简介：原核生物与真核生物的有关知识属高中生物教材中的基本知识点，相关考题也属常见题型，但由于本部分知识较零碎，且容易混淆而成为同学们复习时的一个难点．本文就原核细胞与真核细胞、原核生物与真核生物及相关易混淆知识作归纳总结，供同学们复习参考．

简介：真核生物与原核生物在结构和功能上既有相似，又有不同．对其掌握得好坏，直接影响相关知识的迁移与融会贯通，是同学们应当注意辨析的重点和难点之一．下面笔者就对此问题加以辨析，以帮助同学们理饵．

简介：

简介：CRISPR/CAS系统,原核生物,尤其是细菌的免疫系统,在抵抗外源性遗传物质如噬菌体病毒和外源质粒的入侵中起着一定的作用。也为其提供了后天免疫的功能,类似于哺乳动物的二次免疫。当细菌被病毒或外源性质粒入侵时,它们产生"记忆",从而抵御反复入侵。本文就CRISPR/Cas免疫方面的功能与进展进行了大致的概括。

简介：摘要在辅助生殖工作中我们经常遇到卵子没有出现双原核但有2个极体，称为零原核，这可能是由于原核出现提前或者延后而导致未能在特定的原核观察时间点进行受精情况判断。由于目前零原核来源胚胎的临床应用仍存在困惑与争议，大部分中心往往选择废弃，这在一定程度上造成胚胎浪费，从而降低卵子的利用率。近年来，零原核来源胚胎越来越受到辅助生殖技术专家们的关注并取得一定的研究进展。本文就零原核来源胚胎的发生机制、影响因素、遗传属性、发育潜能、临床结局等方面的研究进展做一综述，旨在为零原核来源胚胎的合理应用提供参考。

简介：目的探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性。方法首先,比较了两种流行的商业化载体：开放式拉长麦管（openpulledstraw,OPS）和冷冻帽（cryotop）开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果。其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体（cryotip）开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存。之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析。结果OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性（P〉0.05）,但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性（P〉0.05）,数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组。结论OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的。

简介：传统认为只有真核生物才有蛋白质糖基化修饰现象，虽然在原核生物细胞中发现糖蛋白的存在已经有数十年，但是没有引起我们足够的重视。最近，在细菌中发现了蛋白质的糖基化修饰系统，最具代表性的是空肠弯曲弧菌的Ⅳ-糖基化修饰系统、脑膜炎奈瑟球菌和绿脓杆菌的0-糖基化修饰系统。这些糖基化修饰系统已成功地转移到大肠杆菌中，并且独立发挥其糖基化修饰作用。寡糖转移酶在修饰过程中起关键作用，且寡糖转移酶对糖底物的特异性要求非常低，这使得按照我们的需求来“定制糖蛋白”成为可能，并标志着“原核生物糖基工程”的到来，这将为糖结合疫苗的发展提供良好的契机。

简介：为了探索梨树植物的开花调控机制,本研究以砂梨（PyruspyrifoliaNakai）叶片为材料,采用同源序列克隆法,进行了开花调控相关基因CONSTANS的克隆,命名为PyCO,GenBank登录号为KF246572。序列分析表明,该基因包含一个1023bp的开放阅读框,编码340个氨基酸,推测蛋白质分子量为37.81kD,等电点为5.95。PyCO蛋白具有典型的植物CO家族的结构特征,含有2个高度保守的B-box及CCT结构域。进化树分析表明,该氨基酸序列与苹果的同源性接近93%,与碧桃、可可树、草莓等其他高等植物的CO类蛋白同源性也在70%以上。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白,分子量约为58.5kD,为进一步探索梨树开花调控机理奠定了基础。

简介：人工合成AalT的成熟基因，连接到pET32载体并转化大肠杆菌，IPTG诱导表达，纯化重组AalT蛋白并免疫小鼠，经蛋白质一G柱对抗血清进行纯化．研究结果表明，纯化得到了AalT蛋白经免疫小鼠和纯化抗血清得到了特异性强的AalT抗体蛋白．

简介：摘要： 目的 获得人载脂蛋白 A-I (apoA-I)重组蛋白原核表达的最佳条件。方法 研究由诱导温度、 IPTG终浓度、 IPTG诱导时间等对 apoA-I重组蛋白表达量的影响。 结果 SDS-PAGE验证各不同条件下获得目的蛋白条带为 29kd;结果显示重组大肠杆菌菌株的最佳条件为 32℃、 IPTG诱导浓度为 1.0mmol/L以及 IPTG诱导时间为 3h。结论 成功在大肠杆菌中诱导表达出来 apoA-I，并筛选出 apoA-I原核表达的最优条件。

简介：摘要目的获得人载脂蛋白A-I(apoA-I)重组蛋白原核表达的最佳条件。方法研究由诱导温度、IPTG终浓度、IPTG诱导时间等对apoA-I重组蛋白表达量的影响。结果SDS-PAGE验证各不同条件下获得目的蛋白条带为29kd;结果显示重组大肠杆菌菌株的最佳条件为32℃、IPTG诱导浓度为1.0mmol/L以及IPTG诱导时间为3h。结论成功在大肠杆菌中诱导表达出来apoA-I，并筛选出apoA-I原核表达的最优条件。

简介：为了进一步明确苹果茎痘病毒（Applestempittingvirus,ASPV）的分子变异及株系分化,制备相应特异性抗血清。本研究以库尔勒地区种植的感染ASPV的鸭梨（Y）枝条韧皮部为试材,采用RT-PCR技术扩增ASPVCP基因,克隆、测序,获得了鸭梨分离物外壳蛋白（ASVPCP-Y）基因,将该CP基因连接到表达载体PET-28a上,转化到大肠杆菌BL21（DE3）,1mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析。研究结果表明,获得的鸭梨ASPVCP基因全长1194bp,推测编码397个氨基酸,与已报道的ASPV分离物的氨基酸序列同源性为70%左右。进化分析结果显示,ASPVCP基因的分离物可聚为三个类群：第一类群的寄主为苹果,第二类群的寄主为梨（除了NC_003462,苹果）,ASPVCP-Y归入第三类群。CP基因在大肠杆菌中诱导表达,其融合蛋白分子量约为42kD。克隆的鸭梨ASPVCP基因及构建的原核表达载体为制备ASPV重组CP基因多克隆抗体及ASPV的分子生物学的进一步研究奠定了基础。

简介：摘要目的克隆编码人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组原核表达质粒,为进一步研究其功能提供依据。方法PCR扩增人GM-CSF基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体PET32a+获得重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,PCR和Western-blot鉴定表达产物。结果重组质粒经PCR、限制性内切酶及DNA测序证实构建成功;且诱导后能在大肠杆菌中稳定表达PET-GMCSF嵌合蛋白。结论成功构建并表达了PET-GMCSF蛋白,为进一步研究GM-CSF功能奠定基础。

简介：丝氨酸乙酰转移酶(serineacetyltransferase,SAT)是甲硫氨酸和半胱氨酸合成途径的关键酶,利用该基因提高作物中甲硫氨酸水平具有广阔的应用前景。为了研究拟南芥SAT1(ArabidopsisthalianaSAT1)基因的蛋白表达情况及相关功能,构建了带有His标签的AtSAT1基因原核表达载体pET-30b(+)-SAT1-His(6)。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化获得了抗原蛋白SAT1-His(6)。该抗原蛋白经免疫兔子,成功制备了具有较高特异性和灵敏性的SAT1蛋白多克隆抗体。Westernblotting表明,该抗体可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量,为后期对该基因开展进一步深入研究具有重要意义。

简介：　　　　图188ArgIL-2基因PCR产物及pGEX4T-2/88ArgIL-2重组质粒的酶切鉴定（略）,经IPTG诱导在大肠杆菌DH5α中表达88ArgIL-2与GST的融合蛋白,在此基础上对变构IL-2（88ArgIL-2）融合蛋白进行了抗原性和生物学活性测定

简介：目的：构建蜱传脑炎病毒（TBEV）结构蛋白E的原核表达载体，表达重组蛋白。方法：PCR扩增E蛋白全长基因片段，插入原核表达载体pET-32a并转化大肠杆菌进行诱导表达，镍柱纯化、复性。结果：E蛋白在大肠杆菌中获得表达，表达量达60mg／L；重组E蛋白能与人抗TBEV多克隆抗体产生特异反应；用重组E抗原免疫家兔后，能检测到较高的抗体水平。结论：原核表达的E抗原蛋白具有抗体结合活性，可用于制备ELISA诊断试剂。

简介：目的：构建人乳头瘤病毒16L1的原核表达质粒，为下一步探讨蛋白的表达以及蛋白的功能研究作准备。方法：以临床HPV16阳性标本为模板，PCR扩增L1的片段，L1片段经EcoRI和SalⅠ双酶切后，插入载体pGEX4T-1，转化JM109感受态细胞，平板筛选获得pGEX4T-1／HPVL1的阳性质粒。通过酶切、测序验证质粒的正确性。结果：构建了原核表达质粒pGEX4T-1／HPV16L1，并通过酶切、测序等方法验证其完全正确。结论：成功构建的pGEX4T-1／HPVL1为今后的蛋白的表达和功能研究打好了坚实的基础，为HPV16的疫苗研究提供了有益的支持。

简介：试验旨在构建表达鸡新城疫病毒（NDV）HN基因的大肠杆菌原核表达栽体。以pMD18-T—HN为模板，通过设计的特异性引物PCR扩增出（NDV）HN基因片段，连接至pMD-18T载体，通过双酶切定向插入原核表达载体pET32a中，转化到感受态细胞Rosetta中，获得表达HN基因的阳性亚克隆重组质粒，用lmmol／LIPTG诱导表达，并对表达产物进行鉴定。SDS—PAGE电泳结果显示，HN基因片段在大肠杆菌Rosetta细胞中实现融合表达，表达产物大小约为90KD左右，western—blotting试验证实其有较好的反应原性。本研究为进一步研究HN蛋白功能结构域的免疫原性和研制鸡新城疫HN基因工程疫苗奠定了基础。

简介：目的:对临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌所产L1型金属β-内酰胺酶基因进行原核表达,并检测多种β-内酰胺类抗生素对重组L1酶的稳定性.方法:PCR扩增L1酶的编码基因,将其亚克隆入pUCm-T载体,测序后将L1基因克隆至表达载体pET-4la(+)后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,分光光度计测定多种β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶的稳定性.结果:本实验中的L1酶与国外同类酶的氨基酸同源性为92.44%.重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近,氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定.结论:对L1型金属β内酰胺酶的克隆测序及成功表达为进一步研究该酶的分子生物学特性奠定了基础.抗生素对L1酶的稳定性研究为指导临床合理应用抗生素提供了科学的理论依据.

简介：本研究获取主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类分子的轻链部分,即β2-微球蛋白（β2m）以制备MHCⅠ类分子-肽四聚体.根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法从人白细胞中克隆β2m的基因,并构建β2m的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达.结果显示：构建的编码成熟β2m的pET-β2m可在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达β2m,表达量占菌体总蛋白的32%,β2m以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以SephacrylS-200HR（S-200）柱层析纯化,纯度可达95%以上,纯化产物采用稀释法复性.Westernblot分析表明,该蛋白具有与抗人天然β2m抗体反应的特性.结论：获得了高效表达人β2m的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的β2m包涵体纯化、复性方法,为制备MHCⅠ类分子-肽四聚体奠定了基础.