简介:摘要目的探讨隐丹参酮在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以浓度为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0 μmol/L的隐丹参酮处理J82细胞48 h后,采用CCK-8法检测其对J82细胞增殖的影响。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测J82细胞凋亡情况。免疫印迹法(Western blotting)检测细胞增殖及凋亡相关蛋白p65、caspase 3、caspase 8、caspase 9表达的差异。结果CCK-8法结果显示各组的450 nm吸光度(A)值:对照组(1.77±0.06),0.5 μmol/L组(1.78±0.08),1.0 μmol/L组(1.64±0.05),2.0 μmol/L组(1.48±0.12),3.0 μmol/L组(1.20±0.07),4.0 μmol/L组(0.93±0.10),5.0 μmol/L组(0.76±0.02),8.0 μmol/L组(0.05±0.01),各组的450 nm A值差异有统计学意义(F=329.83,P=0.00),除0.5 μmol/L组外其余各两组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示三组的早期凋亡率和总凋亡率在总体上差异均有统计学意义(F=32.49,P=0.00;F=6.39,P=0.03);两个实验组的早期凋亡率均高于对照组(均P<0.05),且3.0 μmol/L组比1.0 μmol/L组更高[(11.83±1.12)%比(7.01±1.84)%,t=3.73,P<0.05]。Western blotting结果显示隐丹参酮处理后p65蛋白表达减少,caspase 3、caspase 9蛋白表达增加。结论隐丹参酮在体外可能通过抑制NF-κB信号转导通路来抑制人膀胱癌J82细胞增殖,并通过线粒体途径诱导其凋亡。
简介:摘要目的观察miR-5011-5p对膀胱癌细胞系J82凋亡和迁移的影响并探讨可能的作用机制。方法以J82细胞为研究对象,分别转染随机序列分子(NC组)和miR-5011-5p序列分子(miR-5011-5p组)。通过流式细胞术和划痕实验分析miR-5011-5p对J82细胞凋亡和迁移的影响,通过生物信息学预测miR-5011-5p的靶基因,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blot分别检测miR-5011-5p对靶基因表达的影响。结果miR-5011-5p组J82细胞中miR-5011-5p相对表达量为10.73±1.67,显著高于NC组的1.04±0.16(t=5.81,P < 0.01)。NC组、miR-5011-5p组J82细胞凋亡率分别为(8.83±1.67)%、(34.96±3.80)%,差异有统计学意义(t=6.30,P < 0.01)。NC组、miR-5011-5p组J82细胞迁移率分别为(71.31±7.69)%、(37.43±5.01)%,差异有统计学意义(t=3.69,P < 0.05)。miR-5011-5p的靶基因可能是Yes相关蛋白1(YAP1)。与NC组相比,miR-5011-5p对J82细胞YAP1表达具有显著抑制效应(P < 0.01)。结论miR-5011-5p可能通过靶向抑制YAP1基因表达,促进膀胱癌J82细胞的凋亡并抑制其迁移。
简介:摘要目的探究miR-769-3p在膀胱癌组织中的表达水平,通过下调膀胱癌J82细胞中miR-769-3p表达水平,观察沉默miR-769-3p对J82细胞迁移能力和细胞周期的影响。方法采用OncomiR数据库分析miR-769-3p在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达差异。通过Lipofectamine 2000转染试剂转染J82细胞,分为si-miR-769-3p组(转染miR-769-3p小分子干扰片段)和对照组(转染无意义序列)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染后miR-769-3p相对表达水平。通过细胞划痕实验和流式细胞仪检测比较两组J82细胞迁移能力和细胞周期的差异性。采用生物信息学软件MicroRNAdb预测miR-769-3p的靶基因。双荧光素酶报告基因实验验证miR-769-3p与靶基因的互补结合。qRT-PCR和Western blotting分别检测miR-769-3p的靶基因表达水平。计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验。结果与癌旁组织相比,miR-769-3p在膀胱癌组织中表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。si-miR-769-3p组miR-769-3p相对表达水平(1.02±0.16)明显低于对照组(4.50±0.60),差异具有统计学意义(P<0.01)。si-miR-769-3p组细胞迁移率[(26.67±3.98)%]明显低于对照组[(61.86±4.70)%],差异具有统计学意义(P<0.01)。si-miR-769-3p组处于G0~G1期的细胞比例[(57.66±5.74)%]显著多于对照组[(31.26±3.24)%],差异具有统计学意义(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实内皮素3(EDN3)是miR-769-3p的靶基因。对照组和si-miR-769-3p组J82细胞中EDN3 mRNA相对表达水平为1.99±0.66和6.98±0.76,与对照组比较,si-miR-769-3p组EDN3 mRNA相对表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论低表达miR-769-3p可以通过促进EDN3基因表达抑制膀胱癌J82细胞迁移能力,阻滞J82细胞周期。
简介:我们由人白血病细胞系J6-1发现了对自身有增殖刺激作用的膜相关生长调节因子(MAF-J6-1)。经SephadexG-100凝胶过滤及连续两次快速蛋白液相层析(FPLC,MonoQ)将其分离。理化性质研究的结果表明,它是一种对酸、碱和热相对稳定的蛋白,分子量约50kD。抗M-CSF单抗与MAF-J6-1的中和试验结果表明,MAF-J6-1属M-CSF类。