简介：摘要目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过调节丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)途径对膀胱癌动物模型肿瘤增殖及肿瘤组织内凋亡相关因子的影响。方法选择30只4～5周龄的雄性BALB/-nu裸鼠，购自北京维通利华科技服务有限公司，其中20只注射1×107/ml的T24细胞悬液，待肿瘤体积大于0.1 cm3，根据随机数表法对其进行分组干预，共分为模型组、治疗组，每组10只，另外10只裸鼠作为对照组；模型组及对照组给予生理盐水腹腔内注射，治疗组给予15 mg/kg的TanⅡA腹腔注射，均干预2周；开始干预后每天测量瘤体积1次，绘制肿瘤增殖曲线并在干预结束后将裸鼠处死后取0.1 g肿瘤组织检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、脱氧核糖核酸修复酶降解产物(Cleaved PARP)、细胞凋亡调控因子(bax)、B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(bcl-2)、丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)水平，采用卡方分析计数资料差异，LSD-t检验及方差检验分析组间或多组间数据差异。结果给药7 d后治疗组裸鼠瘤体积明显低于模型组，且差异有统计学意义(t＝4.445，P<0.01)；3组小鼠组织中Caspase-3、Cleaved PARP、bax、bcl-2水平差异有统计学意义(F＝5.937、4.264、6.135、5.364，P<0.01)；相较于模型组，治疗组小鼠组织中Caspase-3、bcl-2明显降低(0.54±0.10、0.56±0.12比0.87±0.12、0.88±0.19)，Cleaved PARP、bax明显升高(0.94±0.21、0.79±0.13比0.65±0.12、0.32±0.08)，且差异存统计学意义(t＝6.681、4.503、3.392、9.731，P<0.01)；3组小鼠组织中p-p38 MAPK、p-ERK水平差异，有统计学意义(F＝3.046、3.216，P<0.05)，相较于模型组，治疗组下小鼠组织中p-p38 MARK及p-ERK水平明显降低(0.61±0.11、0.54±0.11比0.87±0.13、0.69±0.13)，且差异存统计学意义(t＝4.828、4.503，P<0.01)。结论TanⅡA通过有效调节p38MAPK/ERK途径实现抑制膀胱癌动物模型肿瘤增殖并调控肿瘤组织内凋亡相关因子。

简介：摘要目的探索快速上浮脱险致减压病大鼠肺组织炎性反应机制，观察快速上浮脱险致减压病大鼠发病早期肺组织细胞外调节蛋白激酶(ERK)活性变化。方法18只大鼠被分为对照组、快速上浮脱险存活组和快速上浮脱险死亡组，每组6只。快速上浮脱险大鼠在不安全的"快速上浮脱险"8 min后麻醉处死取材。所取肺组织应用Western blotting实验检测p-ERK蛋白表达量。结果快速上浮脱险死亡组大鼠肺组织p-ERK表达量较对照组有显著增高，快速上浮脱险存活组大鼠肺组织p-ERK表达量较对照组无显著增高。结论快速上浮脱险导致减压病大鼠肺组织发生炎性反应可能与ERK激活有关。

简介：摘要目的探讨脂联素(AD)调控滑膜细胞产生炎性因子进而诱发骨关节炎(OA)。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测刺激细胞的最适加药浓度；通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路标志基因如促分裂原活化的蛋白激酶(MEK)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)的表达变化。蛋白质印迹法(Western blot)分析AD的刺激对ERK1/2、p38的磷酸化作用；酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定AD作用后滑膜细胞炎性因子的产量。多个样本比较采用单因素方差分析。结果AD(1 μg/ml)可显著对滑膜细胞产生增殖抑制作用(F＝136.900、11.930，P<0.05)；荧光定量PCR结果显示，与对照组比较，AD可上调MEK及ERK基因表达(1.026±0.072、2.926±0.158，t＝21.910，P<0.05；0.960±0.194、5.433±0.532，t＝15.810，P<0.05)；Western blot结果表明，与对照组比较，AD可刺激滑膜细胞增加ERK1/2、p38的磷酸化(0.488±0.083、1.152±0.050，t＝11.860，P<0.05；0.407±0.014、1.312±0.063，t＝24.370，P<0.05)；ELISA法结果显示，AD可显著促进由趋化蛋白引起的下游炎性因子如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、基质金属蛋白酶(MMP)-3和MMP-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生[(15.077±0.884)、(69.947±2.950) pg/ml、(9.225±0.323)、(134.925±15.02) ng/ml、(93.055±6.073) pg/ml]，与对照组比较，差异有统计学意义(t＝3.239、4.838、5.312、4.366、3.292，P<0.05)，与抑制剂组比较，差异有统计学意义(t＝2.275、6.251、4.331、1.221、3.456，P<0.05)。结论AD可通过影响MAPK/ERK信号通路来增强滑膜细胞炎性因子的产生。

简介：摘要目的探讨索拉非尼对肿瘤细胞凋亡的影响以及涉及髓样细胞白血病-1(Mcl-1)下调的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测索拉非尼对肠嗜铬细胞(EC细胞，购自美国典型菌种保藏中心)增殖的影响，以确定索拉非尼的作用浓度和作用时间。将EC细胞分为4组：对照组、索拉非尼组、索拉非尼＋短发夹RNA以下调荧光素酶的质粒(shLuc)组和索拉非尼＋细胞外调解蛋白激酶下游作用底物磷酸化ets样基因-1(Elk-1)短发夹RNA(shElk-1)组。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Elk-1、Mcl-1、蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白及mRNA的相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析。结果1、5和10 mol/L的索拉非尼作用后EC细胞的存活率分别为(67.42±5.08)%、(50.81±6.11)%和(38.49±5.41)%，显著低于0 mol/作用浓度(99.98±0.25)%(t1＝5.148，t5＝2.142，t10＝1.764，P值均<0.05)，差异有统计学意义。索拉非尼作用12、24和48 h后EC细胞的存活率分别为(65.41±4.61)%、(49.64±4.73)%和(42.49±5.02)%，显著低于0 h作用时间(99.99±0.18)%(t12＝4.624，t24＝1.856，t48＝1.751，P值均<0.05)；而与作用6 h比较，EC细胞的存活率差异无统计学意义(t6＝1.266，P>0.05)。与对照组比较，索拉非尼组细胞凋亡率显著增加(t＝12.235，P<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞凋亡率显著增加(t＝9.271，P<0.05)；各组间bcl-2相对表达量、bax相对表达量和bcl-2/bax比值比较，差异无统计学意义(Fbcl-2＝0.198，Fbax＝0.541，Fbcl-2/bax＝2.679，P值均>0.05)。与对照组比较，索拉非尼组细胞Elk-1蛋白的相对表达量差异无统计学意义(tElk-1蛋白＝1.426，P>0.05)，而Elk-1 mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tElk-1 mRNA＝2.266，tElk-1 mRNA＝0.045，tMcl-1蛋白＝2.774，tMcl-1 mRNA＝2.987，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Elk-1蛋白及mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tElk-1蛋白＝5.340, tElk-1 mRNA＝6.240, tMcl-1蛋白＝6.248，tMcl-1 mRNA＝5.217，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与对照组比较，索拉非尼组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tAkt蛋白＝3.579，tAkt mRNA＝3.641，tGSK3β蛋白＝2.694，tGSK3β mRNA＝3.091，P值均<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tAkt蛋白＝8.041，tAkt mRNA＝6.342，tGSK3β蛋白＝4.391，tGSK3β mRNA＝8.327，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。结论索拉非尼可促进EC细胞凋亡，其机制可能与抑制Elk-1/Mcl-1和Akt/GSK3β通路有关。

简介：摘要抑郁的发病机制目前尚不明确，且抗抑郁治疗的疗效有限，因此研究抑郁的发病机制、寻找新的有效的治疗靶点至关重要。目前认为应激等危险因素作用后激活的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路与抑郁发生密切相关。其中p38通路是经典的炎性通路，c-Jun氨基末端激酶通路活化后可参与细胞凋亡，二者均可促进抑郁发生；细胞外信号调节蛋白激酶通路被认为具有抗细胞凋亡作用，因此在抗抑郁方面起重要作用。总之，抑郁发生与炎症反应导致的抑郁相关脑区细胞凋亡坏死有关，而MAPK通路在其中起着重要的调控作用。笔者现对MAPK通路与抑郁的关系及其可能的炎症反应、细胞凋亡机制进行综述，旨在帮助同道进一步了解抑郁的发病机制，为寻求新的治疗靶点提供思路借鉴。

简介：摘要目的评价大鼠机械通气相关性肺损伤时蛋白激酶Cδ(PKCδ)与细胞焦亡的关系。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠36只，体重200～250 g，采用随机数字表法分为3组(n＝12)：对照组(C组)、机械通气相关性肺损伤组(VILI组)和PKCδ特异性抑制剂KAI 9803组(K组)。气管插管术后VILI组气管内注射200 μl磷酸缓冲盐溶液，K组气管内注射KAI 9803 200 μg/kg，行机械通气4 h(潮气量40 ml/kg、通气频率60次/min，吸呼比1∶1，吸入氧浓度21%，呼气末正压为0)。于机械通气结束时采集股动脉血样，进行动脉血气分析，记录PaO2。通气结束后麻醉处死大鼠，取肺组织，制备支气管肺泡灌洗液(BALF)，光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分，计算肺组织湿重/干重(W/D)比值，采用考马斯亮蓝法测定BALF总蛋白浓度，采用ELISA法测定BALF IL-18和IL-1β浓度，分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定肺组织PKCδ、gasdermin D N端片段(GSDMD-N)及其mRNA的表达。结果与C组比较，VILI组和K组肺损伤评分和W/D比值升高，PaO2降低，BALF总蛋白、IL-18和IL-1β浓度升高，肺组织PKCδ、GSDMD-N及其mRNA表达上调(P<0.01)；与VILI组比较，K组肺损伤评分和W/D比值降低，PaO2升高，BALF总蛋白、IL-18和IL-1β浓度降低，肺组织PKCδ、GSDMD-N及其mRNA表达下调(P<0.05或0.01)。结论PKCδ可介导细胞焦亡，参与大鼠机械通气相关性肺损伤的病理生理过程。

简介：摘要目的观察瑞舒伐他汀对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、成骨分化以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号表达的影响。方法分离培养MSCs，加入1×10－11、1×10－9、1×10－7 mol/L瑞舒伐他汀为实验组，加入二甲基亚砜(DMSO)为对照组，以噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖。成骨诱导培养3、7、14、21 d，依次进行碱性磷酸酶(ALP)定量、茜素红染色及定量、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)等检测。两组间比较采用t检验，两组以上比较采用方差分析。结果在24、48 h，只有1×10－7 mol/L组MSCs增殖显著增加(24 h：3.57±0.24比3.14±0.14，t＝－3.851，P<0.05；48 h：4.19±0.18比3.44±0.11，t＝－6.780，P<0.05)，差异有统计学意义，直到72 h时，1×10－9 mol/L组MSCs增殖也显著增加(5.42±0.13比4.47±0.16，t＝－8.700，P<0.05)，差异有统计学意义。在成骨诱导培养3 d，1×10－7 mol/L组可显著增强骨形成蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)4种基因表达(BMP2：2.1±0.2比1.0±0.2，t＝－6.736，P<0.05；Runx2：5.2±0.6比1.0±0.1，t＝－11.959，P<0.05；OPN：1.8±0.4比1.0±0.2，t＝－3.098，P<0.05；ColⅠ：1.9±0.3比1.0±0.3，t＝－3.674，P<0.05)，差异有统计学意义；同时，1×10－7 mol/L瑞舒伐他汀可使磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和蛋白激酶B(p-Akt)高表达。诱导培养至14 d和21 d，1×10－9、1×10－7 mol/L两组ALP均显著增高(14 d：12.07±1.67、18.32±2.26比3.43±0.36，F＝7.200，P<0.05；21 d：10.74±1.27、14.71±3.18比5.76±0.63，F＝6.489，P<0.05)，差异有统计学意义。茜素红定量与染色相似，在同期1×10－9 mol/L和1×10－7 mol/L茜素红定量也高于对照组(14 d：5.6±0.8、6.2±1.2比1.0±0.2，F＝5.600，P<0.05；21 d：5.8±1.1、7.1±1.8比2.4±0.3，F＝5.956，P<0.05)，差异有统计学意义。结论瑞舒伐他汀促进MSCs增殖及成骨分化，其促骨形成可能与PI3K/Akt信号激活有关。

简介：摘要目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶（SGK2）在肝癌组织与正常肝脏组织中的表达差异以及介导肝细胞癌（HCC）细胞中糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/β-连环蛋白（β-catenin）信号传导的相关机制。方法收集配对的HCC及正常组织20对，采用实时荧光定量PCR技术检测SGK2 mRNA表达情况。应用蛋白质印迹法检测人肝癌细胞系Huh-7、SMMC-7721以及正常人肝细胞系L02中SGK2蛋白水平。应用SGK2 siRNA转染人肝癌细胞系SMMC-7721、Huh-7，然后使用蛋白质印迹方法检测上述转染成功细胞系中GSK-3β、β-catenin的蛋白质表达水平。计量资料以均值±标准差（±s）表示，统计学方法采用Student t检验。结果与配对正常肝组织中的表达水平相比，所有20个HCC样品中SGK2 mRNA表达上调。在两种人肝癌细胞系（Huh-7和SMMC-7721）中SGK2蛋白水平显著高于正常人肝细胞系（P < 0.01）。在人HCC细胞系SMMC-7721和Huh-7中，SGK2表达下调抑制了未磷酸化GSK-3β表达。另外，在HCC细胞系中SGK2表达下调通过阻止β-catenin蛋白酶体降解来降低β-catenin的去磷酸化。结论SGK2在HCC中过表达并介导HCC细胞中GSK-3β/β-catenin信号传导。

简介：摘要目的观察非长链编码RNA垂体瘤转化基因3假基因(PTTG3P)对宫颈癌(CC)细胞增殖、侵袭转移及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法选取2018年5月至2019年5月新乡市中心医院手术切除并经病理诊断确诊的宫颈癌原发灶组织(CC)10例及其配对生物癌旁组织(NCT，癌周2 cm)。采用实时荧光定量PCR检测CC和NCT中PTTG3P mRNA的表达。检测TTG3P shPRNA对CC细胞增殖能力、侵袭能力、上皮-间充质转化(EMT)及PI3K/Akt信号通路的影响。检测PTTG3P与其亲本基因PTTG1在CC组织中的相关性及对PTTG1表达的影响。采用Pearson相关性分析研究CC组织中PTTG1与PTTG3P的相关性。结果PTTG3P mRNA在CC中的相对表达量为(4.930±1.724)，在NCT中为(1.270±0.629)，比较差异有统计学意义(t＝6.125，P<0.01)。PTTG3P shRNA可显著抑制CC细胞的增殖能力及侵袭能力(增殖48 h：1.895±0.302比1.442±0.261, t＝5.190;增殖72 h: 2.615±0.338比1.825±0.293, t＝5.657;侵袭：穿膜细胞数194±59比133±48，t＝5.387，P<0.05)，降低Snail、Slug、p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(Snail：1.16±0.22比0.53±0.17，t＝4.532；Slug：1.02±0.19比0.74±0.13，t＝2.432；p-Akt：0.35±0.12比0.16±0.07，t＝2.735；p-PI3K：0.19±0.08比0.07±0.02，t＝2.910)，增加E-cadherin蛋白的表达(0.76±0.15比1.35±0.30，t＝3.518，P<0.05)。PTTG1 mRNA的相对表达量在CC中为(5.810±2.206)，在NCT中为(1.970±0.693)，比较差异有统计学意义(t＝6.043，P<0.01)。在CC中PTTG1 mRNA与PTTG3P mRNA相对表达量显著正相关(r2＝0.745，P<0.01)。PTTG3P shRNA可显著降低PTTG1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。结论PTTG3P在CC患者原发灶中上调，可促进CC细胞的增殖及侵袭。其机制可能与上调PTTG1、激活PI3K/Akt信号通路，进而促进EMT过程有关。

简介：摘要目的探讨肿瘤抑制因子微小RNA(miRNA，miR)-149-5p对肾癌细胞转移潜能的影响及机制。方法GRC-1细胞分成miR-149-5p组(转染miR-149-5p mimics)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-149-5p＋丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1-SRPK1)、miR-149-5p＋vector组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p水平，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力变化，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平。利用在线靶基因预测软件发现SRPK1可能是miR-149-5p的靶基因，双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。应用SPSS 21.0统计软件分析。结果miR-149-5p组的GRC-1细胞中miR-149-5p(2.69±0.27比1.01±0.08)和E-cadherin(0.81±0.09比0.42±0.05)水平显著高于miR-NC组，侵袭数目[(70.81±6.35)个比(110.64±9.67)个] 、迁移数目[(108.46±9.27)个比(162.76±12.71)个]、N-cadherin(0.46±0.05比0.79±0.11)和SRPK1(0.45±0.06比0.92±0.08)蛋白水平显著低于miR-NC组，差异均有统计学意义(FmiR-149-5p＝95.385，F侵袭数目＝20.216，F迁移数目＝22.010，FN-cadherin＝15.100，FE-cadherin＝31.331，FSRPK1＝31.785，P<0.05)。共转染SRPK1野生型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.37±0.04比1.00±0.11)显著低于miR-NC组，差异有统计学意义(t＝16.150，P<0.05)。共转染SRPK1突变型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.99±0.10比1.00±0.09)与miR-NC组比较差异无统计学意义(t＝0.220，P>0.05)。miR-149-5p＋SRPK1组的GRC-1细胞中E-cadherin(0.45±0.04比0.80±0.08)水平显著低于miR-149-5p＋vector组，侵袭数目[(99.51±7.48)个比(71.84±5.37)个]、迁移数目[(145.06±11.14)个比(107.63±10.20)个]、N-cadherin(0.86±0.10比0.47±0.04)和SRPK1(0.89±0.06比0.50±0.07)蛋白水平显著高于miR-149-5p＋vector组，差异均有统计学意义(tSRPK1＝7.327，t侵袭数目＝5.205，t迁移数目＝4.292，tN-cadherin＝6.272，tE-cadherin＝6.778，P<0.05)。结论肿瘤抑制因子miR-149-5p靶向负调控SRPK1表达降低肾癌细胞的迁移和侵袭能力。

简介：摘要目的研究假性蛋白激酶3（TRIB3）在结肠息肉癌变过程中的表达情况及其临床意义。方法选取海南省人民医院2017年1月至2019年1月经手术切除的85例结肠息肉标本（息肉组）、87例结肠癌组织标本（结肠癌组），以同期102份正常结肠组织作为对照（正常组），采用免疫组织化学法测定三组中TRIB3的表达水平，分析TRIB3在结肠息肉癌变过程中表达水平及其与临床病理参数的关系。结果TRIB3在正常组、息肉组、结肠癌组表达阳性率依次升高，分别为15.69%（16/102）、60.00%（51/85）、95.74%（90/94），三组间比较差异有统计学意义（χ2=128.010，P<0.001）。TRIB3在结肠息肉组织中的表达水平与病理分型有关（χ2=12.650，P=0.013），在结肠癌组织中的表达水平与临床分期、淋巴转移、远处转移、分化程度有关（均P<0.05）。结论TRIB3在结肠息肉癌变进程中表达逐渐上调，其与结肠癌的临床分期、转移情况、分化程度有关，有望成为监测结肠息肉癌变的临床指标。

简介：摘要目的探讨治疗性亚低温（therapeutic hypothermia, TH）对猪心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation, CPR）后心肌钙调蛋白激酶Ⅱ（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ, CaMK Ⅱ）和细胞自噬的影响。方法国产健康雄性白猪20头，体质量33~40 kg，采用随机数字表法分为3组：假手术（sham, S）组（n=4）、CPR组（n=8）与TH组（n=8）。S组仅进行动物准备，不经历心脏骤停/复苏过程。CPR组和TH组采用电刺激诱发室颤8 min，然后心肺复苏5 min，制备猪心脏骤停复苏模型。实验猪复苏成功的标准为室上性自主心律伴平均动脉压>50 mmHg持续5 min以上。复苏成功后，TH组经体表冰毯将体温降至33 ℃，并维持至复苏后24 h，再以1 ℃/h复温5 h；S组和CPR组则利用冰毯仪全程维持正常体温。于复苏后6、12、24和30 h时，利用PiCCO法测定每搏输出量（stroke volume, SV）和全心射血分数（global ejection fraction, GEF），同时采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白（cardiac troponin I, cTnI）的浓度、全自动生化分析仪检测血清肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB, CK-MB）的活性。于复苏后30 h处死动物，取左室心尖部心肌组织，采用Western blot法检测CaMK Ⅱ、微管相关轻链蛋白3 Ⅱ（microtubule-associated protein light chain 3, LC3 Ⅱ）和p62的蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析和Bonferroni事后检验。结果与S组相比，CPR组和TH组动物出现复苏后心功能障碍及心肌损伤，表现为SV和GEF值降低、血清cTnI浓度增加及CK-MB活性升高（均P<0.05）。但与CPR组相比，TH组动物在复苏6 h后SV和GEF值升高，在复苏12 h后血清cTnI浓度减少及CK-MB活性降低，组间比较差异有统计学意义[SV (mL)：6 h为25.0±6.9和31.9±3.3，12 h为26.7±5.1和34.6±3.7，24 h为28.8±3.3和35.7±3.2，30 h为29.2±5.2和36.7±3.3；GEF (%)：6 h为17.1±2.7和19.9±1.8，12 h为18.7±1.9和21.6±1.8，24 h为19.3±2.3和23.0±2.4，30 h为21.0±1.7和23.7±1.7；cTnI (pg/mL)：12 h为564±51和466±56，24 h为534±38和427±60，30 h为476±55和375±46；CK-MB (U/L)：12 h为803±164和652±76，24 h为693±96和557±54，30 h为633±91和480±77；均P<0.05]。组织检测分析显示，与S组相比，CPR组和TH组动物在复苏后心肌CaMK Ⅱ和LC3 Ⅱ表达增加、p62表达减少（均P<0.05）。但与CPR组相比，TH组动物在复苏后心肌CaMK Ⅱ和LC3 Ⅱ表达减少、p62表达增加（CaMK Ⅱ：0.73±0.06和0.58±0.05；LC3 Ⅱ：0.69±0.09和0.50±0.07；p62：0.40±0.07和0.68±0.14；均P<0.05）。结论TH减轻复苏后心功能障碍与心肌损伤的机制可能与抑制心肌CaMK Ⅱ表达及细胞自噬等有关。

简介：摘要目的探讨瘦素受体（OBR）和磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学法检测山东第一医科大学附属省立医院2010年至2015年90例DLBCL和20例反应性淋巴组织增生（RLH）组织中OBR和p-AKT的表达；应用细胞增殖实验（MTS）检测瘦素对DLBCL细胞株SUDHL4和SUDHL5增殖能力的影响；应用蛋白质印迹法检测瘦素培养后SUDHL4和SUDHL5细胞p-AKT的表达情况。结果OBR和p-AKT在DLBCL中的高表达率为47.7%（43/90）、27.7%（25/90），在20例RLH中均为低表达，OBR和p-AKT在DLBCL和RLH中的表达差异均有统计学意义（P<0.01，P=0.027）。OBR和p-AKT的表达与患者年龄、性别、结外浸润、临床分期、乳酸脱氢酶（LDH）水平、B症状及国际预后指数（IPI）评分均无关（均P>0.05）。OBR和p-AKT在DLBCL中的表达呈正相关（r=0.532，P<0.05）。瘦素可以提高SUDHL4和SUDHL5细胞增殖能力，促进细胞内p-AKT的表达。结论瘦素和OBR可通过激活PI3K-AKT途径促进DLBCL细胞的增殖，参与DLBCL的发生发展。

简介：摘要目的检测胶质瘤中死亡相关蛋白激酶1基因(Dapk1)甲基化并探讨其临床意义。方法分别应用甲基特异性聚合酶链反应(PCR)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测2015年1月至2017年1月南华大学附属第一医院和南华大学附属第二医院诊治的70例胶质瘤患者(GLA组)、40例颅脑良性疾病患者(CON组)、U251和BT325胶质瘤细胞(购于中国科学院细胞库)Dapk1基因甲基化、mRNA和蛋白质比较，采用χ2检验比较胶质瘤患者不同临床病理中Dapk1基因甲基化的差异，Kaplan-Meier法对胶质瘤患者Dapk1基因甲基化和未甲基化患者生存分析。结果GLA组胶质瘤患者Dapk1基因甲基化率显著高于CON组颅脑良性疾病患者(65.7%比2.5%，χ2＝39.023，P<0.05)。U251和BT325胶质瘤细胞中Dapk1基因处于甲基化状态。GLA组胶质瘤患者、U251和BT325胶质瘤细胞中Dapk1基因mRNA和蛋白表达均显著低于CON组颅脑良性疾病患者(mRNA相对表达量分别为0.34±0.05、0.35±0.06、0.33±0.05、0.65±0.08，蛋白质相对表达量分别为0.22±0.04、0.23±0.05、0.21±0.04、0.57±0.07，F＝67.125、52.198，P<0.01)。GLA组胶质瘤患者Dapk1基因甲基化率在肿瘤最大径和世界卫生组织(WHO)分级方面的差异均有统计学意义(甲基化率分别为78.9%、80.0%，χ2＝5.240、7.039，P值均<0.05)，肿瘤最大径≥5 cm和WHO Ⅲ＋Ⅳ级患者Dapk1基因甲基化率显著高于肿瘤最大径<5 cm和WHO Ⅰ＋Ⅱ级级患者。Dapk1基因甲基化患者中位生存期显著低于未甲基化患者[(13.8±1.1)个月比(16.3±1.5)个月，Logrank＝5.107，P<0.05]。结论Dapk1基因高甲基化与胶质瘤发病机制有关，有助于胶质瘤病情及预后评估。

简介：摘要目的探讨葛根总黄酮（PRF）诱导的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）转导通路相关信号分子的关系及意义。方法将NB4细胞分为对照组[以0.025%二甲基亚砜（DMSO）代替PRF]和10、30、50 μg/ml PRF组，作用24、48、72 h后用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖抑制率，作用48 h后用激光共聚焦显微镜观察细胞核形态学变化。将NB4细胞分为对照组（加入0.025% DMSO）和10、30、50 μg/ml PRF联合或不联合10 μmol/L c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂（SP600125）组，作用48 h，蛋白质印迹法检测MAPK通路相关蛋白JNK、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、细胞外信号调节激酶（ERK）和p38 MAPK表达变化。结果10、30、50 μg/ml PRF作用24、48、72 h后NB4细胞增殖受到抑制，呈浓度-时间依赖性（均P<0.05），24、48、72 h半数抑制浓度（IC 50）分别为（40.03±2.23）μg/ml、（22.92±1.72）μg/ml、（17.99±1.48）μg/ml。激光共聚焦显微镜观察到NB4细胞经PRF处理后呈现明显凋亡特征。10 μmol/L SP600125与不同浓度PRF共培养NB4细胞48 h后，NB4细胞JNK1表达受抑（P<0.05），JNK2/3、p38 MAPK表达有所下降，但差异均无统计学意义（均P>0.05）；ERK1、ERK2在单药组表达逐渐上调，联合用药组则表达递减，TNF-α在50 μg/ml PRF+SP600125组较50 μg/ml PRF单药组表达下调，10、30 μg/ml PRF+SP600125组则较10、30 μg/ml PRF单药组表达上调。结论10~50 μg/ml PRF可能通过TNF-α激活MAPK信号途径，JNK、ERK1/2、p38 MAPK三者相互作用、相互影响，激活促凋亡相关蛋白，诱导NB4细胞凋亡。

简介：无

简介：摘要目的观察长链非编码RNA(lncRNA) HOX转录物反义RNA(HOTAIR)通过磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用体外培养人食管鳞癌细胞株(购自中国细胞资源种子库)，分别用磷酸盐缓冲液(PBS)和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒或CRISPR/Cas9 KO HOTAIR病毒＋PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1处理，得到对照组(NC组)，CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组和CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1组。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA HOTAIR和Akt mRNA水平；蛋白质印迹法(Western blot)法测定磷酸化Akt(p-Akt)、t-Akt和Tubulin蛋白的表达量；噻唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖情况，最后通过Tanswell测各组细胞迁移。采用双尾t检验。结果通过RT-PCR检测IncRNA HOTAIR在正常食管组织组(1.001±0.115)和食管鳞癌组织组(4.167±0.491)，两者差异有统计学意义(t＝8.654，P<0.01)；与NC组(1.001±0.144)比较，CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.051±0.014)的lncRNA HOTAIR表达水平显著降低(t＝6.554，P<0.01)，差异有统计学意义；与NC组(1.033±0.060)比较，CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)的p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著降低(t＝10.054，P<0.01)，差异有统计学意义，而CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1组(0.400±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.220±0.058)比较，p-Akt或p-Akt/t-Akt值显著升高(t＝1.412，P<0.05)，差异有统计学意义；通过敲除HOTAIR基因对的Akt mRNA检测：NC组(1.033±0.044)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)比较，两者差异无统计学意义(t＝0.936，P>0.05)；CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.936±0.064)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR ＋IGF-1组(1.036±0.102)比较，两者差异无统计学意义；通过MTT检测细胞的增殖，在72 h比较细胞增殖，NC组(6.700±0.289)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)比较，两者差异有统计学意义(t＝0.458，P<0.01)；CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(2.517±0.306)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1组(4.200±0.265)比较，两者差异有统计学意义(t＝0.966，P<0.05)。通过Transwell检测细胞的迁移，NC组(1.000±0.029)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)比较，两者差异有统计学意义(t＝14.798，P<0.01)；CRISPR/Cas9 KO HOTAIR组(0.330±0.049)与CRISPR/Cas9 KO HOTAIR＋IGF-1(0.608±0.068)组比较，两者差异有统计学意义(t＝0.876，P<0.05)。结论敲除HOTAIR基因(KO HOTAIR)通过降低p-Akt水平，降低p-Akt/t-Akt值而抑制PI3K/Akt信号通路，降低细胞增殖，抑制细胞迁移。而PI3K/Akt的激活剂IGF-1可以阻止HOTAIR基因敲除产生的影响。

简介：摘要将60只雄性SD大鼠分为对照组、急性坏死性胰腺炎(ANP)组、p38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580干预组。结果显示，干预组大鼠胰腺病理损伤较ANP组显著减轻，p38MAPKmRNA及蛋白表达显著下调，TNF-α表达也显著下调。表明p38MAPK在ANP中发挥重要作用，抑制其表达可有效改善ANP的严重程度。

简介：摘要Rho相关蛋白激酶(ROCK)是Ras同源基因家族成员A(RhoA)的下游靶标，参与多种细胞生物学过程。RhoA/ROCK在骨关节炎进展机制中发挥重要作用。目前已有研究开发靶向抑制RhoA/ROCK的药物用于治疗骨关节炎，发现对关节软骨具有保护作用。本文通过对RhoA/ROCK在骨关节炎发病机制中的作用和治疗骨关节炎的研究进展进行综述。

简介：摘要目的探究死亡相关蛋白激酶3(death-associated protein kinases 3，DAPK3)缺乏是否通过抑制内质网应激而减轻血管钙化。方法采用前瞻性队列研究方法，通过体外细胞培养实验进行观察分析。人主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)采用F10K Kaighn′s改良培养基培养，根据培养基中是否添加β磷酸甘油(10 mmol/L)分为钙化组和非钙化组。钙化组细胞和非钙化组细胞又分别分为DAPK3抑制组及其对照组、内质网应激抑制组及其对照组、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)激活组及其对照组、DAPK3抑制＋腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein Kinase，AMPK)抑制以及空白对照组。测定各组的VSMC中DAPK3 mRNA以及蛋白浓度、钙含量、碱性磷酸酶、VSMC分化标志基因(SM22α、α-SMA)蛋白浓度、成骨分化转录因子[Runχ2、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)]蛋白表达浓度、内质网应激标志蛋白(AFT4、GRP78、GRP94以及CHOP)表达水平以及p-PAMK蛋白表达。结果钙化细胞DAPK3 mRNA(第14天达最高值15.24±0.72)以及蛋白(第14天达最高值11.31±0.38)显著高于非钙化细胞(5.63±0.62、2.59±0.33)，差异有统计学意义(P<0.001)。钙化细胞中，DAPK3缺乏组钙含量(86.54±8.21) mmol/g较对照组(194.63±8.54) mmol/g显著降低(t＝22.35，P<0.001)、碱性磷酸酶活性显著降低[(96.27±10.28) IU/g蛋白与(224.67±10.94) mmol/g蛋白，t＝20.951，P<0.001]、VSMC分化标志基因(SM22α、α-SMA)蛋白的表达显著上升[SM22α：(0.82±0.14)与(0.44±0.13)，t＝4.872，P＝0.001；α-SMA：(0.95±0.18)与(0.56±0.13)，t＝4.303，P＝0.002]、而骨分化转录因子(Runχ2、BMP2)蛋白表达显著降低[Runχ2：(1.12±0.28)与(2.21±0.35)，t＝5.957，P<0.001；BMP2：(0.82±0.12)与(1.26±0.16)，t＝5.39，P<0.001]、MAPK水平上调(DAPK3抑制组钙化细胞0.74±0.12、非钙化细胞1.04±0.14高于对照组钙化细胞0.44±0.10、非钙化细胞0.78±0.12，t＝4.704，P＝0.001；t＝3.454，P＝0.006)；抑制ESR钙化细胞的钙含量显著降低(细胞经AMPK通路抑制后转染shRNA组150.21±11.98、细胞转染shRNA组83.21±12.12低于转染空白对照组164.82±12.34，P<0.001)；碱性磷酸酶活性显著降低(细胞经MAPK通路抑制后转染shRNA组226.54±16.57、细胞转染shRNA组112.34±15.96低于转染空白对照组242.32±16.32，P<0.001)；激活MAPK钙化细胞的钙含量显著降低(P<0.001)、碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.001)。结论DAPK3缺乏通过AMPK信号通路抑制内质网应激达到减缓VSMC钙化的作用。