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  • 简介:目的建立免疫捕获精子的方法,比较4种不同抗体制备的免疫捕获模拟检材中精子的效果,探索其分离混合斑的可行性以及优缺点。方法分别用4种抗体制备免疫,对不同比例混合细胞悬液(上皮细胞与精子)中的精子和放置不同时间的纯精斑进行提取,将吸附到的细胞进行DNA-STR分型,对比4种的差异。结果4种都能特异性地将精子分离出来,分型结果与男性供者已知分型一致。经X2检验,当上皮细胞与精子的比例大于100:1或小于10:1时,P〉0.05,捕获结果没有明显差异;当其比例在10:1时,P〈0.05,抗PH20抗体的灵敏度高于其余三种抗体。捕获放置1天和15天精斑的成功率结果差别P〉0.05,没有明显差异。捕获放置30天的精斑结果差别P〈0.05,抗JLP抗体有明显优势,而抗ADAM2抗体效果最差。结论4种不同抗体制备的免疫在捕获精子的灵敏度上有差异,可以根据需要选择抗体制备免疫,有望实现对不同混合斑的分离

  • 标签: 法医物证学 STR 免疫磁珠 混合斑 精子表面抗原
  • 简介:目的该实验比较了CD133免疫法及羟乙基淀粉法分离脐血单个核细胞(MNCs)的特点,探讨一种相对较好的MNCs分离方法。方法取2007年10月至2008年3月新疆医科大学第一附属医院足月妊娠健康产妇的脐血15份,每份脐血分别用羟乙基淀粉沉淀法、CD133免疫法处理。分离后计数并在倒置显微镜下观察原代细胞的生长情况及其形态特征,原代第30天通过流式细胞检测CD34阳性率。结果羟乙基淀粉沉淀法、CD133免疫组得到的MNCs数量分别为(15.23±4.30)×10^6/mL,(0.066±0.027)×10^6/mL(P〈0.05)。羟乙基淀粉沉淀法所得细胞大多悬浮生长,传代后生长缓慢;CD133免疫法的细胞生长状态良好,其CD34阳性率分别为10.1%、0.5%。结论羟乙基淀粉沉淀法是一种高效的脐血细胞分离方法,但细胞生长状态欠佳;而CD133免疫法所获细胞纯度较高,可根据不同要求选用相应分离法。

  • 标签: 单个核细胞 分离 脐血
  • 简介:目的结合免疫分离技术和流式细胞术两种方法,对大鼠外周血突变型红细胞进行富集和检测,优化大鼠外周血Pig-a基因突变试验方法。方法用20、40和80mg/(kg·bw)剂量的N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)连续3d给予SD大鼠,在染毒前、染毒后第7、14和28天分别采集大鼠外周血,经免疫磁性分离柱富集RETCD59-和RBCCD59-,用流式细胞术分别对免疫分离柱前和柱后的外周血红细胞进行计数。结果与对照组相比,ENU各剂量组的RETCD59-和RBCCD59-发生率均显著升高(P<0.05);采用免疫分离技术后,可以在3min内完成一个样品的Pig-a基因突变检测,分析的RETCD59-或RBCCD59-细胞数量分别最高可达2×104个或9×104个。结论本研究联合运用免疫分离术和流式细胞术,建立并优化了大鼠体内Pig-a基因突变试验方法,实现了高通量检测,提高了试验的准确性和效率。

  • 标签: Pig-a基因突变 免疫磁珠分离 流式细胞术 N-乙基-N-亚硝基脲 大鼠 外周血红细胞
  • 简介:目的建立泰泽氏病原体(Ty)纯化方法,获得纯的菌体供抗原研究,为ELISA诊断抗原的制备提供依据;并尝试建立Ty隐性感染血清学抗原检查方法。方法选择特异性抗体包被,从感染大鼠肝脏中富集和纯化Ty;用SDS-PAGE和Westernblot技术考察纯化Ty的蛋白和抗原图谱;同时用免疫分离技术(IMS)直接检查隐性感染大鼠肠道上皮细胞内的Ty。结果用辛酸-硫酸铵纯化的Ty单克隆抗体M5以0.5μg/10^7beads以上浓度包被抗IgG抗体预结合的4h,可最大效率地富集Ty;分离反应进行1h,敏感性达到1矿菌体/mL;吖啶黄染色镜检法可以直接、快速地观察到结合于上的细菌;抗原分析表明,IMS较好地去除了肝组织和真核细胞成分,纯化的TvRJ株具有3个免疫优势的抗原成分,相对分子质量(Mr)分别为160×10^3、116×10^3、55×10^3;此外,IMS法可直接从隐性感染大鼠盲肠上皮细胞中检测到少量寄生的Ty。结论用IMS技术可有效地富集和纯化Ty,并可以作为Ty隐性感染血清学抗原检查的候选方法。

  • 标签: 免疫磁珠 泰泽氏病原体 血清学试验
  • 简介:目的:探索应用免疫法富集母体外周血DNA并预测其胎儿RHD血型。方法:采集96例来自武汉大学中南医院产前诊断确诊为RHD阴性孕妇外周血,使用免疫法和血液DNA提取试剂盒(QIAgeneDNA法)抽提母体外周血DNA用以提取胎儿DNA。通过测定母体血浆中的SRY和STR来证实是否获得胎儿DNA,同时使用荧光定量PCR(RQ-PCR)扩增胎儿RHD基因外显子7,预测胎儿RHD血型。结果:通过免疫法,胎儿DNA的总提取量提高了1.8倍。配对四格表2检验结果显示免疫法在准确度方面与QIAgeneDNA法相较,妊娠早期(≤14周)2种方法差异有统计学意义(P〈0.05),而妊娠中晚期(〉14周)2种方法差异无统计学意义。另外,使用免疫法提取DNA预测胎儿RHD血型时,有86例结果与胎儿RHD血清学方法鉴定一致,使胎儿RHD血型预测的准确率高达89.6%。结论:使用免疫法提取胎儿DNA不仅能够改善胎儿DNA的总提取量,同时还可以提高妊娠早期胎儿RHD血型预测的准确率,为RHD血型不合导致的新生儿溶血病的早期诊断和治疗提供更好的试验基础。

  • 标签: 免疫磁珠法 母体外周血DNA RHD血型
  • 简介:建立免疫分离(ImmunomagneticSeparation,简称“IMS”)联合荧光定量聚合酶链式反应PCR(PolymeraseChainReaction,简称“PCR”)快速检测阪崎肠杆菌的方法。制备以生物素介导偶联的链霉亲和素免疫,优化偶联和捕获条件。合成阪崎肠杆菌ITS(InternalTranscribedSpacer简称“ITS”)靶基因序列的引物和探针,同时构建内参质粒(InternalAmplificationControl,简称“IAC”),建立能够实时监控反应过程的荧光定量PCR反应体系。在1mL体系中添加粒径为80nm的链霉亲和素免疫0.3mg,孵育30min,可获得80.5%以上的捕获效率。建立的基于内参的荧光PCR体系针对质粒检测时,Ct值(Cyclethreshold,简称“Ct值”)与模板拷贝数有着良好的线性关系(R2=0.998),IMS-PCR检测体系对阪崎肠杆菌菌液的检测灵敏度为33.3CFU/mL,可在3h内完成。针对4株阪崎肠杆菌标准菌株和5株非阪崎肠杆菌菌株的检测也显示出较好的特异性和稳定性,人工模拟样品的检测结果与采用国标法检测的结果完全一致,可用于快速检测样品中的阪崎肠杆菌和疾病预防。

  • 标签: 免疫磁珠 荧光定量PCR 内参 阪崎肠杆菌 快速检测
  • 简介:目的研究DNAIQ法结合MaxwellTM16自动对接触DNA提取的应用价值。方法151份案件接触DNA检材95℃裂解后,采用DNAIQ法结合MaxwellTM16自动提取DNA,然后进行DNA定量和STR分型检测,统计各种类型的接触DNA含量I、PCCT值和STR分型成功率。结果151份案件接触DNA检材中,除果核平均DNA获得量为9.51ng以外,其它接触检材的平均DNA获得量均大于10ng,烟蒂检验成功率最高为93%,果核检验成功率较低,为60%。所有DNA样品的IPCCT值均在27左右,纯度高。结论大部分接触DNA检材采用DNAIQ法结合MaxwellTM16自动可提取到足以进行STR分型的DNA。

  • 标签: 法医物证学 接触DNA DNAIQ DNA定量 STR分型
  • 简介:摘要目的比较浓缩法与酶联免疫法(ELISA)检测HBsAg灵敏度和阳性检出率,选用较好的方法用于低浓HBsAg的测定。方法ELISA检测HBsAg为强阳性的血清标本40份,混合为HBsAg强阳性混合血清,用化学发光法检测HBsAg全阴性血清稀释成46例浓度不同的HBsAg阳性血清,然后分别用浓缩法、酶联免疫法和化学发光法检测。结果浓缩法检测46份标本阳性例数42例,最低检出浓度0.1IU/mL,ELISA检出阳性标本33例,最低检出浓度0.5IU/mL,浓缩法灵敏度和检出率明显高于ELISA(P<0.01)。结论浓缩法可明显提高ELISA检测HBsAg的灵敏度和阳性检出率,具有一定的研究意义。

  • 标签: HBsAg 灵敏度 磁珠浓缩法
  • 简介:摘要目的探讨利用免疫富集技术联合巢式RT-PCR。方法检测非小细胞肺癌患者(NSCLC)手术前后外周血微转移的预后价值。方法应用免疫联合巢式LUNX-mRNART-PCR检测80例NSCLC患者手术前后外周血微转移,研究其与临床和病理特征的相关性和预后价值。结果手术前和手术后,LUNX表达阳性率分别为41例(51.3%)和28例(35.0%);手术前LUNX表达阳性率与病理分期有关。手术后LUNX表达阳性率与病理分期、病理类型、体重减轻和KPS评分有关。手术前LUNX表达阳性和阴性患者的4年生存率分别为26.8%和35.9%;手术后LUNX表达阳性和阴性患者的4年生存率分别为17.8%和38.5%;多因素分析显示,手术后LUNX表达阳性是一独立不良预后因素。结论免疫富集技术联合巢式RT-PCR方法是检测NSCLC患者外周血微转移的敏感方法,手术后检测微转移有预后价值;微转移阴性患者比阳性患者预后好

  • 标签: 肺肿瘤 免疫磁珠 巢式PCR 微转移 预后
  • 简介:摘要应用分离酶联免疫测定法测定血清中TSH、T3、T4、FT3、FT4五项指标。健康人组(n=100),建立本实验室正常参考值。各型甲状腺机能亢进人组(n=68),甲状腺机能减退人组(n=22);各种急性或慢性全身性疾病的患者,其中,心肌梗塞12人;充血性心力衰竭8人;肝炎、肝硬化10人;脑血管疾病11人;呼吸道感染21人。结果表明健康人组血清TSH水平略呈偏态分布,第2.5~97.5百分位数范围为(0.29~5.70)mIU/L;血清T3水平呈正态分布,X=2.76、S=1.02、正常参考值(1.74~3.78)mmol/L;血清T4水平呈正态分布X84.82、S=26.23、正常参考值范围(58.59~111.05)mmol/L;血清FT3水平呈正态分布,X=2.06、S=0.88,正常参考值范围(1.18~2.94)pmoL/L;血清FT4水平呈正态分布X=8.53、S=3.03,正常参考值范围(5.5~11.56)pmol/L。甲亢初诊患者TSH水平降低,T3、T4、FT3、FT4有不同程度升高;甲状腺机能减退患者TSH水平升高,T3、T4、FT3、FT4有不同程度降低;各种急性或慢性全身性疾病患者TSH水平与正常组无显著差异,T3、FT3、FT4正常或略低,T4正常或升高;另外,实验观察TSH、FT3、FT4三项指标诊断甲功在敏感性和特异性上超过T3、T4两项指标。分离酶联免疫法是一种灵敏、特异、有效、且无放射污染的免疫化学检测技术。

  • 标签: 腺原氨酸(T3) 四碘甲状腺原氨酸(T4) 游离三碘甲状腺原氨酸(FT3) 游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)
  • 简介:摘要:免疫技术在进行生物学研究时,被学者们广泛的应用,同时在进行精子特异性抗体的制备时,从而达到对精阴混合斑中精子和女性阴道上皮细胞分离。本文对免疫技术研究进展与应用、精子抗原研究进展、法医学应用前景进行了阐述,根据其免疫技术在生物学研究中的应用,希望能够在法医学的研究中起到至关重要的作用。

  • 标签: 精子抗原 免疫磁珠技术 法医学 应用
  • 简介:法核酸自动提取可以简单、快速、高效和经济地实现各种标本核酸的自动提取。本文概述了核酸自动提取的原理及分类,法核酸自动提取原理、分类、特点及其在分子生物学领域的应用。

  • 标签: 磁珠 核酸 NAT 核酸自动提取仪 分子生物学
  • 简介:摘要:目的:通过研究找出式提取(下文称“提取”)污染后最佳处理方式。方法:将实验室中被严重污染的所有提取分两种方式处理,一种通过紫外线、化学消毒剂方法处理,对污染的提取紫外线照射2h后,喷洒核酸清除剂,擦净后用1000mg/L含氯消毒剂擦拭提取内各个部件;另一种通过物理方法处理,将提取打开后置于室外通风处或用较大功率风扇进行通风。通过两种不同处理方式的比较,观察对提取核酸污染的处理效果。结果:通过两种不同处理方式的比较,室外通风或用较大功率风扇通风处理提取污染比紫外线、化学消毒剂处理更有效。结论:提取污染可以通过室外通风或者用较大功率风扇进行处理。

  • 标签: 新型冠状病毒,提取仪,污染
  • 简介:摘要引进加拿大BiochemImmunosystems公司的分离酶联免疫技术(MAIA)做甲状腺激素测定,灵敏度可达1×10=12g检测级。经一年的实验,本文认为MAIA是一种灵敏、快速、特异性强、重复性好、显色稳定的试验。本文用来自内蒙古各地的153名健康人做正常参考值测定,与上海和网外正常参考值比较,结果发现内蒙地区男、女甲状腺激素水平与上海地区比较有显着差异,P<0.01,促甲状腺激素(TSH)无差异。内蒙地区与国外正常参考值比较除总T3无差异外,P>0.05,其余均有显著性差异,P<0.01。用上海地区正常参考值,判定328名患者甲状腺激素结果异常,而套用内蒙地区正常参考值,328名中只有161名甲状腺激素异常,167名结果正常。

  • 标签: 磁分离 酶联免疫 甲状腺激素
  • 简介:摘要目的探讨叶酸偶联量子点(FA-QD)免疫脂质法检测卵巢上皮性癌循环肿瘤细胞(CTC)的有效性及CTC与患者临床病理特征的相关性。方法选取2019年8月至2020年1月在山西省人民医院就诊的卵巢上皮性癌患者67例。将卵巢癌SKOV-3细胞分为5个细胞数梯度(0、100、150、200、300个),比较上皮细胞黏附分子(EpCAM)免疫法(单标法)和FA-QD免疫脂质法(双标法)对CTC的检出率。应用FA-QD免疫脂质法检测卵巢癌患者外周血中CTC数量,荧光显微镜下见阳性CTC者即为CTC阳性患者,分析CTC与患者临床病理特征及肿瘤标志物的关系。结果FA-QD免疫脂质法对SKOV-3细胞CTC的平均捕获率高于EpCAM免疫法(83.4%比70.3%)。在67例卵巢癌患者中,Ⅰ~Ⅱ期患者CTC阳性者比例为30.0%(3/10),Ⅲ期为91.9%(34/37),Ⅳ期为95.0%(19/20),差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移患者CTC阳性者比例为97.1%(33/34),高于淋巴结未转移者的69.7%(23/33),差异有统计学意义(P<0.05);人附睾蛋白4(HE4)>110 pmol/L患者CTC阳性者比例为58.8%(10/17),低于HE4≤110 pmol/L患者的92.0%(46/50),差异有统计学意义(P=0.005);而年龄、绝经情况、病理分化程度、远处转移、癌胚抗原125(CA125)、癌胚抗原199(CA199)、血清癌胚抗原(CEA)分层患者间CTC阳性患者比例差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论FA-QD免疫脂质法可有效检测卵巢上皮性癌患者外周血CTC。卵巢上皮性癌患者CTC水平与淋巴结转移、临床TNM分期及HE4水平有关。

  • 标签: 卵巢肿瘤 肿瘤细胞,循环 免疫磁化分离 量子点
  • 简介:摘要目的探讨免疫负性富集结合免疫荧光抗体技术检测卵巢癌患者外周血CTCsDE的临床意义。方法健康志愿者6例、良性卵巢病变4例纳入常规组,卵巢癌患者32例纳入研究组。开展卵巢癌SKOV-3细胞体外培养,以一定配比加入到常规组外周血中,通过免疫负性富集、免疫荧光抗体技术检测循环肿瘤细胞。结果CTCs检测回收率介于65%-80%,r2=0.998,Y=0.782X-1.408。常规组CTCs阳性检出率为0,研究组CTCs阳性检出率为53.13%,有统计学意义(p<0.05)。卵巢癌远处转移与CTCs阳性率呈正相关。结论对卵巢癌患者外周血CTCs进行免疫负性富集结合免疫荧光抗体技术检测的价值较高。

  • 标签: 卵巢癌 免疫荧光抗体技术 负性富集 CTC
  • 简介:摘要目的探讨测定阴道液hCG含量对胎膜早破(PROM)的辅助诊断价值。方法采用分离酶联免疫测定技术(MAIA),测定正常孕妇和胎膜早破孕妇阴道液hCG浓度,并对二者进行比较。结果正常孕妇与胎膜早破孕妇阴道液hCG(±SD)分别为286±14.4IU/L,450.6±135.3IU/L;二者的实测范围分别为1~140.6IU/L,225.4~921.8IU/L,二者间有非常显著性差异(P<0.01)。测定阴道液hCG水平,对胎膜早破的诊断价值以hCG>50IU/L为诊断阈值,其敏感性为100%,特异性为92.5%,阳性预测值为92.7%。阴性预测值为100%。结论应用分离酶联免疫测定技术,测定阴道液hCG水平,对胎膜早破有非常高的辅助诊断价值;而且该法操作简便易行,对人体及环境无害,在中、基层医院都可开展,可作为诊断胎膜早破的一种常规方法。

  • 标签: 磁分离酶联免疫 hCG 胎膜早破
  • 简介:摘要目的探讨测定阴道液hCG含量对胎膜早破(PROM)的辅助诊断价值。方法采用分离酶联免疫测定技术(MAIA),测定正常孕妇和胎膜早破孕妇阴道液hCG浓度,并对二者进行比较。结果正常孕妇与胎膜早破孕妇阴道液hCG(±SD)分别为286±14.4IU/L,450.6±135.3IU/L;二者的实测范围分别为1~140.6IU/L,225.4~921.8IU/L,二者间有非常显著性差异(P<0.01)。测定阴道液hCG水平,对胎膜早破的诊断价值以hCG>50IU/L为诊断阈值,其敏感性为100%,特异性为92.5%,阳性预测值为92.7%。阴性预测值为100%。结论应用分离酶联免疫测定技术,测定阴道液hCG水平,对胎膜早破有非常高的辅助诊断价值;而且该法操作简便易行,对人体及环境无害,在中、基层医院都可开展,可作为诊断胎膜早破的一种常规方法。

  • 标签: 磁分离酶联免疫 hCG 胎膜早破