简介：摘要目的指导工作人员在PCR实验室日常工作中更好的了解掌握PCR的操作。

简介：目的：建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法：采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果：建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCRBuffer缓冲液2.5μL,MgCl22.0mmol·L-1,dNTPs0.5mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA为30ng;扩增程序为：94℃预变性5min,然后94℃变性30s,51.7℃退火1min,72℃延伸1.5min,共计35个循环,循环结束后在72℃延伸7min,4℃保存.结论：建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.

简介：目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物，建立染料法（SYBRgreenI）实时荧光定量PCR，评估其灵敏性及特异性；并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r2=0．99），灵敏性评估显示20¨l体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测，最低检出浓度为2拷贝／¨l，比普通PCR检测方法提高1～2个数量级，并且具有较好的重复性；建立的SYBRI染料法具有良好的特异性，与立氏立克次体R株等其他5种立克次体，以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增；用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器，以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测，其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本，结果脾脏中东方体检出量最多，肝脏和肾脏次之，血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性，适合各种样本中东方体的快速检测，可用于实验室的快速诊断。

简介：摘要目的探讨应用荧光定量PCR检测痰结核杆菌DNA的临床意义。方法随机抽取2008年2月～2013年10月间我院收治肺结核（经初步诊断）患者80例，同时抽取其他肺病患者60例，分别直接涂片痰浓集进行结核杆菌培养和FQ-PCR检测TB-DNA。结果痰标本采用FQ-PCR法检测检查结核杆菌灵敏度最高，比直接涂片、培养、浓集涂片检测方法明显灵敏，且差异显著(P<0.05)，具有统计学意义。结论FQ-PCR法检测痰结核杆菌TB-DNA方法更加精准，值得临床广泛应用。

简介：摘要自20实际80年代PCR技术问世以来，该项技术以在医学及生物学等多个领域广泛应用，为医学疾病的精确诊断创造了条件。但在PCR技术的应用阶段，存在各类隐患如临床标本的处理和污染的控制等，成为PCR技术应用中不可忽视的问题，也是PCR技术成功的关键。因此，在现代医学中对PCR技术的应用提出了更高的要求，必须提高医学检验人员临床诊治水平，同时提高PCR的准确度和可信度，只有这样才能切实保障人民安全健康，防止医疗纠纷的发生。本文通过对PCR技术在医学检验中的应用的深入研究，提出了该项技术在医学检验中的质量控制方法及相关应用。

简介：摘要目的采用ELISA法和荧光RT-PCR法分别检测手足口病EV71，比较两种方法的差异性。方法严格按ELISA法和荧光RT-PCR法的操作要求分别检测221例临床标本手足口病EV71。结果两种方法检测EV71的结果221份标本，ELISA法阳性51例，荧光RT-PCR法阳性55例。两种方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论本实验结果表明，两种方法的灵敏度分别为28.2%和30.4%，特异性均为100%，两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。

简介：以往在血型血清学疑难配血中往往通过血型定型（AB0正反定型、RhDCE定型等），抗体筛查（筛选细胞、谱细胞等），抗体Coombs及吸收放散实验等步骤一般即可完成相应的配血过程。但在血清学检测条件不充分时如稀有血型抗体缺乏、谱细胞的谱型不全时等，对于稀有表型及存有高频抗原抗体的血液的配型，常规的检测方法与路径有时就显不够。此时如配合以血型基因分型检测可能的血型表型基因并判断相应的抗体存在，应当是解决问题的一个路径。我室最近在Diego系统抗体缺乏、谱细胞谱不完全的情况下，结合基因分型的方法，解决了2份存有抗高频抗原Dib抗体的定型与输血问题。

简介：

简介：目的：建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法：根据马尔尼菲青霉ITS序列，设计并合成引物，通过常规PCR扩增目标序列后，将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中，转化大肠杆菌JM109，经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模板建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线，得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式，并做灵敏性、特异性试验。结果：荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系，溶解曲线特异，相关系数为1.938，最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论：建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法，为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。

简介：目的探讨溃疡性结肠炎对大鼠胃肠道微生物多样性影响，为治疗溃疡性结肠炎提供可靠依据。方法采用2，4-二硝基氯苯乙酸复合法对健康SD大鼠进行溃疡性结肠炎造模；运用CTAB—SDS法提取肠道微生物总DNA，通过PCR．DGGE分析溃疡性结肠炎大鼠之间胃肠道微生物多样性差异。结果溃疡组、用药组和正常组大鼠的消化道中，不同部位细菌Shannon~数变化较大（1．64-3．05），结肠中Shannon指数最高，其次是胃，小肠最低。在结肠，不同组的细菌多样性Shannon指数变化幅度不大，以用药组最高（3．05），其次溃疡组（2．98），正常组2．95，说明大鼠结肠在健康状态下细菌多样性最低，结肠炎后会发生一定的变化。此外，发现病变后的大鼠胃中拟杆菌属、梭菌属、普氏菌属、紫单胞菌属等厌氧细菌增加，病变后的结肠中乳杆菌属细菌明显减少，紫单胞菌属和梭菌属细菌明显增加；病变后小肠中部分乳杆菌种类消失，同时梭菌属和紫单胞菌属等不常见菌群的出现。结论溃疡性结肠炎大鼠胃、小肠、结肠中有益菌乳杆菌明显减少，普氏菌属、紫单胞菌属、梭菌属等明显增多，这些菌属可作为条件致病菌引起内源性感染，可能是造成溃疡性结肠炎的重要原因。

简介：摘要目的分析实时PCR和颗粒凝集法检测儿童呼吸道肺炎支原体感染的价值。方法资料随机选自2013年7月至2014年7月本院儿科治疗的呼吸道感染患儿513例，采用颗粒凝集法与实时PCR，分别检测患儿的肺炎支原体抗体（MP-Ab）与肺炎支原体核酸（MP-DNA），对比分析两种方法的检测结果，并分析不同季节的儿童呼吸道肺炎支原体感染率。结果应用实时PCR检测的MP-Ab阳性率明显高于采用颗粒凝集法检测的MP-DNA阳性率，两种检测方法的一致性不高，对比差异具有统计学意义（P＜0.05）；儿童冬季的呼吸道肺炎支原体感染率高于其他三个季节，对比差异较为明显（P＜0.05）。结论实时PCR检测呼吸道肺炎支原体感染率高于颗粒凝集法检测，且儿童的肺炎支原体感染具有季节性差异。

简介：目的：对现有的2种国产抗-HCVELISA试剂检出的反应性标本进行Realtime-PCR扩增,对结果进行分析,比较2种方法的检出率。为制定ELISA检测结果假阳性的献血者献血资格的恢复措施提供依据。方法：对日常工作中的检测标本用2种抗-HCVELISA两步法试剂做初检,反应性结果再次双孔复试。对任何一种试剂经复试检测后仍为反应性的标本进行Realtime-PCR扩增,对所有检测结果进行分析。结果：共检测无偿献血标本63169份,其中检出抗-HCV反应性标本206份,对206份标本进行Realtime-PCR扩增,共扩增出91例HCV-RNA阳性标本,53例科华试剂单反应性标本中仅2例HCV-RNA结果为阳性,41例新创试剂单反应性标本中6例HCV-RNA结果为阳性。ELISA试剂检出的标本S/CO值在不同的区间内的,都有HCV-RNA为阳性的标本。结论：ELISA试剂检测出的抗-HCV标本很多可能为假阳性,特别是单侧试剂呈反应性的标本。但即使ELISA检测S/CO值仅在灰区的单试剂反应性标本,仍不能排除为HCV感染者。

简介：摘要目的针对实时定量PCR法分析2型糖尿病患者肠道乳酸杆菌军中数量的改变进行观察研究。方法选择我院收治的糖尿病患者68例，健康志愿者66例，对糖尿病患者的血糖、血脂代谢指标、炎症指标进行检测，并分别收集所有研究对象的粪便提取细菌总DNA，通过实时定量PCR方法测定目标细菌的拷贝数。结果通过对68例糖尿病患者进行实时定量PCR方法进行目标细菌数量的测定，其糖尿病足患者的各项菌种指标含量显著高于对照组，结论2型糖尿病患者肠道总乳酸杆菌及其某些具体菌种数量增多及乳酸杆菌数量的改变对血脂造成一定影响。

简介：摘要目的对比观察荧光PCR技术和细菌培养法用于产前筛查B族链球菌（GBS）感染的检验效果。方法收集500例孕34-37周孕妇阴道肛门拭子，分别进行GBS核酸检测（PCR）及细菌培养检测，对比两种方法的阳性检出率、敏感性、特异性、准确性。结果500例样本中，PCR技术检测GBS阳性43例，阳性率8.6%，细菌培养法检测GBS阳性26例，阳性率5.2%，差异有显著性（P<0.05）；与测序法对照，PCR技术正确占89.5%，细菌培养法正确占10.5%，差异有显著性（P<0.05）；PCR技术与细菌培养法的敏感性、特异性分别为100%、99.6%和61.0%、99.8%，二者敏感性差异显著（P<0.05）。结论产前B族链球菌检测，PCR技术明显优于细菌培养法，其阳性率高、准确性大、敏感性好，检测速度更快。