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简介：摘要目的探讨不同化疗药物联合DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-dC）对肺腺癌细胞A549细胞凋亡的影响。方法采用前瞻性随机对照研究方法，分别使用顺铂、紫杉醇、吉西他滨及5-Aza-dC联合药物处理A549细胞。根据药物干预方式的不同分为对照组、顺铂联合紫杉醇（TP）组、顺铂联合吉西他滨（GP）组及5-Aza-dC分别联合TP、GP用药组。使用CCK-8法检测各组药物对A549细胞增殖能力的影响；Transwell迁移、侵袭实验检测各组药物对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。实时荧光定量聚合酶链式反应检测各药物处理对凋亡基因表达水平的影响。对不同药物处理组细胞增殖程度的比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t法。结果TP组24、48、72 h不同时间点对肺腺癌细胞的抑制率分别为（20.00±4.23）%、（35.00±2.80）%，（56.00±3.11）%；5-Aza-dC联合TP组对肺腺癌细胞的抑制率显著增加，在24、48、72 h不同时间点分别为（38.00±3.80）%、（50.00±3.25）%、（93.00±4.33）%。GP组24、48、72 h不同时间点对细胞的抑制率分别为（33.00±5.10）%、（54.00±3.80）%、（74.00±2.82）%；而5-Aza-dC联合GP方案可显著抑制细胞生长，24、48、72 h不同时间点对细胞的抑制率分别为（54.00±3.00）%、（67.00±5.30）%、（95.00±1.13）%。同一药物对肺腺癌细胞的抑制作用随着时间的延长而增强（TP组：F=35.93，P<0.001；5-Aza-dC联合TP组：F=97.33，P<0.001；GP组：F=41.73，P<0.001；5-Aza-dC联合GP组：F=79.00，P<0.001），且不同时间点，两两比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。5-Aza-dC联合TP、GP化疗方案可抑制肺腺癌细胞A549的迁移和侵袭，且比TP或者GP组的抑制效果更强；5-Aza-dC联合GP方案与单独应用GP方案相比，细胞凋亡蛋白Caspase 8的表达水平显著升高（t=5.87，P=0.004）；5-Aza-dC联合TP方案与单独应用TP方案相比，细胞凋亡蛋白Caspase 8（t=3.94，P=0.017）、Caspase 6（t=5.81，P=0.004）和BCL2结合蛋白3（BBC3）（t=6.53， P=0.003）的表达水平升高。结论5-Aza-dC可能作为化疗增敏剂来增加肺腺癌细胞的敏感性。

简介：摘要目的探讨microRNA-10a(miR-10a)对肝脏微环境中肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)的增殖、迁移以及促炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素1(IL-1)β mRNA表达水平的影响。方法收集同一结肠癌患者癌旁正常肝组织和转移至肝脏的病灶组织，采用组织块法建立原代人肝正常成纤维细胞(NFs)和原代TAFs。通过形态学观察和细胞免疫荧光染色对NFs和TAFs进行鉴定，并通过流式细胞术鉴定二者的纯度。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NFs和TAFs中miR-10a的表达水平，并在低表达miR-10a的细胞中过表达miR-10a。随后采用CCK-8实验、划痕实验和RT-qPCR分别检测miR-10a对该细胞增殖、迁移能力以及IL-6、IL-8、IL-1β mRNA表达水平的影响。结果细胞免疫荧光染色显示人细胞角蛋白18(CK-18)在NFs和TAFs中均不表达；成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)在两细胞中均表达；α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在NFs中弱表达，在TAFs中强表达。流式细胞术显示NFs与TAFs中α-SMA阳性率为95.0%和95.3%。miR-10a在TAFs的表达水平为NFs的0.65倍(P<0.01)。过表达miR-10a后TAFs在第3、4和5天增殖能力显著低于同时期的阴性对照组细胞(P<0.05，P<0.05，P<0.01)；TAFs的迁移能力在24 h和48 h分别较阴性对照组降低25%和15%(P<0.01，P<0.05)，TAFs中IL-6、IL-8、IL-1β的表达水平分别较阴性对照组降低54%、27%和42%(P<0.01，P<0.01，P<0.05)。结论miR-10a在TAFs中呈低表达，miR-10a过表达抑制了TAFs的增殖和迁移，并降低炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β mRNA的表达，这可能是TAFs抑制肝脏形成转移灶的重要因素。