞总蛋白中IL-6和ICAM-1的蛋白表达水平显著降低(P〈0.05),细胞膜表面ICAM-1的表达显著降低(P〈0.01);过表达ASO3973导致IL-6、ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达水平显著升高(P〈0.05),细胞上清液中的IL-6的分泌量显著升高(P〈0.05),细胞膜表面ICAM-1的表达显著升高(P〈0.01)。结论LncRNAASO3973显著调控内皮细胞IL-6、ICAM-1的基因表达水平。提示ASO3973可能通过调控内皮细胞炎症因子和粘附分子的表达,影响血管内皮细胞功能,参与动脉粥样硬化的发生。

  • 标签: 长链非编码RNA ASO3973 人脐静脉内皮细胞 IL-6 ICAM-1 动脉粥样硬化
  • 简介:Insulinsecretorygranules(ISGs),agroupofdistinguishingorganellesinpancreaticβcells,areresponsibleforthestorageandsecretionofinsulintomaintainbloodglucosehomeostasis.ThemolecularmechanismsofISGbiogenesis,maturation,transportation,andexocytosisarestilllargelyunknownbecausetheproteinsinvolvedinthesedistinctstepshavenotbeenfullyidentified.Subcellularfractionationbydensitygradientcentrifugationhasbeensuccessfullyemployedtoanalyzetheproteomesofnumerousorganelles.However,useofthismethodtoelucidatetheISGproteomeislimitedbyco-fractionatedcontaminantsbecause1SGsareverydynamicandhaveabundantexchangesorcontactswithotherorganelles,suchastheGolgiapparatus,lysosomes,andendosomes.Inthisstudy,wedevelopedanewstrategyforidentifyingISGproteinsbyproteincorrelationprofiling(PCP)-basedproteomics,whichincludedISGpurificationbyOptiPrepdensitygradientcentrifugation,label-freequantitativeproteome,andidentificationofISGproteinsbycorrelatingfractionationprofilesbetweencandidatesandknownISGmarkers.Usingthisapproach,wewereabletoidentify81ISGproteins.Amongthem,TM9SF3,anine-transmembraneprotein,wasconsideredahighconfidenceISGcandidateproteinhighlightedinthePCPnetwork.FurtherbiochemicalandimmunofluorescenceassaysindicatedthatTMgSF3localizedinISGs,suggestingthatitisapotentialnewISGmarker.

  • 标签: INSULIN SECRETORY GRANULES (ISGs) PROTEOME LABEL-FREE
  • 简介:利用雄性不育系做母本生产杂交一代种子,为改善作物的生产提供了十分有利的条件.细胞质雄性不育(CMS)和由光周期(PGMS)/温度诱导(TGMS)的不育性极大地促进了作物杂交育种的发展.越来越多的研究表明非编码ncRNA分子与植物雄性不育有关,如水稻的PGMS和TGMS与ncRNA密切相关.在CMS中,线粒体ORF影响小孢子发育而导致CMS发生的机制仍然不明确.高通量测序使得在全基因组范围内发现和验证这些调控分子及其靶基因,并阐述它们与CMS的相关性成为可能.植物线粒体DNA中的ncRNA以及其可能诱导的CMS的机理是当前研究的热点,但目前尚没有证据表明ncRNA与CMS有关,还需要转基因等遗传方法来进行验证.在本文中,我们总结了最近关于ncRNA与植物CMS关系的相关研究,希望能够提高对控制植物CMS的ncRNA介导的调控途径的理解.深入了解植物CMS可为促进CMS在农作物育种的利用提供技术支撑.

  • 标签: 非编码RNA 雄性不育 线粒体 花粉 基因表达
  • 简介:Objective:ThepresentstudyaimedtoinvestigatecircularRNA(circRNA)expressioninuvealmelanoma(UM).Methods:First,weusedmicroarraytocomparetheexpressionprofilesofcircRNAinfiveUMsamplesandfivenormaluveatissues.Next,bioinformaticsanalyses,includinggeneontology(GO)analysisandpathwayanalysis,wereappliedtostudythesedifferentiallyexpressedcircRNAstopredictpathogenicpathwaysthatmaybeinvolved.Quantitativereal-timepolymerasechainreaction(qRT-PCR)in20UMsamplesand20normaluveasampleswasusedtoconfirmthecircRNAexpressionprofilesobtainedfromthemicroarraydata.Finally,weanalyzedtheinteractionbetweenvalidatedcircRNAsandtheirpotentialcancer-associatedmiRNAtargets.Results:Intotal,50,579circRNAs[foldchange(FC)≥2.0;P<0.05],including20,654up-regulatedand29,925down-regulatedcircRNAs,wereidentifiedasdifferentiallyexpressedbetweenUMtissuesandnormaluveatissues.WeusedqRT-PCRtoverifysevendysregulatedcircRNAsindicatedbythemicroarraydata,includinghsacirc0119873,hsacirc0128533,hsacirc0047924,hsacirc0103232,hsa-circRNA10628-6,hsacirc0032148andhsacirc0133460,whichmaybepromisingcandidatestostudyfuturemolecularmechanisms.Conclusions:Thisstudyexplored,forthefirsttime,theabnormalexpressionofcircRNAsinUManddescribedtheexpressionprofileofcircRNAs,providinganewpotentialtargetforthemechanismofUMandfuturetreatmentofUM.

  • 标签: UVEAL MELANOMA CIRCULAR RNA MICROARRAY noncoding
  • 简介:目的骨肉瘤是一类发生于骨间叶组织的恶性肿瘤,恶性程度高。当前其发病的具体分子机制尚不明确且受多种因素影响。环状RNA(circRNA)已被证实在多种疾病中发挥重要的调控作用,可以通过分子海绵机制吸附miRNA进而调控关键基因表达。本研究拟通过查找骨肉瘤circRNA表达谱芯片,并分析差异表达circRNA及其潜在调控机制,预测其在骨肉瘤发生发展过程中的作用。方法通过GEO数据库查找circRNA芯片表达谱,通过GEO2R对芯片进行差异表达分析,对筛选出的上调和下调表达最明显的circRNA各5个做内源竞争性RNA调控网络图,预测出潜在靶mRNA,并应用生物信息学分析方法分析了这些靶mRNA的功能富集情况。结果在骨肉瘤circRNA表达谱芯片(GSE96964)结果中,有110个明显差异表达的circRNA,包括8个明显上调和102个明显下调的circRNA,通过位点预测网站,在5个上调最明显的circRNA下游预测出127个mRNA,5个下调最明显circRNA下游预测出158个mRNA。OMICSbean分析结果显示,这些基因所富集的通路与骨肉瘤的发生发展有密切关系。结论本研究筛选出的110个明显差异表达circRNA不仅可以作为骨肉瘤诊断与治疗的分子标志物,而且在骨肉瘤的发生发展过程中有潜在的调控作用。

  • 标签: 环状RNA 骨肉瘤 表达谱 生物信息学分析
  • 简介:Althoughthegreyforecastingmodelhasbeensuccessfullyadoptedinvariousfieldsanddemonstratedpromisingresults,theliteraturesshowitsperformancecouldbefurtherimproved,suchasfortheDGM(1,1)model,basedonaconcavesequence,themodelingerrorwillbelarger.Inthispaper,firstlythedefinitionofsequenceconvexityisgivenout,anditisprovedthattheoutputsequenceofDGM(1,1)modelisaconvexsequence.Next,theresidualchangelawofDGM(1,1)modelbasedontheconcavesequenceisdiscussed,andthenon-equidistanceDGM(1,1)modelisproposed.Finally,byintroducingthesymmetrytransformation,aconcavesequenceistransformedintoaconvexsequence,calledthesymmetricsequenceoftheconcavesequence,andthenconstructthenon-equidistanceDGM(1,1)modelbasedontheconvexsequence.Theexampleresultsshowthatthenovelmethodismoreaccuratethanthedirectmodelingforaconcavesequence.

  • 标签:
  • 简介:利用回溯算法,将RNA结构中的环放在二维直角坐标系中,分析其可能存在的形状,并给出了程序的实现方法。结果表明,随着RNA序列的增长,其形状数目呈指数增长。

  • 标签: RNA 回溯算法 直角坐标系
  • 简介:化疗药物是治疗肿瘤的主要方法。但肿瘤会对药物产生耐药性,影响了对患者的治疗效果。随着分子医学的快速发展,人们发现基因突变、调节肿瘤相关靶基因及细胞的增殖与凋亡等影响肿瘤耐药性的形成。微小RNA(miRNA)在真核基因表达调控中起着广泛作用。本文阐述microRNA在调控肿瘤耐药性基因的调控机理和在消除肿瘤耐药的医学应用。

  • 标签: 微小RNA 肿瘤 耐药性 基因调控
  • 简介:摘要目的探讨微小RNA25在肺癌患者中的价值。方法选择我院明确诊断为肺癌的患者,定义为研究组。同时选择我院健康人群为对照组。研究组肺癌患者与对照组健康人群微小RNA25表达水平;不同病理类型、病理分期、淋巴结转移水平肺癌患者微小RNA25表达水平;微小RNA25与临床病理特征相关性。结果研究组肺癌患者与对照组健康人群微小RNA25表达水平比较有差异(P<0.05);不同病理类型、病理分期、淋巴结转移水平肺癌患者微小RNA25表达水平存在差异,比较有差异(P<0.05);微小RNA25与病理类型、TNM分期、淋巴结转移水平均呈正相关,相关系数分别为0.588、0.612、0.687,P<0.05。结论微小RNA25的测定与评价肺癌患者病理类型、TNM分期、淋巴结转移水平有一定价值,对筛查肺癌人群有重要意义。

  • 标签: 微小RNA25 肺癌 价值
  • 简介:长链非编码RNA(lncRNA)在癌症中扮演重要的角色。基因组关联研究已经发现,大量的lncRNA与各种类型的癌症相关。lncRNA的表达和突变能够促进肿瘤的形成和转移。lncRNA可能具有肿瘤抑制和促进致癌作用。因为lncRNA的基因组表达具有多样性和特异性,所以,lncRNA被认定可以作为新的肿瘤分子标志物和治疗靶点。本文结合国内外最新报道,对lncRNA在癌症中的研究进展作一综述。

  • 标签: 肿瘤 长链非编码RNA 生物标志物 综述
  • 简介:子痫前期(preeclampsia,PE)是一种妊娠期特有的疾病,指妊娠20周后出现的高血压综合征,严重危及母儿健康,但其病因及发病机制尚未完全阐明。竞争性内源RNA(competingendogenousRNA,ceRNA)是一类RNA的总称,它们通过结合同一种miRNA实现自身间的相互调控并且参与靶基因表达的调控。近期研究发现,ceRNA在子痫前期发生发展中发挥一定作用。本文将就ceRNA的特征和作用方式及其与子痫前期的关联进行总结与阐述。

  • 标签: 子痫前期 竞争性内源RNA 发病机制
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  • 简介:摘要现阶段,随着社会的发展,我国的电力工程的发展也有了很大的提高。为贯彻落实中国南方电网公司的有关要求,按照南网广东电网有限责任公司要求中明确的平台为核心地位的指导思想,南网河源供电局坚持“统一标准、规范实施、严格考核”的原则,构建“1+1+1”供电所综合业务监控机制,将供电所综合业务监控室打造成供电所的唯一指挥中心,大力开展供电所综合业务监控工作,促进供电服务由“被动”到“主动”、过程控制由“事后”到“事中”、绩效管理由“粗放”到“精益”的转变,进一步巩固供电所管理提升成果,提高供电所综合业务管理和专业指标管控水平。

  • 标签: 构建&ldquo 1+1+1&rdquo 供电所 综合业务 监控机制