简介：乳酸克鲁维酵母已成功地应用于多种异源蛋白的表达生产之中。与其他酵母相比，乳酸克鲁维酵母具有许多优点，如超强的分泌能力，良好的大规模发酵特性、食品安全的级别及整合表达能力等，其作为宿主系统表达药用蛋白也已显示出巨大的潜力。从不同的菌属、遗传工程和分子生物学技术（如启动子、表达载体）等方面简要综述了乳酸克鲁维酵母作为蛋白表达宿主系统的优势。

简介：丝状真菌，俗称霉菌，在食品工业中被用于生产多种生物酶和有机酸。近年来，人们发现丝状真菌具有分泌量大、表达的蛋白有天然活性等特点，非常适合作为同源和异源重组蛋白的表达宿主，因此被广泛研究和探讨。简要综述了以黑曲霉为代表的几种常被用作蛋白表达宿主的丝状真菌的特点、应用中的主要问题和基本解决方案，以及近年关于丝状真菌表达系统的最佳培养条件和发酵条件的研究进展。

简介：生物发光标记以其可视化,便捷,快速,灵敏,可用于活体研究等诸多优点越来越多地应用于科学研究中。本研究通过CaCl2方法将实验室构建的带有青海弧菌荧光素酶基因luxAB的重组质粒导入大肠杆菌Top10中,利用酶切和核酸电泳检测荧光素酶基因的存在,利用SDS-PAGE检测荧光素酶表达的情况,然后对其表达条件进行优化。单因素试验结果表明：在培养基初始pH值6.0,癸醛体积分数1.25‰,接种量1%,IPTG浓度0.1mmol/L,装液量50mL/150mL,温度37℃条件下,重组菌的发光度最大,即表达量最高。正交试验结果表明：当pH6,IPTG浓度0.08mmol/L,接种量1.2%,温度36℃时重组大肠杆菌表达情况最好,发光度达1262.7。本研究中的重组大肠杆菌为在益生菌等食品微生物中的应用提供技术依据。

简介：阐述了酵母表达系统在表达外源基因特别是大分子真核生物基因方面的优越性,分析了由于酵母表达系统的局限性如聚合体的存在、信号肽加工不完全、内部降解等而造成的产物不均一现象,提出了相应的解决方法。

简介：巴斯德毕赤酵母表达载体连同外源基因通过同源重组整合至宿主染色体基因组座位上,我们将在巴斯德毕赤酵母中表达外源蛋白的情况总结如表1,　　巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白分胞内的表达和分泌到胞外两种方式

简介：目的：研究抗人表皮生长因子受体2（HER2）人源化单克隆抗体能否在毕赤酵母中表达,并对表达产物进行结构分析和活性测定。方法：合成抗HER2人源化单克隆抗体的全基因,构建轻重链双表达盒表达载体,转入毕赤酵母中;通过表型筛选和诱导表达实验得到抗体表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和活性测定。结果：表达产物存在于表达上清中,摇瓶表达水平达到53.7±2.9mg/L;毕赤酵母表达的抗体的轻重链能够自发通过二硫键装配成正确的抗体结构,其中重链发生了N-糖基化;酵母表达的抗HER2人源化单克隆抗体可以抑制高表达p185erbB2肿瘤细胞SKBR-3的生长,半数有效浓度为0.17mg/L。结论：实现了抗HER2人源化单克隆抗体在毕赤酵母中的表达,为毕赤酵母表达系统成为抗体等人用剂量较大的复杂型糖蛋白的大规模、低成本制备平台提供了基础。

简介：为探讨方法模式对异源ELISA法各分析参数的影响情况及影响机理，设计并合成了4种与对硫磷结构相似的竞争半抗原，通过建立不同模式的同源与异源ELISA分析法，比较了不同模式下的抗原抗体用量、灵敏度、检测限及不同样品添加回收率。结果表明，异源分析对抗原和抗体的用量比同源分析有所增加，但异源分析可大大提高方法的检测灵敏度。在异源分析中，直接竞争包被抗原的ELISA（CC模式）方法重现性较差；直接竞争包被抗体的ELISA（AC模式）抗原抗体用量最多，检测灵敏度较低；间接竞争ELISA法（IC模式）具有较好的检测灵敏度，抗环境和基质干扰的能力较强，为异源ELISA分析中较优的模式。

简介：有许多不同的酵母已经有效地被利用来分析或表达真核蛋白。酵母的优点是生长快速，发酵条件可轻易批量化，设备相对简单．各项遗传和生物特性都被充分了解，更重要的是可以像哺乳动物细胞一样做转译后的修饰．所以非常适合于真核重组蛋白的大量生产。

简介：目的：构建含人重组牙骨质蛋白1（recombinationhumancementumprotein1，rhCEMPl）基因的真核表达载体，观察其在酿酒酵母细胞中的表达。方法：采用PCR方法扩增rhCEMPl基因，利用定向克隆技术将rhCEMPl基因插入到中间载体pTeasy中，再进一步转插入载体pWX530。重组的pWX530-rhCEMPl在大肠杆菌DH5a中扩增后，通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定所构建的质粒。经鉴定正确的表达载体pWX530-rhCEMPl转入酵母感受态细胞中，酵母经氨基酸营养缺陷型筛选后培养表达。利用聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）电泳和酶联免疫吸附测定（ELISA）分析蛋白表达情况，离子交换层析提纯蛋白。结果：构建的重组质粒成功转入酵母细胞，通过SDS—PAGE和ELISA检测rhCEMPl表达成功。结论：成功构建的含m—CEMPl基因的真核表达载体pWX530-rhCEMPl，并能转入酵母细胞中成功表达。

简介：汽车在行驶过程中。无论发动机或底盘均有噪声发出，正确判定噪声发出的部位、确定引起噪声和异响有关机件，有助于迅速排除故障，使车辆恢复良好的状态。但由于驱动桥距驾驶室较远，有时异响和噪声需按比较分辨法进行确定。

简介：摘要目的构建hIL-10基因的酵母表达载体，为hIL-10在毕赤酵母高效表达和生物学功能研究奠定基础。方法采用PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增hIL-10基因，以内切酶EcoRI/XbaI对hIL-10基因和质粒pPICZαA进行酶切，将酶切产物进行连接，纯化连接产物并电转化E.coliDH5α，用含Zeocin的LB培养基筛选重组大肠杆菌并抽提质粒进行酶切和DNA测序鉴定；以重组质粒电转化感受态毕赤酵母，以不同浓度Zeocin的YPDS平板筛选重组酵母菌株并对重组酵母作菌落PCR鉴定。结果经PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增获得大小约540bp的片段；重组质粒经EcoRI/XbaI酶切后获得约540bp和3500bp的两种片段；DNA测序结果与Genbank中hIL-10基因序列一致；重组酵母经菌落PCR也获得540bp的片段。结论成功构建了hIL-10基因的酵母表达载体pPICZαA-hIL-10。

简介：利用植物表达系统生产外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统,它有可能替代外源蛋白的发酵生产系统。本文对分子农业的意义、植物表达外源蛋白的影响因素和植物生产外源蛋白质的研究进展等方面作了论述

简介：酵母基地的人才“酵母”李一丹１９９４年１０月２３日，中央电视台《新闻联播》节目报道，我国最大的食用酵母基地在宜昌建成。这个基地就是国家“七五”工业性试验项目，集科研，生产，贸易为一体，年产４０００吨高活性干酵母的宜昌食用酵母基地。这个日前我国乃至业洲...

简介：采用pGAPZαA为表达载体，SMD1168毕赤酵母为受体系统，构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因，共设计4对引物，采用SOE—PCR法合成Brazzein基因，构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA—Bra。将重组质粒线性化，电转导人Pichia．pastorisSMD1168中，用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达，进行SDS—PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌，SDS—PAGE表明，目标蛋白的相对分子量与理论值一致，诱导72h后的目的蛋白表达量达0．12dE。

简介：目的：构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法：利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin（100μg/mL）抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3＇-AOX/5＇-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果：以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论：成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。

简介：摘要目的评价核因子E2相关因子2 (Nrf2)在μ-δ异源二聚体下调兴奋性氨基酸转运体3(EAAT3)表达导致大鼠吗啡复吸中的作用。方法清洁级健康雄性SD大鼠32只，体重200～240 g，采用随机数字表法分为4组(n＝8)：对照组(C组)、吗啡戒断组(E组)、吗啡复吸组(R组)和吗啡复吸＋干扰质粒组(RI组)。腹腔注射吗啡10 mg/kg，建立大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型；停止给药使CPP逐渐消退；再次腹腔注射小剂量吗啡5 mg/kg诱导已消退的CPP恢复，记录伴药箱停留时间。CPP模型建立成功后RI组大鼠侧脑室注射μ-δ异源二聚体干扰质粒5 μl。采用高效液相色谱法测定海马谷氨酸含量，采用Western blot法检测海马内Nrf2和EAAT3的表达，采用RT-PCR法检测海马内Nrf2 mRNA的表达，采用蛋白免疫共沉淀法检测μ-δ异源二聚体与Nrf2相互作用情况。结果与C组比较，R组和RI伴药箱停留时间延长，海马谷氨酸含量和μ-δ异源二聚体/Nrf2比值升高，E组和RI组海马Nrf2和EAAT3表达上调，E组、R组和RI组海马Nrf2 mRNA表达上调(P<0.05)；与E组比较，R组和RI组伴药箱停留时间延长，海马谷氨酸含量和μ-δ异源二聚体/Nrf2比值升高，Nrf2和EAAT3表达下调(P<0.05)，海马Nrf2 mRNA表达差异无统计意义(P>0.05)；与R组比较，RI组伴药箱停留时间缩短，海马谷氨酸含量和μ-δ异源二聚体/Nrf2比值降低，海马Nrf2和EAAT3表达上调(P<0.05)，海马Nrf2 mRNA表达差异无统计意义(P>0.05)。结论μ-δ异源二聚体形成后结合Nrf2，导致海马Nrf2含量减少，引起EAAT3表达下调，从而导致大鼠吗啡复吸的形成。

简介：酵母质量直接影响啤酒发酵与风味，酵母自溶后释放出的蛋白酶A、脂肪酸会破坏啤酒的泡沫及非生物稳定性，还会给啤酒带来不良的口味，增加啤酒浊度及产生沉淀等。

简介：目的构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白（rhINGAP）载体毕赤酵母。方法通过PCR扩增INGAP基因，插入到重组质粒α,／pUC18的α因子信号序列处，再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K，SalI酶切线性化重组质粒αINGAP／pPIC9K。电穿孔转化毕赤酵母，营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子，PCR鉴定是否含有目的基因INGAP，甲醇诱导rhINGAP的表达，Westernblotting鉴定目的蛋白，ELISA法定量测定其含量。结果重组表达质粒αINGAP／pPIC9K经酶切获得758bp片段，符合α因子与INGAP片段融合的长度，筛选得到3个阳性转化子，培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白。结论成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株。

简介：目的构建含Sonichedgehog（SHH）蛋白N端基因片段的毕赤酵母表达载体。方法通过BamH1、Xho1双酶切、T4连接酶连接，将SHH-N基因片段插入pET22b原核表达载体，构建pET22b-SHH-N质粒；经PCR扩增，产物再与pTA2载体连接，构建pTA2-SHH-N重组质粒；经EcoR1及Not1双酶切、T4连接酶连接，将SHH—N端基因片段插入pPIC9K质粒，构建pPIC9K-SHH-N重组质粒；通过线性化、脱磷酸化，将线性化pPIC9K-SHH-NDNA转染毕赤酵母菌株GS115，最后经PCR扩增和测序鉴定。结果转染的毕赤酵母经PCR扩增和测序证实含有SHH-N基因片段，与原始的基因片段序列完全一致。结论成功地构建含SHH-N蛋白基因片段的毕赤酵母表达载体。

简介：通过对571名高职高专学生学习策略的测验研究发现：高职高专学生学习策略水平高于中学生平均水平；普高生在情感策略上占优势，而对口生在调控策略上水平较高；不同届别入学新生的学习策略水平差异不显著，但对口生入学学习策略水平提升明显；访谈研究结果分析表明，对口生学习更具情绪化，对环境和制度敏感。结果分析表明，高职高专学生学习策略有使学习异化的可能性，建议课程计划要重视高职高专学生学习策略的差异，创造科学民主的多元化学习环境，加强学习策略的培养和使用导向，从价值观层面阻断学生学习异化发生的途径。