简介：摘要目的探讨紫檀芪在草酸诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生内质网应激和凋亡的作用。方法2019年1月至2020年1月，取HK-2细胞分为对照组(基础培养基培养)、草酸组(含4 mmol/L草酸的基础培养基培养)、紫檀芪干预组(含草酸4 mmol/L＋紫檀芪5、10、20 μmol/L的混合培养基共同培养)，3组细胞培养12 h后进行如下实验。CCK-8实验检测细胞活力，检测乳酸脱氢酶及抗氧化能力相关指标(还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶、总抗氧能力)；蛋白质印迹法检测细胞内ATF6、GRP78、DDIT3、caspase12和裂解的caspase3/9的蛋白表达情况。3组在进行下述实验时，紫檀芪干预组中仅用紫檀芪浓度10 μmol/L：检测线粒体膜电位、caspase3酶活性、细胞凋亡率、活性氧水平，实时荧光定量PCR检测细胞内ATF6、GRP78、DDIT3的mRNA表达情况。结果CCK-8实验和及乳酸脱氢酶检测结果显示，草酸组较对照组的细胞活力[(45.6±3.1)%与100.0%，P<0.001]明显下降，乳酸脱氢酶[(330.2±11.1)U/L与(92.6±6.7)U/L，P<0.001]明显上升；紫檀芪干预组(5、10、20 μmol/L)的细胞活力[(57.2±1.7)%、(67.2±3.4)%、(78.9±1.8)%]较草酸组均明显上升(均P<0.05)，乳酸脱氢酶[(288.1±4.3)U/L、(260.9±5.5)U/L、(202.6±10.2)U/L]较草酸组均明显下降(均P<0.05)。丙二醛、还原型谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、总抗氧能力五项生化指标检测结果显示的细胞损伤状态与CCK-8和乳酸脱氢酶实验结果一致。活性氧检测结果显示，草酸组较对照组的活性氧水平(76.3±4.9与6.2±1.7，P<0.01)明显上升；紫檀芪干预组(10 μmol/L)的活性氧水平(39.5±5.4)较草酸组明显下降(P<0.01)，流式细胞术和caspase3酶活性检测结果显示3组细胞凋亡率和caspase3活性的上升趋势与活性氧水平变化趋势一致。线粒体膜电位结果显示，草酸组较对照组的线粒体膜电位(0.76±0.15与7.84±0.26，P<0.01)明显下降，紫檀芪干预组(10 μmol/L)的线粒体膜电位(2.26±0.27)较草酸组明显上升(P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示，草酸组较对照组的ATF6、DDIT3、GRP78、caspase12和裂解的caspase3/9的蛋白相对表达量显著上升(均P<0.05)；紫檀芪干预组(5、10、20 μmol/L)较草酸组的ATF6、DDIT3、GRP78、caspase12、裂解的caspase3/9的蛋白相对表达量显著下降(均P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示3组ATF6、DDIT3和GRP78的mRNA表达趋势与蛋白质印迹法结果一致。结论紫檀芪可以有效抑制草酸诱导的HK-2细胞发生内质网应激和凋亡。

简介：摘要目的探讨紫檀芪对人乳头瘤病毒16（HPV16）整合感染宫颈上皮细胞（H8细胞）生长、凋亡和自噬的影响。方法紫檀芪与H8细胞共培养24 h和48 h，使用CCK8法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测H8细胞凋亡和细胞周期，荧光显微镜观察MDC染色后细胞自噬形态学改变，Western印迹检测各组细胞周期相关蛋白（cyclinD1）、凋亡相关蛋白（caspase3、caspase9）、自噬相关蛋白（Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、ATG5、P62）、HPV致癌基因蛋白（E6、E7蛋白）的表达。采用单因素方差分析、重复测量方差分析和LSD-t检验分析组间差异。结果对照组（0）、25、50、75、100 μmol/L紫檀芪作用H8细胞48 h后，各组细胞相对生长率（100.00% ± 1.56%、99.02% ± 4.97%、93.59% ± 2.01%、81.28% ± 4.90%、69.17% ± 7.56%）差异有统计学有意义（F = 77.22，P < 0.05），随着浓度增加生长率渐降低，各紫檀芪组与对照组比较，均P < 0.05。紫檀芪作用H8细胞24 h后，各组细胞G1期、G2期、S期细胞比例差异均有统计学意义（F = 7 845.00、51.14、266.50，均P < 0.05），各紫檀芪组G1期、G2期细胞比例均高于对照组，S期细胞比例均低于对照组（均P < 0.05）。紫檀芪作用48 h后，0 ~ 100 μmol/L组细胞凋亡率分别为11.58% ± 0.50%、14.66% ± 0.22%、13.50% ± 0.49%、14.56% ± 0.19%、15.30% ± 0.76%，各紫檀芪组均高于对照组（均P < 0.05）。紫檀芪作用24 h后细胞MDC染色显示，对照组中仅有少量H8细胞检测到高亮点状荧光，各紫檀芪组高亮点状荧光的自噬小体较对照组增多。Western印迹显示，紫檀芪作用24 h、48 h后各组细胞cyclinD1、caspase3、caspase9、Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、ATG5、P62、E6、E7蛋白相对表达水平差异均有统计学意义（均P < 0.05）。与对照组比较，紫檀芪处理后cyclinD1表达降低，caspase3、caspase9表达升高，Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、ATG5、P62升高，E6、E7表达降低（个别浓度组与对照组比较P > 0.05，多数组间比较P < 0.05）。结论紫檀芪可抑制H8细胞增殖，促进其凋亡和自噬，抑制E6、E7致癌基因的表达。